RP-HPLC法同时测定紫苏叶提取物没食子酸、迷迭香酸、木犀草素含量研究.pdf

收稿日期 基金项目安徽省高校自然科学研究重大项目()合肥职业技术学院自然科学研究产学研项目()第一作者简介 范高福男硕士副教授主要研究方向:药物新制剂应用与开发 法同时测定紫苏叶提取物没食子酸、迷迭香酸、木犀草素含量研究范高福韦梦强吴 丹孙莉华金 玉.合肥职业技术学院 合肥市教育名师工作室(安徽 合肥).上海海虹实业(集团)巢湖今辰药业有限公司(安徽 巢湖)【摘要】目的 建立安徽地区紫苏叶中没食子酸、迷迭香酸和木犀草素成分的含量同时检测方法 方法 采用反相高效液相色谱法(.)色谱柱以甲醇().磷酸溶液()为流动相梯度洗脱流速./柱温 检测波长 同时检测没食子酸、迷迭香酸和木犀草素含量 采用 .对测定结果进行分析比较本地主产区紫苏叶中各成分的含量差异 结果没食子酸、迷迭香酸和木犀草素分别在./././呈线性关系平均加样回收率分别为.().(.)和.(.)结论 此方法简单方便稳定可重复可作为安徽地区主产地紫苏叶没食子酸、迷迭香酸和木犀草素成分含量的检测依据【关键词】紫苏叶提取物含量测定反相高效液相色谱法【中图分类号】.【文献标识码】【文章编号】()(.().)【】.()(.)().()././././.(.).(.).(.).第 卷第 期(第 页)年 湖北民族大学学报医学版 .【】紫苏(.).)为 年生草本植物味芳香是唇形科紫苏属俗称赤苏、白苏、回回苏、苏麻等其在东亚地区及我国南北地区广泛种植具有药食同源价值药典记载其叶、梗、子部位均可入药也可作为食品佐料、果饮、保健化妆品有益添加剂 其中紫苏叶含有黄酮类、酚酸类、花色素、挥发油等多种生物活性成分研究表明紫苏叶提取物富含木犀草素、迷迭香酸、没食子酸与其抗菌、抗病毒、消炎、抗氧化、抗抑郁及抗肿瘤等多种药理作用有关 目前资料对紫苏叶中挥发油、黄酮类、酚酸类单一成分检测较多但关于安徽本地紫苏提取物没食子酸、迷迭香酸、木犀草素同时检测的方法尚未报道本次实验采用反相高效液相色谱法()对本地紫苏叶提取物中没食子酸、迷迭香酸和木犀草素含量进行同时检测并建立方法学旨在为安徽本地主产区紫苏叶部位的有效成分检测方法及其单体提取工艺深加工提供参考依据 材料与仪器.材料与试剂 安徽亳州紫苏叶:购自亳州市承辉药业销售有限公司经安徽中医药大学药学院彭华胜教授鉴定为唇形科紫苏属提取物对照品没食子酸、迷迭香酸及木犀草素的纯度均(成都德斯特生物技术有限公司)流动相甲醇、乙腈、水均为色谱纯其它所需试剂均为分析纯.仪器与设备 系统:配有 检测器(美国沃特世公司)超纯水系统(美国密理博公司).型超声波清洗器(青岛聚创环保集团有限公司)型旋转蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司)电子天平(济南欧莱宝生物技术有限公司)恒温水浴锅(常州金坛良友仪器有限公司)型实验室循环水真空泵(上海申生仪器抽滤真空泵厂)冷冻干燥机(上海比朗仪器有限公司)等 方法与结果分析.没食子酸、迷迭香酸和木犀草素检测的色谱条件色谱柱:()流动相含甲醇()磷酸溶液()梯度洗脱()样品流速为 /柱温恒定 优选检测波长 进样体积 结果显示没食子酸、迷迭香酸和木犀草素峰型良好无肩峰、拖尾等现象色谱图见图 :对照品色图谱:供试品测试色谱图:没食子酸:迷迭香酸:木犀草素图 色谱图.没食子酸、迷迭香酸、木犀草素对照品溶液的制备 分别精密称取各对照品(没食子酸、迷迭香酸和木犀草素)适量加 甲醇定量配制成 /、/、/的混合对照品溶液.没食子酸、迷迭香酸、木犀草素检测的供试品紫苏叶溶液的制备 将干燥紫苏叶经中药粉碎机粉碎过三号筛后精密称取 加入棕色试剂瓶中精密量取浓度 甲醇水溶液 加塞后称重超声()处理样品 待冷却称重用浓度 甲醇水溶液补足减失的重量震荡均匀通过多次抽滤制得滤液经微孔滤膜()精滤制得.检测波长的选择采用二极管阵列检测器 进行紫外全波长扫描对照品溶液测得没食子酸、迷迭香酸、木犀草素最大吸收波长分别是、及 且在 处均有较强的吸收无明显干扰峰出现分离度较好据研读相关文献最终确定 作为没食子酸、迷迭香酸、木犀草素同时检测波长.没食子酸、迷迭香酸、木犀草素检测的方法学考察.线性范围 精密称取提取物没食子酸、迷迭 湖北民族大学学报医学版 第 期香酸及木犀草素 种对照品适量分别加 甲醇稀释得到不同浓度没食子酸溶液(/)、迷迭香酸溶液(/)、木犀草素溶液(/)每个浓度均进样 以溶液浓度为横坐标(轴)峰面积为纵坐标(轴)制作标准曲线没食子酸回归方程为 ()迷迭香酸回归方程为()、木犀草素回归方程为()实验结果表明没食子酸在 /的浓度范围内呈线性关系迷迭香酸在 /的浓度范围内呈线性关系、木犀草素在 /的浓度范围内呈线性关系.精密度试验 称取样品 依据 项下制备方法配制供试品溶液设置进样量为 连续进样 次测得没食子酸、迷迭香酸、木犀草素的峰面积 分别为 、和 .稳定性试验 量取供试品溶液适量分别在 进样进样量为 测得没食子酸、迷迭香酸、木犀草素的峰面积 分别为、和 .重复性试验 称取等量样品 份分别称取各样品 依据 项方法配制紫苏叶供试品溶液测得没食子酸、迷迭香酸、木犀草素的峰面积 分别为 、和 .加样回收率试验 称取等份样品 份精密称定分别准确加入没食子酸对照品溶液适量按 项下操作测定含量并计算回收率迷迭香酸、木犀草素同法操作见表 表 紫苏叶中没食子酸、迷迭香酸、木犀草素回收率试验成分供试品/样品含量/加入对照品的量/测得量/回收率/没食子酸.迷迭香酸.续表 成分供试品/样品含量/加入对照品的量/测得量/回收率/木犀草素.样品含量测定称取紫苏叶干粉适量依据 项下条件各自制备供试品紫苏叶待测溶液采用外标法同时测定紫苏叶功能部位中没食子酸、迷迭香酸、木犀草素的含量见表 表 安徽本地紫苏叶部位中没食子酸、迷迭香酸、木犀草素的含量()样品没食子酸的含量/迷迭香酸的含量/木犀草素的/含量紫苏叶.讨论本实验通过 同时检测本地紫苏叶功能部位中水溶性物质没食子酸、迷迭香酸、木犀草素含量考察了不同溶剂甲醇、乙醇、丙酮对样品中水溶性类物质没食子酸、迷迭香酸、木犀草素的溶解程度、提取量及提取效率不同时间对样品的浸渍与超声萃取的影响不同温度、下提取回流保护作用结果显示 甲醇水溶液浸渍样品约再超声()萃取 提取回流温度可有效浸提样品中没食子酸、迷迭香酸、木犀草素成分实验结果发现甲醇浓度低于 紫苏叶中没食子酸含量显著降低甚至测不出推测没食子酸成分存在水解现象与甲醇浓度有关 实验通过超声不同频率()不同时间()条件控制结果显示对上述 种有效成分含量影响不大说明超声空化作用对有效成分提取率提高不明显 此外在溶剂选择上通过乙醇、甲醇、丙酮不同溶剂及不同浓度对紫苏叶中没食子酸、迷迭香酸、木犀草素提取效率比较结果发现甲醇乙醇丙酮从而优选甲醇溶剂通过 扫描没食子酸、迷迭香酸、木犀草素 个对照品色谱峰在 均有较强的紫外吸收且杂质峰在此波长吸收较少因此选择 作为检测波长 没食子酸、迷迭香酸、木犀草素均显弱酸性当流动相 值远远小于弱酸的 值时这 种成分主要以分子形式存在因此选用磷酸溶液配比甲醇作为首选流动相色谱柱规格为 第 期 湖北民族大学学报医学版 推荐流速为./在选择进样量时考虑到检测灵敏度首选 进样量但迷迭香酸峰出现峰宽明显增大理论塔板数降低再逐步降低进样量至 个主峰的峰型对称度和理论塔板数都很好开始选择甲醇()磷酸溶液()等度洗脱迷迭香酸和杂质峰分离度 且木犀草素保留时间超过 最后采用梯度洗脱()实现样品峰和杂质峰分离且大大缩短了检测时间 此外本次实验样品中待测成分没食子酸、迷迭香酸、木犀草素含量 液相方法学验证指标精密度试验结果良好()稳定性试验 内良好()准确度试验结果良好均在 本课题组采集了安徽亳州、皖西大别山地区的种植紫苏叶对其中没食子酸、迷迭香酸、木犀草素总含量进行了测定结果显示所含迷迭香酸成分()显著高于没食子酸()和木犀草素()且比两者总和高出 资料表明安徽产地紫苏叶黄酮苷类、酚酸类成分较高其中酚酸类成分迷迭香酸紫苏叶提取物可用于治疗季节性过敏性鼻炎及泡腾片制剂开发研究进而为安徽产地紫苏提取物开发深加工提供理论指导 本研究通过 初步建立了同时检测安徽本地主产区紫苏叶中没食子酸、迷迭香酸、木犀草素含量方法经方法学验证该检测方法对现行版中国药典(年版)种挥发油基础上有效补充且操作简单方便准确稳定重现性好可作为安徽本地紫苏叶质量控制参考依据参考文献 钱锦秀孟武威刘晖晖等.经典名方中紫苏类药材的本草考证.中国实验方剂学杂志():.:.赵奕栋孙文豪陈天源等.紫苏叶有效成分药理作用研究进展.江苏中医药():.(.).().().(.).(.).:.闫钰易红张东等.基于 多成分含量测定的紫苏叶质量标准探讨.中国中药杂志():.胡军华刘莉莉张艳军等.法同时测定不同产地紫苏叶和荆芥中咖啡酸和迷迭香酸.中草药():.张琛武郭佳琪李卫萍等.型紫苏不同部位 种酚酸和黄酮类成分的含量相关性研究.中国中药杂志():.李丹阳孙捷居永慧等.模式识别结合多指标成分定性及定量分析 个主产区紫苏叶特征成分.中草药():.张学梅.用富含迷迭香酸的紫苏提取物治疗季节性过敏性鼻炎.国外医药(植物药分册)():.宫江宁吴金鸿王正武等.紫苏提取物泡腾片的研制.食品科学():.国家药典委员会编.中华人民共和国药典(四部).年版北京:中国医药科技出版社:.责任编辑:牟冬生 湖北民族大学学报医学版 第 期