LC-MS_MS法同时测定诺氟沙星胶囊中的3种杂质.pdf

h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e tL C-M S/M S法同时测定诺氟沙星胶囊中的3种杂质曹 旭1,张 琤2,刘 涛1,王群葆11.邢台市食品药品检验所,邢台 0 5 4 0 0 0;2.邢台市第五医院,邢台 0 5 4 0 0 0摘要:目的 建立液相色谱与串联质谱联用(l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y,L C-M S/M S)法同时测定诺氟沙星胶囊中杂质A、杂质E、杂质K。方法 用A C QU I T Y U P L C B EH S h i e l d R P 1 8色谱柱(1 0 0 mm2.1 mm,1.7 m),以乙腈-2 m LL-1甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 m Lm i n-1,柱温为4 0,进样量为0.5 L;质谱离子化方式为电喷雾电离(e l e c t r o s p r a y i o n i z a t i o n,E S I),正 离 子 模 式,多 反 应 监 测(m u l t i p l e r e a c t i o n m o n i t o r i n g,MRM)。杂 质A检 测 离 子 对 为m/z 2 7 0.2 2 3 2 2 4.2 2 7/1 6 8.2 4 6,杂质E检测离子对为m/z 3 3 6.3 2 33 1 8.3 2 7/2 4 7.2 2 0,杂质K检测离子对为m/z 3 0 6.3 3 22 6 2.3 4 6/2 8 8.3 4 6,诺氟沙星检测离子对为m/z 3 2 0.2 7 22 7 6.3 5 6/3 0 2.3 5 1。结果 杂质A、杂质E和杂质K质量浓度分别在4.1 0 84 1 0.7 8 0、4.1 2 04 1 2.0 0 0、3.9 8 43 9 8.4 0 0 n gm L-1范围内与其峰面积线性关系良好,相关系数r分别为0.9 9 9 4、0.9 9 8 4、0.9 9 8 7;精密度实验,上述3个杂质峰面积的R S D值均小于3%;1 2 h稳定性实验,杂质A、杂质E和杂质K峰面积的R S D值均小于6%,杂质A、杂质E和杂质K的平均回收率(n=9)分别为1 0 5.5 5%、1 0 2.4 4%、1 0 6.7 5%,R S D值均小于1 0%。结论 该方法可同时测定诺氟沙星胶囊中杂质A、杂质E、杂质K。关键词:诺氟沙星;诺氟沙星胶囊;氟喹诺酮药物杂质;质量控制D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 4-2 4 0 7.2 0 2 3.0 5.0 0 8中图分类号:R 9 2 7.2 文献标志码:A 文章编号:1 0 0 4-2 4 0 7(2 0 2 3)0 5-0 0 4 2-0 6S i m u l t a n e o u s d e t e r m i n a t i o n o f 3 i m p u r i t i e s i n N o r f l o x a c i n C a p s u l e s b y L C-M S/M SC AO X u1,Z HAN G C h e n g2,L I U T a o1,WANG Q u n b a o11.X i n g t a i F o o d a n d D r u g I n s p e c t i o n I n s t i t u t e,X i n g t a i 0 5 4 0 0 0,C h i n a;2.X i n g t a i C i t y F i f t h H o s p i t a l,X i n g t a i 0 5 4 0 0 0,C h i n aA b s t r a c t:OO bb jj ee cc tt ii vv ee T o e s t a b l i s h a n l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y(L C-M S/M S)m e t h o d f o r t h e s i m u l t a n e o u s d e t e r m i n a t i o n o f i m p u r i t y A,i m p u r i t y E a n d i m p u r i t y K i n N o r f l o x a c i n C a p s u l e s.MM ee tt hh oo dd ss T h e s e p a r a t i o n w a s p e r f o r m e d o n a n A C QU I T Y U P L C B EH S h i e l d R P 1 8 c o l u m n(1 0 0 mm2.1 mm,1.7 m).T h e g r a d i e n t e l u t i o n w a s c a r r i e d o u t w i t h a c e t o n i-t r i l e-2 m LL-1f o r m i c a c i d a s t h e m o b i l e p h a s e,t h e f l o w r a t e w a s 0.3 m Lm i n-1,t h e c o l u m n t e m p e r a t u r e w a s 4 0,a n d t h e i n-j e c t i o n v o l u m e w a s 0.5 L.T h e a n a l y t e s w e r e a n a l y z e d b y e l e c t r o s p r a y i o n i z a t i o n(E S I)i n t h e m u l t i p l e r e a c t i o n m o n i t o r i n g(NMR)p o s i t i v e i o n m o d e.T h e o p t i m i z e d m a s s i o n-p a i r s f o r q u a n t i t a t i o n w e r e i m p u r i t y A m/z 2 7 0.2 2 32 2 4.2 2 7/1 6 8.2 4 6,i m-p u r i t y E m/z 3 3 6.3 2 33 1 8.3 2 7/2 4 7.2 2 0,i m p u r i t y K m/z 3 0 6.3 3 22 6 2.3 4 6/2 8 8.3 4 6,n o r f l o x a c i n m/z 3 2 0.2 7 22 7 6.3 5 6/3 0 2.3 5 1.RR ee ss uu ll tt ss T h e l i n e a r i t y r a n g e s o f i m p u r i t y A,i m p u r i t y E a n d i m p u r i t y K w e r e 4.1 1-4 1 0.7 8 n gm L-1(r=0.9 9 9 4),4.1 2-4 1 2.0 0 n gm L-1(r=0.9 9 8 4)a n d 3.9 8-3 9 8.4 0 n gm L-1(r=0.9 9 8 7),h a v e a g o o d l i n e a r r e l a t i o n s h i p w i t h t h e i r p e a k a r e a s,r e s p e c t i v e l y.I n t h e p r e c i s i o n t e s t,t h e R S D s o f t h e a b o v e 3 i m p u r i t y p e a k a r e a s w e r e l e s s t h a n 3%.I n t h e 1 2 h o u r s s t a b i l i-t y t e s t,t h e R S D s o f t h e p e a k a r e a s o f i m p u r i t y A,i m p u r i t y E a n d i m p u r i t y K w e r e l e s s t h a n 6%,a n d t h e a v e r a g e r e c o v e r i e s o f i m p u r i t y A,i m p u r i t y E a n d i m p u r i t y K(n=9)w e r e 1 0 5.5 5%,1 0 2.4 4%a n d 1 0 6.7 5%r e s p e c t i v e l y,a n d t h e R S D s w e r e l e s s t h a n 1 0%.CC oo nn cc ll uu ss ii oo nn T h i s m e t h o d i s s u i t a b l e f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f i m p u r i t y A,i m p u r i t y E a n d i m p u r i t y K i n N o r f l o x a c i n C a p s u l e s.K e y w o r d s:n o r f l o x a c i n;N o r f l o x a c i n C a p s u l e s;f l u o r o q u i n o l o n e d r u g i m p u r i t i e s;q u a l i t y c o n t r o l基金项目:河北 省 市 场 监 督 管 理 局 科 研 计 划 项 目(编 号:2 0 2 0 Z C 4 9)诺氟沙星(n o r f l o x a c i n),别名氟哌酸,化学名称为1-乙基-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-7-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸,是第三代喹诺酮类抗菌药,可选择性抑制消化道内致病菌D NA合成中起作用的D NA促旋酶,从而干扰细菌D NA的复制、转录和修复重组,使细菌无法传代。诺氟沙星胶囊为诺氟沙星常用制剂,主要辅料为淀粉、羟甲基纤维素等,其生产和使用在我国具有广泛性和普遍性。但有研究结果表明,喹诺酮类化合物药物的杂质会引起恶心、头痛、头晕、高血压、光毒性等不良反应1。因此,有必要对诺氟沙星胶囊进行杂质分析和有关物质检查。诺氟沙星原料中的主要杂质为:杂质A(7位取代基为氯,化学名为1-乙基-6-氟-7-氯-4-氧代-1,4-二氢-3-喹啉羧酸);杂质E 氯哌酸,化学名为1-乙基-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-6-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸;杂质K1位取代基位甲基,化学名为1-甲基-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-7-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸。它们均为诺24西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t氟沙星原料在合成过程中产生的工艺杂质。这些杂质会少量带入诺氟沙星制剂中,从而显著降低其质量。因此,杂质的分离和测定对质量控制、工艺开发过程的反应监测都具有重要意义2。诺氟沙星胶囊现行质量标准为2 0 2 0年版 中华人民共和国药典(以下简称 中国药典)二部3,有关物质项下用高效液相色谱法(h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a-p h y,H