HBV携带者外周血单个核细胞miR-138表达与病毒增殖的关系.pdf

559检验医学 2023 年 6 月第 38 卷第 6 期 Laboratory Medicine，June 2023，Vol.38，No.6 基金项目：山东省卫生和计划生育委员会科技计划项目（2017WS0259）作者简介：张莹，女，1981年生，硕士，主管技师，主要从事输血检验工作。引用本文：张莹，景丽娟，李丽.HBV携带者外周血单个核细胞miR-138表达与病毒增殖的关系J.检验医学，2023，38（6）：559-562.HBV 携带者外周血单个核细胞 miR-138 表达与病毒增殖的关系张莹1景丽娟1李丽2（1.东营市人民医院输血科，山东 东营 257000；2.东营市人民医院检验科，山东 东营 257000）摘要：目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）携带者外周血单个核细胞（PBMC）miR-138表达与HBV增殖的相关性。方法 选取2018年1月2021年1月东营市人民医院HBV携带者144例（HBV携带组）和体检健康者144名（正常对照组）。收集所有研究对象性别、年龄等一般资料和乙型肝炎血清学标志物、肝功能相关项目检测结果。检测所有研究对象PBMC中miR-138相对表达量，检测HBV携带者HBV DNA载量。根据乙型肝炎血清学标志物检测结果将HBV携带者分为乙型肝炎e抗原（HBeAg）阴性组（63例）和HBeAg阳性组（81例）。采用Pearson相关分析评估miR-138相对表达量与HBV DNA载量的相关性。结果 HBV携带组PBMC中miR-138相对表达量显著低于正常对照组（P0.001）。HBeAg阳性组HBV DNA载量显著高于HBeAg阴性组（P0.001），PBMC中miR-138相对表达量显著低于HBeAg阴性组（P0.001）。Pearson相关分析结果显示，HBV携带组PBMC miR-138相对表达量与HBV DNA 载量呈负相关（r=-0.841，P0.05）。结论 HBV携带者PBMC中miR-138表达下调，且与HBV增殖密切相关。关键词：微小RNA-138；单个核细胞；乙型肝炎病毒；增殖Relationship between the expression of miR-138 in peripheral blood mononuclear cells of hepatitis B virus proliferation in carriers ZHANG Ying1，JING Lijuan1，LI Li2.（1.Blood Transfusion Department，Dongying Peoples Hospital，Dongying 257000，Shandong，China；2.Department of Clinical Laboratory，Dongying Peoples Hospital，Dongying 257000，Shandong，China）Abstract：Objective To investigate the correlation between the expression of miR-138 in peripheral blood mononuclear cells（PBMC）and hepatitis B virus（HBV）proliferation in HBV carriers.Methods A total of 144 HBV carriers（HBV carrier group）and 144 healthy subjects（healthy control group）were enrolled from Dongying Peoples Hospital from January 2018 to January 2021.The general data，such as sex and age，hepatitis B serological markers and liver function determination results were collected.The relative expression of miR-138 in PBMC was determined，and the HBV DNA load of HBV carriers was determined.According to the results of hepatitis B serological markers，HBV carriers were classified into hepatitis B e antigen（HBeAg）negative group（63 cases）and HBeAg positive group（81 cases）.Pearson correlation analysis was used to evaluate the correlation between the relative expression of miR-138 and HBV DNA load.Results The relative expression of miR-138 in PBMC of HBV carrier group was lower than that of healthy control group（P0.001）.The HBV DNA load in HBeAg positive group was higher than that in HBeAg negative group（P0.001），and the relative expression of miR-138 in PBMC was lower than that in HBeAg negative group（P0.001）.Pearson correlation analysis showed that PBMC miR-138 relative expression was negatively correlated with HBV DNA load in HBV carrier group（r=-0.841，P0.05）。本研究经东营市人民医院伦理委员会批准（2017DY012），所有研究对象及其家属均知情同意。1.2 方法1.2.1临床资料收集收集所有研究对象的性别、年龄等一般资料和乙型肝炎血清学标志物HBsAg、乙型肝炎表面抗体（hepatitis B surface antibody，HBsAb）、乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙型肝炎e抗体（hepatitis B e antibody，HBeAb）、乙型肝炎核心抗体（hepatitis B core antibody，HBcAb）、肝功能丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、总胆红素（total bilirubin，TB）检测结果。根据乙型肝炎血清学标志物检测结果将HBV携带者分为HBeAg阴性组（63例；HBeAg、HBeAb均为阴性，HBsAg、HBsAb、HBcAb均为阳性）和HBeAg阳性组（81例，HBsAg、HBeAg、HBsAb、HBcAb均为阳性，HBeAb为阴性）。1.2.2PBMC中miR-138检测采用乙二胺四乙酸抗凝管采集所有研究对象空腹静脉血5 mL。采用OptiPrep梯度离心法分离PBMC，OptiPrep分离液购自德国Serumwerk Bernburg AG公司，严格按说明书进行操作，收集单个核细胞。采用RNA提取试剂盒和反转录试剂盒（美国Abcam公司）提取PBMC总RNA，并逆转录为cDNA。采用TC100 PCR仪（美国伯乐公司）和SYBR RT-PCR试剂盒（杭州博日科技有限公司）进行实时荧光定量聚合酶链反应。反应条件：94 预变性30 s；94 5 s，56 30 s，35个循环。以U6为内参，采用2-Ct法计算miR-138相对表达量。每份样本重复检测3次，取均值。引物由北京鼎国生物科技有限公司合成，序列见表1。1.2.3 HBV携带组HBV DNA拷贝数检测采 集 H B V 携 带 者 空 腹 静 脉 血 2 m L，1 200g离心30 min，分离血清。采用TC100 PCR仪和HBV荧光定量聚合酶链反应试剂盒（上海碧云天生物科技有限公司）检测HBV DNA拷贝数，检测范围为1.01035.0 107拷贝/mL，高于上限的样本需进行适当稀释561检验医学 2023 年 6 月第 38 卷第 6 期 Laboratory Medicine，June 2023，Vol.38，No.6后再检测，低于检测下限的样本将对数值设定为3。1.3统计学方法采用SPSS 22.0软件进行统计分析。采用Shapiro-Wilk检验评估计量资料的正态性。呈正态分布的计量资料以xs表示，组间比较采用t检验。计数资料以率或例表示，组间比较采用2检验。采用Pearson相关分析评估miR-138相对表达量与HBV DNA载量的相关性。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1 HBV携带组和正常对照组肝功能指标比较HBV携带组ALT、AST和TB水平均显著高于正常对照组（P0.001）。见表2。表1引物序列引物名称上游引物序列（53）下游引物序列（53）miR-138 GGTGTCGTGGAGTCGGCAAAACTTCACAACACCAGCTTAU6 CTCGCTTCGGCAGCACAAACGCTTCACGAATTTGCGT表2HBV携带组和正常对照组肝功能指标比较组别例数ALT/（U/L）AST/（U/L）TB/（mol/L）HBV携带组 144 84.3715.18 89.7226.32 31.293.74正常对照组144 23.0911.34 24.7711.59 12.591.83t值38.80940.81153.894P值0.0010.0010.001注：空白表示无此项。2.2 HBV携带组和正常对照组PBMC中miR-138相对表达量比较HBV携带组PBMC中miR-138相对表达量为1.220.39，显著低于正常对照组（2.030.51）（t=15.140，P0.001）。2.3HBeAg阴性组和HBeAg阳性组HBV DNA 载量和miR-138相对表达量比较HBeAg阳性组HBV DNA载量显著高于HBeAg阴性组（P0.001），PBMC中miR-138相对表达量显著低于HBeAg阴性组（P0.001）。见表3。2.4HBV携带组PBMC中miR-138相对表达量与HBV DNA载量的相关性Pearson相关分析结果显示，HBV携带组PBMC中miR-138相对表达量与HBV DNA 载量呈负相关（r=-0.841，P0.05）。见图1。表3HBeAg阴性组和HBeAg阳性组HBV DNA 载量、PBMC中miR-138相对表达量比较组别例数miR-138HBV DNAHBeAg阳性组811.050.146.220.48HBeAg阴性组631.240.175.730.29t值10.3537.580P值0.0010.001注：空白表示无此项。图1HBV携带组PBMC中miR-138相对表达量与HBV DNA 载量的相关性3讨论目前，HBV感染已呈全球流行趋势，因此研究影响HBV携带者病毒增殖的可能机制和生物标志物十分有必要。临床一般采用乙型肝炎血清学标志物评估HBV携带者的病情，HBeAg状态可反映患者体内病毒的活跃程度11，HBV DNA相对表达量可直接反映患者体内的病毒 载量12。二者联合检测可作为早期诊断指标用于评估HBV携带者是否存在病毒复制、传染性和是否需要治疗。本研究结果显示，相对于HBeAg阴性患者，HBeAg阳性患者HBV DNA载量显著