·论著·miR-217靶向调控HMGA2基因对内质网应激介导的口腔癌细胞自噬与凋亡的影响*宿伟鹏1赵化荣1李晨曦2刘攀1张洋1龚忠诚2(新疆医科大学第一附属医院1.肿瘤中心;2.颌面肿瘤外科,新疆乌鲁木齐830011)【摘要】目的探究微小RNA217(miRNA-217)对口腔癌细胞中内质网应激介导的自噬与凋亡的影响及其分子机制。方法培养人口腔癌细胞和人正常口腔角质形成细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-217与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)表达水平;将人口腔癌细胞系SAS分为对照组、miR-NC组、miR-217mimic组和miR-217mimic+4-PBA组4组,脂质体法进行转染和内质网应激抑制剂4-苯丁酸处理后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况,细胞免疫荧光染色检测细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达,蛋白质免疫印迹(WesternBlot)测定细胞中自噬相关蛋白LC3I、LC3II及Beclin-1的表达水平,RT-qPCR和WesternBlot测定细胞内质网应激相关分子CCAAT/增强予结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及天冬氨酸蛋白水解酶-12(Caspase-12)的表达水平;双荧光素酶报告基因检测实验和WesternBlot验证miR-217对HGMA2的靶向作用。结果与人正常口腔角质形成细胞HNOK比较,人口腔癌细胞HSC3、SAS、SCC15、FaDu中miR-217相对表达量下调而HMGA2相对表达量上调(P<0.05);与对照组比较,miR-217mimic组SAS细胞凋亡率升高,有大量呈亮蓝色高荧光的凋亡细胞,LC3荧光强度升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Beclin-1蛋白相对表达量均上调,GRP78、CHOP、Caspase-12mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均上调(P<0.05);而与miR-217mimic组比较,miR-217mimic+4-PBA组SAS细胞凋亡率下降,呈亮蓝色高荧光的凋亡细胞明显减少,LC3荧光强度降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Beclin-1蛋白相对表达量均下调,GRP78、CHOP、Caspase-12mRNA相对表达量与蛋白相对表达量也均下调(P<0.05);HM-GA2与miR-217在特定区域存在碱基互补现象,且miR-217靶向负调控HGMA2表达。结论miR-217可能通过促进内质网应激途径诱导口腔癌细胞发生自噬与死亡,其机制可能与靶向负调控HMGA2表达相关。【关键词】口腔癌;miR-217;HMGA2;内质网应激;自噬;凋亡【中图分类号】R739.8【文献标志码】ADOI:10.3969/j.issn.1672-3511.2023.09.003基金项目:新疆维吾尔自治区卫生计生委青年医学科技人才专项科研项目(WJWY-202017)通讯作者:龚忠诚,主任医师,E-mail:klas12300@163.com引用本文:宿伟鹏,赵化荣,李晨曦,等.miR-217靶向调控HMGA2基...
