MTHFR、MTRR基因多态性与不明原因反复妊娠丢失的相关性研究.pdf

Advances in Clinical Medicine 临床医学进展临床医学进展,2023,13(9),14131-14142 Published Online September 2023 in Hans.https:/www.hanspub.org/journal/acm https:/doi.org/10.12677/acm.2023.1391976 文章引用文章引用:翟焕玲,李鸿昌.MTHFR、MTRR 基因多态性与不明原因反复妊娠丢失的相关性研究J.临床医学进展,2023,13(9):14131-14142.DOI:10.12677/acm.2023.1391976 MTHFR、MTRR基因多态性与不明原因反复基因多态性与不明原因反复 妊娠丢失的相关性研究妊娠丢失的相关性研究 翟焕玲翟焕玲1，李鸿昌，李鸿昌2*1济宁医学院附属金乡县人民医院生殖医学科，山东 济宁 2山东大学生殖医学研究中心，山东 济南 收稿日期：2023年8月6日；录用日期：2023年9月1日；发布日期：2023年9月7日 摘摘 要要 目的：目的：在在uRPL(unexplained Recurrent pregnancy loss,uRPL)人群中对人群中对MTHFR基因基因C677T、A1298C位点和位点和MTRR基因基因A66G位点进行检测，以明确其与位点进行检测，以明确其与uRPL发生及不同流产次数的相关性，为发生及不同流产次数的相关性，为uRPL的病因的病因筛查提供遗传学证据，并指导临床应用。方法：本研究收集了筛查提供遗传学证据，并指导临床应用。方法：本研究收集了20122015年在年在山东大学山东大学629例育龄期夫例育龄期夫妇的临床信息和外周血样本，其中既往与同一丈夫连续发生妇的临床信息和外周血样本，其中既往与同一丈夫连续发生2次妊娠次妊娠28周内妊娠丢失且排除明确病因的周内妊娠丢失且排除明确病因的患者纳入患者纳入uRPL组，既往至少有一次活产且没有流产或任何其他不良妊娠结局及并发症病史的患者纳入对组，既往至少有一次活产且没有流产或任何其他不良妊娠结局及并发症病史的患者纳入对照组。根据患者的年龄进行照组。根据患者的年龄进行1:1个案匹配，最终有个案匹配，最终有230例例uRPL组组的的女性及女性及230例对照组女性匹配成功。采例对照组女性匹配成功。采用高分辨熔融曲线分析技术进行用高分辨熔融曲线分析技术进行SNP位点基因分型位点基因分型，根据根据SNP检测结果，对检测结果，对uRPL组和对照组的叶酸代谢组和对照组的叶酸代谢风险和叶酸代谢相关基因风险和叶酸代谢相关基因MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G的基因型以及等位基因频率分的基因型以及等位基因频率分布进行统计分析，并按照流产次数布进行统计分析，并按照流产次数(2、3、4次次)分层分析进一步比较。结果：叶酸代谢风险等级在分层分析进一步比较。结果：叶酸代谢风险等级在uRPL人群中分布无显著差异，并与既往流产次数无关人群中分布无显著差异，并与既往流产次数无关(P 0.05)。进一步对三个多态位点的基因型分布进行统。进一步对三个多态位点的基因型分布进行统计分析，发现计分析，发现：1)MTHFR基因基因C667T位点在位点在uRPL人群中总体人群中总体CT(杂合突变杂合突变)比例增加，而比例增加，而TT(纯合突变纯合突变)比例降低，亚组分析当既比例降低，亚组分析当既往自然流产次数为往自然流产次数为3时，纯合突变比例降低时，纯合突变比例降低，具有显著差异具有显著差异(P 0.05，Bonferroni法校正后法校正后P 0.05)；3)MTRR基因基因A66G多态位点在多态位点在uRPL人群中分布也无显著差异人群中分布也无显著差异(P 0.05)，但亚组分，但亚组分析当既往自然流产次数为析当既往自然流产次数为3时，纯合突变比例降低具有显著差异时，纯合突变比例降低具有显著差异(P 0.05，Bonferroni法校正后法校正后P 0.05).1)Further statistical analysis of the genotype distribution of the three polymorphic sites found that the overall proportion of CT(he-terozygous mutation)at the C667T site of the MTHFR gene in the uRPL population increased,while the proportion of TT(homozygous mutation)decreased.When the number of previous spontaneous abortions was 3,the proportion of homozygous mutations decreased significantly(P 0.05,P 0.05);3)There was also no significant difference in the distribution of the MTRR gene A66G poly-morphism in the uRPL population(P 0.05),but in subgroup analysis,when the number of pre-vious spontaneous abortions was 3,the proportion of homozygous mutations significantly de-creased(P 0.05,P 0.0167 after Bonferroni method correction),but no significant difference was found in the frequency distribution of alleles.Conclusion:There was no significant difference in the distribution of risk level of folate metabolism among the women with uRPL.In the overall uRPL population,the frequencies of polymorphisms of MTHFR(C667T,A1298C),and MTRR(A66G)did not increase significantly,which were also not significantly associated with the number of previous miscarriages.Keywords Recurrent Pregnancy Loss,Prethrombotic State,Folic Acid Metabolism Enzyme,MTHFR,MTRR Copyright 2023 by author(s)and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License(CC BY 4.0).http:/creativecommons.org/licenses/by/4.0/Open AccessOpen Access翟焕玲，李鸿昌 DOI:10.12677/acm.2023.1391976 14133 临床医学进展 1.引言引言 反复妊娠丢失(RPL)是指与同一配偶连续发生2 次妊娠 28 周之前的妊娠丢失，是导致妊娠失败的常见生殖障碍性疾病。RPL 病因和发病机制复杂，主要包括染色体异常、子宫解剖异常等，另有 40%50%原因不明，被称为不明原因反复妊娠丢失(uRPL)。易栓症被认为是 RPL 发生的重要原因之一1 2。易栓症是因为血液中促凝或抗凝因子的数量和功能异常，导致血液呈高凝状态，容易形成血栓，影响胎盘微循环血供、影响子宫动脉3、子宫内膜血供，进一步对流产率造成影响4 5；易栓症可分为获得性和遗传性两种类型。其中，获得性易栓症是指后天获得的，如抗磷脂综合征等，造成血栓形成风险增加；遗传性易栓症是指由于凝血、纤维溶解和抗凝相关基因异常所导致的凝血功能增强或纤维溶解功能降低，这些基因包括抗凝蛋白相关基因，如蛋白 C、蛋白 S 缺乏；凝血因子相关基因，如因子 VLeiden、亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(methionine synthetase reductase,MTRR)等基因发生突变导致的。叶酸代谢酶 MTHFR、MTRR 均参与叶酸甲硫氨酸的代谢过程，并促进叶酸的转运、利用及代谢循环6 7。其中，MTHFR 可以催化 5,10-亚甲基四氢叶酸转化为 5-甲基四氢叶酸，后者是叶酸在血液中主要的存在形式；MTRR 可以催化同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)转化为甲硫氨酸，参与甲硫氨酸循环，为生物学过程提供甲基，同时自身转化为四氢叶酸，形成叶酸循环。这两个酶的编码基因 MTHFR 和 MTRR 基因突变可以导致酶的活性异常，引起叶酸浓度异常、HCY 正性积累，并影响甲基代谢过程8。叶酸代谢酶 MTHFR C677T 位点野生型为 CC，突变型包括杂合型突变 CT 和纯合型突变 TT；MTHFR A1298C 位点野生型为 AA，突变型包括杂合型突变 AC 和纯合型突变 CC；叶酸代谢酶 MTRR A66G 位点野生型为 AA，突变型包括杂合型突变 AG 和纯合型突变GG。若以 MTHFR C667位点未发生突变的 CC 型的酶活力定为正常(100%)，则杂合型突变的 CT 酶活力降低，纯合型突变的 TT 酶活力下降更为显著，代谢相关疾病的发病风险增加。考虑到基因的功能的不同，对叶酸代谢风险进行分级，可分为：未发现风险(三个基因位点均无突变，或仅叶酸代谢酶 MTHFR C677T 的基因型为杂合型，或仅 MTHFR A1298C 基因型为杂合型)、低度风险(叶酸代谢酶 MTHFR 基因 C677T 和 A1298C 为杂合型，或仅 MTHFR 基因C677T 为纯合型，或仅 MTHFR 基因 A1298C 为纯合型，或仅 MTRR 基因 A66G 为杂合型)、中度风险(叶酸代谢酶 MTHFR 基因 C677T 或 A1298C 为纯合型且 MTRR 基因 A66G 为杂合型或仅MTRR 基因 A66G 为纯合型)、高度风险(叶酸代谢酶 MTHFR 基因 C677T、A1298C 和 MTRR 基因 A66G 至少有两个为纯合型)9。MTHFR 基因有 30 多种突变类型，MTHFR A1298C 位点和 MTRR A66G 位点的突变导致的酶活性改变与 MTHFR C667 位点相似。不同位点突变对 MTHFR 酶的活性和热稳定性产生不同的影响，其中位于第 4 外显子上的 C677T 位点及第 7 外显子上的 A1298C 位点是最关键的两个位点10。C677T 多态位点最为常见，表现为 MTHFR 第 4 外显子上的第 677 个核苷酸上发生 CT 突变，从而导致丙氨酸被缬氨酸取代，该突变可引起该酶的热不稳定性增加，酶活性下降11；A1298C 为另一个常见的多态位点，该位点突变可导致多肽链上相应的谷氨酸被丙氨酸所取代，从而影响酶的活性，使其催化 5,10-亚甲基四氢叶酸转化为 5-甲基四氢叶酸的能力降低，干扰叶酸代谢过程。MTRR 基因位点 A66G 是其主要的变异位点，变异导致异亮氨酸被甲硫氨酸取代12，造成相应甲硫氨酸合成酶的酶活性降低或消失，甲硫氨酸以及 S-腺苷甲硫氨酸/蛋氨酸合成障碍，使体内 HCY