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976第 53 卷 第 8 期2023 年 8 月Vol.53 No.8Aug.2023日 用 化 学 工 业（中英文）China Surfactant Detergent&Cosmetics Received:August 3,2022;Revised:July 28,2023.*Corresponding author.E-mail:（Weichang Xu）;（Yuan Wang）.DOI：10.3969/j.issn.2097-2806.2023.08.015Determination of asiaticoside and madecassoside in Centella asiatica（L.）Urban by HPLC-ELSDHongdanWang1,WeichangXu2,*,YuanWang2,*,XiangwenKong1,LijuanSun2（1.College of Science,Shenyang University of Chemical Technology,Shenyang,Liaoning 110000,China;2.Shenyang Chemical Research Institute Co.,Ltd.,Shenyang,Liaoning 110000,China）Abstract:Centella asiatica（L.）Urban extract is usually used as a cosmetic raw material,which has whitening,antioxidant and other effects.The main substances to play this effect are asiaticoside and madecassoside.In this paper,a high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detection（HPLC-ELSD）technique was used to determine the content of asiaticoside and madecassoside in Centella asiatica（L.）Urban.Unitary C18 column（4.6250 mm,5 m）with acetonitrile-water as the mobile phase was used for gradient elution at a flow rate of 1 mL/min.Column temperature was 30.Agilent 1260 Infinity detector（drift tube temperature was 70）was used for column elution with the carrier gas flow rate at 1.6 L/min.The results show that the concentrations of asiaticoside and madecassoside are 100-702 mg/L and 105-738 mg/L,respectively.The linear relationship between peak area and concentration is good,and the correlation coefficients are 0.999 6 and 0.999 7,respectively.The average recoveries of asiaticoside and madecassoside are 101.20%and 98.30%,respectively.The relative standard deviations（RSD）are all within 3%.The method is simple,accurate,effective and less interference,and can be used for the determination of asiaticoside and madecassoside in Centella asiatica（L.）Urban.Key words:Centella asiatica（L.）Urban;high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector;asiaticoside;madecassoside;content determination05101520253035140A101530202535405045051015202530351340C50010015025020020510152025303540B02004008006002A/mAUA/mAUA/mAUt/mint/mint/min1:Madecassoside;2:Asiaticoside;3:Asiaticoside-BA:Standardforhydroxyasiaticoside;B:Standardforasiaticoside;C:Sample977第 8 期分析与检测王虹丹，等：HPLC-ELSD法测定积雪草中积雪草苷及羟基积雪草苷的含量 积雪草（Centella asiatica（L.）Urban）为伞形科植物的干燥全草1，有清热解毒、通淋益肾之功效，临床上也用于皮肤病和跌打损伤的治疗2。现代大量研究3发现，积雪草中主要的化学成分有三萜类化合物、黄酮类、挥发油类、多糖类等，其中主要活性成分积雪草苷、羟基积雪草苷，具有修复皮肤瘢痕、促进伤口愈合、抗敏、抗炎、美白、抗氧化的功效4。有研究人员5提出积雪草具有美白和促进胶原蛋白合成等药理作用，并将其应用在个人护理品中。目前，对于积雪草苷和羟基积雪草苷的分析通常采用药典中的分析方法，该方法需辅助-环糊精提高羟基积雪草苷与积雪草苷-B的分离度，但添加-环糊精的流动相存在明显缺陷，不仅易堵塞色谱柱，使色谱柱使用寿命变短，柱效降低，积雪草苷-B色谱峰还容易受到流动相中-环糊精的浓度变化而发生保留时间飘移6,7，且低波长的平衡时间较长8,9。本文建立了用蒸发光散射检测器（ELSD）测定积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷含量的分析方法10,11，以期为积雪草主要化学成分的含量分析提供一种高效方便的手段。1 实验部分1.1 主要试剂与仪器市售积雪草苷标准品，含量98%，批号：BP0204，成都普瑞法科技开发有限公司；市售羟基积雪草苷标准品，含量98%，批号：BP0911，成都普瑞法科技开发有限公司；积雪草购于珈祁堂，按照中国药典的分析方法测得积雪草原草中积雪草苷的含量为0.62%，羟基积雪草苷的含量为1.76%；积雪草浸膏中积雪草苷的含量为1.99%，羟基积雪草苷的含量 为3.89%。Agilent 1260高效液相色谱仪，包括四元泵、Agilent 1260 Infinity 蒸发光检测器、柱温箱、自动进样器、工作站，美国Agilent公司；KQ-50E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；十万分之一天平、万分之一天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；0.22微米滤膜，上海安谱实验科技有限公司。1.2 色谱条件色谱柱为Unitary C18柱（4.6250 mm，5 m），柱温30；流速1.0 mL/min，流动相A为水，流动相B为乙腈，按表1进行梯度洗脱，蒸发光散射检测器检测，漂移管温度70，载气流速1.6 L/min，进样量20 L。表1 梯度洗脱程序Tab.1 Gradient elution procedure时间/min流动相A/%流动相B/%0.0079.0021.0022.0079.0021.0030.0060.0040.0030.1010.0090.0035.0010.0090.0035.1079.0021.0040.0079.0021.00HPLC-ELSD法测定积雪草中积雪草苷及羟基积雪草苷的含量王虹丹 1，胥维昌 2,*，王 远 2,*，孔祥文 1，孙丽娟 2（1.沈阳化工大学 理学院，辽宁 沈阳 110000；2.沈阳化工研究院有限公司，辽宁 沈阳 110000）摘要：积雪草提取物通常被用作化妆品原料，有美白、抗氧化等功效，发挥此功效的主要物质有积雪草苷、羟基积雪草苷。采用高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）技术，建立了测定积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷含量的方法。选用Unitary C18色谱柱（4.6250 mm，5 m），以乙腈-水为流动相，梯度洗脱，流速1 mL/min，柱温为30，采用Agilent 1260 Infinity 蒸发光散射检测器（漂移管温度70，载气流速1.6 L/min）。研究表明，积雪草苷和羟基积雪草苷质量浓度分别在100702 mg/L，105738 mg/L范围内，峰面积与质量浓度线性关系良好，相关系数分别为0.999 6和0.999 7。积雪草苷和羟基积雪草苷平均加样回收率分别为101.20%，98.30%。相对标准偏差（RSD）均在3%以内。方法简单，准确度高，分离效果好，干扰少，可用于积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷的含量测定。关键词：积雪草；高效液相色谱-蒸发光散射检测器；积雪草苷；羟基积雪草苷；含量测定中图分类号：TQ658 文献标识码：A 文章编号：2097-2806（2023）08-0976-05978第 53 卷分析与检测日 用 化 学 工 业（中英文）1.3 标准溶液的配制准确称取积雪草苷、羟基积雪草苷标准品适量，分别加甲醇制成每1 mL含2.00 mg的积雪草苷标准品溶液和每1 mL含2.11 mg的羟基积雪草苷标准品溶液。1.4 供试品溶液的配制称取积雪草粉末100 g，加入60%乙醇回流提取，冷却过滤，浓缩，得到积雪草浸膏11。准确称取积雪草浸膏0.4 g置于25 mL具塞锥形瓶中，加入80%甲醇溶解，超声30 min，摇匀，定容，0.22 m微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。2 结果与讨论2.1 流动相的选择在流动相系统的考察中，因为积雪草中成分多又复杂，故采用梯度洗脱能使积雪草苷-B、羟基积雪草苷、积雪草苷及其他成分进行较好的分离12。对比乙腈-水13、甲醇-水等流动相系统，结果显示乙腈-水系统效果较为理想，分离效果好，水溶液中也可以不用加-环糊精，就能使羟基积雪草苷和其同分异构体积雪草苷-B达到基线分离，见图1。2.2 检测器的选择积雪草苷和羟基积雪草苷的结构中只有一个双键，所以其紫外吸收较弱，最大吸收波长在205 nm左右7，在紫外末端吸收检测条件下对积雪草苷和羟基积雪草苷进行测定时，如图2所示存在很多其他紫外吸收成分，很容易受到干扰，从而导致分析检测的准确性降低。而蒸发光散射检测器是主要用于检测紫外没有吸收或末端吸收化合物（尤其适用于皂苷）的定05101520253035400200400600800?A/mAUt/min3121?2?3?-B图1 HPLC-ELSD图谱Fig.1 HPLC-ELSD Chromatogram量与定性分析，能避开很多杂质峰的干扰，也使分析检测的准确性有所提升14,15。在“1.2”色谱条件下，羟基积雪草苷、积雪草苷的特征色谱图如图1所示。药典色谱条件的色谱如图2所示。结果表明，本文建立的HPLC-ELSD法杂峰干扰少，对积雪草苷、羟基积雪草苷及积雪草苷-B的分离度较好，与药典推荐方法的分离效果相近。2.3 柱温的选择分别考察了柱温在20，30，40 时的分离效果。柱温在20 时，保留时间较长，效率较低，当柱温升高到40 时，虽然保留时间缩短，但是羟基积雪草苷和积雪草苷-B的分离效果较差，因此将柱温定为30。2.4 线性关系精密量取积雪草苷和羟基积雪草苷标