MYO7A基因突变分析与儿童先天性耳聋的相关性研究.pdf

实验与检验医学 2023 年 4 月第 41 卷第 2 期 Experimental and Laboratory Medicine,Apr.2023,Vol.41,No.2MYO7A 基因突变分析与儿童先天性耳聋的相关性研究邓哲渊郑州大学附属儿童医院袁河南 郑州 450000冤先天性耳聋是指因异常母体妊娠尧 分娩过程或遗传因素造成的耳聋袁 可分为遗传性和非遗传性两大类遥 根据病理类型又可分为传导性尧感音神经性和混合性袁其中以感音神经性耳聋最为多见1-2遥导致先天性耳聋的原因复杂袁主要分为遗传因素尧产期损害和孕期原因三类袁 在听觉螺发育的关键时期孕妇遭受流感病毒或腮腺炎病毒等感染尧使用链霉素或庆大霉素等具有耳毒性药物尧 分娩时胎儿遭受外伤尧早产或难产引起缺氧袁上述情况均会损害胎儿的耳蜗而造成耳聋袁 本研究主要集中探讨遗传因素与儿童先天性耳聋的关系3-4遥 人肌球蛋白 7A(Human myosin 7A,MYO7A)基因是人较摘要:目的 分析 MYO7A 基因突变与儿童先天性耳聋相关性遥 方法 选取 2019 年 5 月至 2021 年 5 月于本院就诊的先天性耳聋患儿 48 例作为耳聋组袁另选取同期体检结果呈健康的儿童 48 例作为对照组遥 使用 Madsen502 便携式听力计测试两组研究对象纯音听阈均值渊PTA冤曰采用 Titan IMP440 中耳分析系统测试两组研究对象宽频声导抗渊WBT)曰采集所有研究对象外周血检测 MYO7A 基因突变遥 结果 耳聋组患者各频率下 PTA 明显高于对照组渊P约0.05冤曰耳聋组患者 0.54.0 kHz 各个频率下 WBT 吸收率均明显低于对照组渊P约0.05冤曰耳聋组 c.462 位点基因型 CC尧CA 和 AA 的分布频数与对照组有显著差异袁等位基因 C 的频率明显低于对照组渊P约0.05冤曰耳聋组患者 MYO7A 基因 EX43_46Del 突变人数明显多于对照组渊P约0.05冤曰c.462C跃A 突变和 EX43_46Del 突变对 PTA 和 WBT 影响不显著渊P跃0.05冤遥 结论 MYO7A 基因 EX43_46Del 和 c.462C跃A 突变与儿童先天性耳聋存在一定相关性袁可通过上述两个位点基因突变情况初步预测儿童先天性耳聋发生遥关键词:先天性耳聋曰人肌球蛋白 7A曰基因突变曰非综合征性常染色体显性遗传性耳聋曰常染色体隐性遗传非综合征耳聋中图分类号：R764.43文献标识码：A文章编号：1674-1129(2023)02-0145-04DOI院10.3969/j.issn.1674-1129.2023.02.006Analysis of MYO7A gene mutations and their correlation with congenital deafness in children DENG Zhe.Department of O鄄torhinolaryngology,Childrens Hospital Affiliated to Zhengzhou University,Zhengzhou,450000袁China.Abstract院Objective To analyze the correlation between mutations of human myosin 7A(MYO7A)gene and congenital deaf鄄ness in children.Methods A total of 48 children with congenital deafness treated in the hospital were enrolled as deafness groupbetween May 2019 and May 2021,while other 48 healthy children undergoing physical examination during the same period wereenrolled as control group.The pure tone average(PTA)values in both groups were tested by portable Madsen502 audiometer.Thewide band tympanometry(WBT)in both groups was tested by Titan IMP440 middle ear analysis system.The peripheral blood of allobjects was collected to detect mutations of MYO7A gene.Results PTA values of different frequencies were significantly greaterin deafness group than control group(P0.05),and absorption rates of WBT within 0.54.0 kHz were significantly lower in deaf鄄ness group(P0.05).The differences in frequencies of CC,CA and AA at c.462 locus between the two groups were statisticallysignificant.The frequency of allele C was significantly lower in deafness group than control group(P0.05),and number of caseswith EX43_46Del mutation of MYO7A gene was significantly more in deafness group(PA mutation andEX43_46Del mutation were not significant on PTA or WBT(P 0.05).ConclusionThere is certain correlation betweenEX43_46Del and c.462CA mutations of MYO7A gene and congenital deafness in children,and the above gene mutations canpreliminarily predict the occurrence of congenital deafness.Key words院 Congenital deafness;Human myosin 7A;Gene mutation;Nonsyndromic autosomal dominant hearing loss;Deaf鄄ness autosomal recessive作者简介：邓哲，女，硕士研究生，主治医师，研究方向：儿童耳鼻喉。实验研究 145窑窑实验与检验医学 2023 年 4 月第 41 卷第 2 期 Experimental and Laboratory Medicine,Apr.2023,Vol.41,No.2常见的致聋基因袁其致病突变多达 340 种袁大部分突变可以引起 Usher 综合征 1B 等综合征型耳聋尧一些非综合征性常染色体显性遗传性耳聋渊non鄄syndromic autosomal dominant hearing loss,DF鄄NA11冤 及常染色体隐性遗传非综合征耳聋渊deaf鄄ness autosomal recessive 2,DFNB2冤5-7遥本研究通过对比先天性耳聋患儿和听力正常儿童 MYO7A 基因突变情况袁旨在探究 MYO7A 基因突变与儿童先天性耳聋的相关性袁 为临床诊断儿童先天性耳聋提供理论基础遥1 资料与方法1.1 一般资料选取 2019 年 5 月至 2021 年 5 月于本院就诊的先天性耳聋患儿 48 例作为耳聋组袁另选取同期体检结果呈健康的儿童 48 例作为对照组遥 记录所有研究对象的姓名袁性别袁年龄袁身高袁体重等一般资料遥纳入标准院渊1冤临床确诊为先天性耳聋曰渊2冤年龄 114 岁曰渊3冤近期未使用抗凝药曰渊4冤研究获得患者及家属同意并通过医院伦理委员会批准遥排除标准院渊1冤 精神意识障碍袁 不能配合者曰渊2冤合并严重心尧脑血管等疾病曰渊3冤合并恶性或急性感染遥1.2 观察指标 听力检查院纯音测听和声导抗遥纯音测听:使用 Madsen502 便携式听力计袁以0.5尧1.0尧2.0尧4.0kHz 的纯音听阈均值 渊pure toneaverage,PTA冤为参数进行纯音听力测试遥声导抗院采用 Titan IMP440 中耳分析系统渊丹麦冤进行宽频声导抗(wide band tympanometry,WBT)测试袁记录研究对象 0.5尧1.0尧2.0尧4.0kHz WBT 吸收率遥1.3 2MYO7A 基因突变检测 提取基因组 DNA院抽取两组研究对象外周静脉血 2 mL袁 加入乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetracetic acid,EDTA)抗凝袁按 1:51:10 的比例加入去离子水裂解 8 min袁离心去含红细胞碎片的上清液袁 留白细胞沉淀遥 加入DNA 细胞裂解液悬浮白细胞沉淀袁 加入蛋白酶 K水解蛋白质及 DNA 酶袁常规苯酚要氯仿抽提法从外周血白细胞中提取基因组 DNA袁 严格按照外周血 DNA 提取试剂盒说明书操作 渊血 DNA 提取试剂盒购自上海莱枫生物科技有限公司冤遥采用实时荧光定量聚合酶链反应 渊Real-timefluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR冤扩增 2 个研究位点院渊1冤c.462C跃A渊正向引物序列院5爷-CCACCTCCCTCTTCATCAAAT-3爷曰反向引物序列院5爷-CCTTCACCTTCGTTCAGATA鄄CA-3爷冤曰渊2冤EX43_46Del袁设计 6 对 PCR 引物进行扩增袁引物序列如下院电泳袁 回收目的条带进行双向测序袁 与 GeneBank 中碱基序列对比袁 引物合成测序交由华大基因完成遥反应体系共 10 滋L袁95益预变性 5 min曰95益变性 15 s曰 外显子 4247 退火温度分别为 55益尧反向引物序列5-TGACAAAGAGGCTGAATCCC-35-GCCTCATTACCGTCCTTGAT-35-AAGGGCAACTAGAGTGCAGAG-35-GTGAGACCTGCCGGATAAG-35-AAGAAGGCTGAGCCAAAGG-35-CCCATACTTGTTGATGGCAATTAG-3外显子正向引物序列4243444546475-GTGGAGTCCAGCACCAAG-35-TCAGCGTTCCTGAGAATGAC-35-CTCACCTACCAGGTGTTCTTC-35-CGCTGATCTACAGGGTCAAG-35-CATCGTCGCCTACTTCAACA-35-CCATCTGATGCCTTCTCATCTT-356益尧58益尧56益尧55益尧56益袁退火时间 45 s曰72益延伸 1 min袁共 40 个循环袁以 U6 为内参袁重复实验 3次袁取平均值袁采用 2-驻驻Ct法计算相对表达量遥1.4 统计学处理 采用多因素方差分析比较组间差异袁使用 SPSS 19.0 软件进行统计学处理袁满足正态分布的计量资料以(x依s)表示袁组间比较采用 t检验曰计数资料均以率(%)表示袁采用 字2检验比较组间差异遥 P约0.05 表示差异有统计学意义遥2 结果2.1 所有研究对象一般资料比较 耳聋组患者和对照组儿童的年龄尧性别尧身高尧体重尧家族史等一般资料无明显差异渊P跃0.05冤遥 见表 1遥2