Nrf2基因缺失对子鼠肺组织发育的影响研究.pdf

山东医学高等专科学校学报2 0 2 3,4 5(4):2 5 1-2 5 4J o u r n a l o f S h a n d o n g M e d i c a l C o l l e g eN r f 2基因缺失对子鼠肺组织发育的影响研究孙晓琳1,庞庆丰2,陈小燕1,张艳丽1(临沂市妇幼保健院,山东 临沂 2 7 6 0 0 3;2江南大学医学院,江苏 无锡 2 1 4 0 0 0)摘要:目的 探究N r f 2基因缺失对子鼠肺组织发育的影响。方法 分别采用C 5 7 B L/6孕鼠(WT)和N r f 2基因缺失孕鼠(N r f 2-/-)构建I UG R子鼠模型。根据出生体重将子鼠分为四组:WT N o r m a l,WT I UG R,N r f 2-/-N o r m a l,N r f 2-/-I UG R。观察各组体重变化,出生后2、4周分别取材,观察脑/肝比和肺组织形态变化;肺组织切片免疫组化染色进行C D 3 1阳性细胞计数;q R T-P C R检测肺组织V E G F 和V E F R 2 mR NA的相对水平。结果 N r f 2-/-I UG R子鼠出生体重、7 d、1 4 d体重均显著低于WT I UG R子鼠(P0.0 5);1 4 d时N r f 2-/-子鼠脑/肝比均低于WT子鼠,2 8 d时N r f 2-/-N o r m a l子鼠高于WT N o r m a l子鼠(P0.0 5)。HE染色显示,N r f 2-/-子鼠肺泡塌陷和肺泡壁增厚的现象较WT子鼠更加严重。N r f 2-/-小鼠与WT小鼠的肺泡平均线性截距与C D 3 1阳性细胞计数均有显著差异(P0.0 5)。1 4 d时,与WT子鼠相比,N r f 2-/-子鼠肺组织中V E G F 和V E F R 2 的mR NA的表达均显著上调(P0.0 5)。结论 N r f 2基因缺失可加重子鼠肺组织破坏和肺血管新生减少,诱导严重的肺发育不良。关键词:宫内发育受限;肺发育;核因子红细胞系2相关因子2 中图分类号:R 3 9 4.1 文献标识码:A文章编号:1 6 7 4-0 9 4 7(2 0 2 3)0 4-0 2 5 1-0 4d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 4-0 9 4 7.2 0 2 3.0 4.0 0 5基金项目:山东省自然科学基金资助(N o.Z R 2 0 2 1 MH 3 3 3)作者简介:孙晓琳,女,硕士,副主任医师,研究方向:新生儿肺发育不良。收稿日期:2 0 2 3-0 4-0 9T H E E F F E C T S O F N U C L E A R F A C T O R E R Y T H R O I D 2 R E L A T E DF A C T O R 2 G E N E D E L E T I O N O N L U N G T I S S U ED E V E L O PME N T O F N E O N A T A L M I C ES UN X i a o-l i n1,P ANG Q i n g-f e n g2,CHEN X i a o-y a n1,ZHANG Y a n-l i1(1 L i n y i M a t e r n a l a n d C h i l d H e a l t h H o s p i t a l,L i n y i,C h i n a 2 7 6 0 0 3;2 M e d i c a l C o l l e g e o f J i a n g n a n U n i v e r s i t y,W u x i,C h i n a 2 1 4 0 0 0)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T o e x p l o r e t h e e f f e c t s o f N r f 2 g e n e d e l e t i o n o n l u n g t i s s u e d e v e l o p m e n t o f n e o n a t a l m i c e.M e t h o d s C 5 7 B L/6 p r e g n a n t m i c e(WT)a n d N r f 2-/-p r e g n a n t m i c e w e r e u s e d t o b u i l d m o d e l m i c e o f I UG R.A c c o r d i n g t o b i r t h w e i g h t,t h e n e o n a t a l m i c e w e r e d i v i d e d i n t o f o u r g r o u p s:WT N o r m a l,WT I U-G R,N r f 2-/-N o r m a l,a n d N r f 2-/-I UG R.B o d y w e i g h t c h a n g e s w e r e r e c o r d e d w e e k l y.C e r e b r u m t o l i v e r r a t i o a n d m i c r o s c o p i c m o r p h o l o g y o f l u n g t i s s u e w a s m e a s u r e d a t 2,4 w e e k s a f t e r b i r t h.I mm u n o h i s t o-c h e m i c a l s t a i n i n g w a s u s e d t o o b s e r v e t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f C D 3 1 p o s i t i v e c e l l s i n l u n g t i s s u e s e c t i o n a n d q R T-P C R w a s u s e d t o d e t e c t t h e e x p r e s s i o n o f V E G F a n d V E G F R 2 mR NA i n l u n g t i s s u e.R e s u l t s B o d y w e i g h t o f N r f 2-/-I UG R m i c e a t d a y 0,7,1 4 a f t e r b i r t h w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h o s e o f WT I UG R m i c e(P0.0 5).A t d a y 1 4 a f t e r b i r t h,c e r e b r u m t o l i v e r r a t i o o f N r f 2-/-n o r m a l m i c e w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t o f WT n o r m a l m i c e,b u t a t d a y 2 8 t h e c e r e b r u m t o l i v e r r a t i o o f N r f 2-/-n o r m a l m i c e w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t o f WT n o r m a l m i c e(P0.0 5).HE s t a i n i n g s h o w e d t h a t m o r e c o l l a p s e a n d t h i c k e r a l v e o l a r w a l l w a s o b s e r v e d i n t h e l u n g t i s s u e s e c t i o n o f N r f 2-/-m i c e t h a n t h o s e o f WT m i c e.T h e r e w a s s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n c e i n t h e m e a n l i n e a r i n t e r-c e p t o f a l v e o l a r a n d C D 3 1 e x p r e s s i o n b e t w e e n WT m i c e a n d N r f 2-/-m i c e.A t d a y 1 4,c o m p a r e d t o WT g r o u p,mR NA e x p r e s s i o n o f V E G F-a n d V E F R 2 i n l u n g t i s s u e o f N r f 2-/-m i c e w a s s i g n i f i c a n t l y u p-r e g-u l a t e d(P0.0 5).C o n c l u s i o n N r f 2 g e n e d e l e t i o n a f f e c t e d l u n g d e v e l o p m e n t o f m i c e w i t h m o r e l u n g t i s s u e d e s t r u c t i o n a n d l e s s l u n g a n g i o g e n e s i s.K e y w o r d s:I n t r a u t e r i n e g r o w t h r e s t r i c t i o n;L u n g d e v e l o p m e n t;N u c l e a r f a c t o r e r y t h r o i d 2 r e l a t e d f a c-t o r 2 宫 内 发 育 受 限(I n t r a u t e r i n e g r o w t h r e s t r i c-t i o n,I UG R)新生儿易出现肺发育不良。有研究发现,焦亡与各种肺疾患的发生密切相关1-3。核因子红细胞系2相关因子2(N r f 2)对胚胎的发育具有保护作用,在I UG R胎盘中N r f 2表达降低4。同时,N r f 2基因敲除导致胎盘营养交换的能力降低,使小鼠出现严重的神经功能缺陷5。N r f 2激动剂能够抑制肺组织的焦亡,从而有效减轻脂多糖诱导的急性肺损伤6-7。但N r f 2缺失对I UG R子鼠肺组织发育的影响尚不清楚。为此,本研究通过构建缺氧诱导的N r f 2基因敲除I UG R孕鼠模型,研究N r f 2基因缺失对子鼠肺发育的影响。1 材料与方法1.1 材料 实验动物:81 2周龄的成年C 5 7 B L/6小鼠由江南大学医学院动物中心提供,体质量2 03 0 g;N r f 2-/-小鼠由南京大学模式生物研究所提供,项目编号XM 0 0 2 7 8 3,品系编号T 0 0 2 6 2 5。整个动物实验期间严格遵循实验动物3 R原则。试剂与仪器:T r i z o l、逆转录试剂盒等购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司;苏木素-伊红(H&E)染液购自南京建成生物工程研究所;H i e f f q P C R S Y B R G r e e n M a s t e r M i x等购自翌圣生物科技(上海)股份有限公司;多聚甲醛、甘氨酸、T r i s碱、曲拉通、吐温、双氧水、三氯甲烷、异丙醇、乙醇和甲醇等购自国药集团药业股份有限公司;抗C