HPLC法同时测定柿蒂中4种成分.pdf

人参研究GINSENG RESEARCH2023 年第 4 期柿蒂为柿树科植物柿Diospyros kaki Thunb.的干燥宿萼袁味苦尧涩袁性平袁归胃经袁具有降逆止呃的功效1遥此外袁柿蒂还具有抗心律失常尧镇静以及抗惊厥等药理作用袁其总鞣质具有较强的抗氧化作用袁还可抑制大鼠离体隔肌收缩反应2-4遥 柿蒂的主要有效成分为有机酸类化合物尧萜类化合物尧糖类化合物等袁其中含量最高的有机酸是熊果酸和齐墩果酸5遥柿蒂产地主要分布在四川尧广西尧广东尧山西尧福建等地袁不同产地药材成分和含量也有差异袁 从而影响柿蒂药材的临床疗效和新药开发6遥 因此袁建立一种柿蒂药材质量评价分析方法来规范其质量非常重要遥叶中国药典曳2020 版一部并未对柿蒂化学成分进行定量分析1遥 中药的化学成分复杂袁有效的中药质量定量分析方法须建立在多种复杂化学成分分析基础上遥本研究首次建立HPLC 同时测定柿蒂中没食子酸尧金丝桃苷尧槲皮素尧山柰素含量的方法袁较全面地评价了柿蒂的质量袁为其质量控制提供依据遥1 仪器与试药1.1 仪器LC-20AT 型高效液相色谱仪渊日本岛津公司冤曰AUY-120 电子天平渊日本岛津公司冤曰MILLIPORE 型纯水机渊默克密理博实验室设备渊上海冤 有限公司冤曰KQ-3200DB 型超声波清洗器渊江西赣仪科技有限公司冤曰中药粉碎机渊天津泰斯特仪器有限公司冤曰0.45 滋m滤膜渊天津津腾实验设备有限公司冤遥1.2 试药与样品没食子酸对照品渊批号院110831-201906袁纯度为91.5%冤袁金丝桃苷对照品渊批号院111521-202310袁纯度为94.7%冤袁槲皮素对照品渊批号院100081-201610袁纯度为99.1%冤袁山柰素对照品渊批号院110861-202013袁纯度为93.2%冤均购自中国食品药品检定研究院曰柿蒂药材购自辽宁省沈阳市袁 由辽宁盘锦检验检测中心主任中药师马长宏鉴定为柿树科植物柿Diospyros kakiThunb.的干燥宿萼曰乙腈尧甲醇为色谱纯渊美国Fisher公司冤曰水为娃哈哈纯净水遥2 方法与结果2.1 色谱条件Diamonsil Plus C18色谱柱渊250mm伊4.6mm袁5滋m冤曰流动相乙腈渊A冤-0.1%甲酸溶液渊B冤袁梯度洗脱渊020min袁10%20%A曰2030min袁20%27%A曰3040min袁27%40%A曰4050min袁40%80%A曰5060min袁80%100%A曰6070min袁100%10%A冤曰体积流量0.8mL 窑 min-1曰柱温30益曰检测波长264nm曰进样量20滋L遥2.2 对照品溶液的制备取没食子酸尧金丝桃苷尧槲皮素尧山柰素对照品适量袁精密称定袁加甲醇溶解袁得混合对照品溶液含没食子酸299.220滋g 窑 mL-1尧金丝桃苷60.924滋g 窑 mL-1尧槲皮素64.812滋g 窑 mL-1尧山柰素59.280滋g 窑 mL-1遥2.3 供试品溶液的制备取柿蒂药材袁粉碎渊过五号筛冤袁精密称定0.5g袁置于具塞锥形瓶袁加甲醇2.50mL袁称定袁超声处理50min袁放冷后再称定袁甲醇补足袁摇匀袁滤过袁即得遥2.4 方法学考察2.4.1 专属性试验取对照品和供试品溶液袁按野2.1冶项色谱条件进样遥 可知分离度好袁阴性无干扰袁表明该方法专属性良好遥2.4.2 线性关系考察取上述混合对照品母液加甲醇进行一定梯度的稀释袁获得5 个浓度梯度的溶液袁按野2.1冶项色谱条件进样袁以各成分质量浓度为横坐标渊X冤袁峰面积为纵坐标渊Y冤进行回归袁结果见表1遥HPLC 法同时测定柿蒂中4 种成分张浩(辽宁盘锦检验检测中心 窑 辽宁盘锦 窑 124010)摘要院目的建立HPLC 法同时测定柿蒂中没食子酸尧金丝桃苷尧槲皮素尧山柰素的含量遥 方法柿蒂甲醇提取物的分析采用Diamonsil Plus C18色谱柱渊250 mm伊4.6 mm袁5滋m冤曰流动相乙腈-0.1%甲酸溶液袁梯度洗脱曰体积流量0.8mL 窑 min-1曰柱温30 益曰检测波长264nm遥结果4 种成分在各自范围内线性关系良好渊R逸0.9996冤袁平均加样回收率为99.55%101.63%袁RSD 为0.93%1.21%遥 结论此方法简便尧稳定尧准确尧重复性好袁可为柿蒂的质量控制提供参考依据遥关键词院柿蒂曰HPLC曰没食子酸曰金丝桃苷曰槲皮素曰山柰素作者简介院张浩袁副主任中药师袁研究方向院中药检验分析及质量标准遥DOI院10.19403/ki.1671-1521.2023.园4.01238人参研究GINSENG RESEARCH2023 年第 4 期试验号渊Test number冤没食子酸渊gallic acid冤金丝桃苷渊hyperoside冤槲皮素渊quercetin冤山柰素渊kaempferol冤10.25660.04580.10720.066320.25860.04720.10920.065830.25780.04700.11260.064640.26050.04760.11130.066650.26100.04820.11210.0670平均值渊average冤0.25890.04720.11050.06612.4.3 精密度试验取野2.4.2冶项下对照品溶液适量渊质量浓度分别为没食子酸99.740滋g 窑 mL-1尧金丝桃苷20.308滋g 窑 mL-1尧槲皮素21.604滋g 窑 mL-1尧山柰素19.760滋g 窑 mL-1冤袁按野2.1冶项色谱条件进样6 次袁测得没食子酸尧金丝桃苷尧槲皮素尧山柰素峰面积RSD 分别为0.29%0.92%袁表明仪器精密度良好遥2.4.4 稳定性试验称取柿蒂药材粉末0.5 g袁按野2.3冶项方法制备供试品溶液袁于0尧4尧6尧8尧12尧24 h 按野2.1冶项色谱条件进样袁测得没食子酸尧金丝桃苷尧槲皮素尧山柰素峰面积RSD分别为0.23%0.95%袁表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好遥2.4.5 重复性试验称取柿蒂药材粉末0.5 g袁共6 份袁按野2.3冶项方法制备供试品溶液袁按野2.1冶项色谱条件进样袁测得没食子酸尧 金丝桃苷尧 槲皮素尧 山柰素含量RSD 分别为0.36%0.96%袁表明本方法重复性良好遥2.4.6 加样回收率试验称取柿蒂药材粉末0.25 g袁平行6 份袁根据上述样品成分的己知含量袁 分别精密加入各成分的对照品溶液袁按野2.3冶项方法制备供试品溶液袁按野2.1野项色谱条件进样袁 得回收率袁 没食子酸加样回收率为98.02%100.83%袁平均回收率为99.55%袁RSD 为1.10%曰金丝桃苷加样回收率为99.77%101.82%袁 平均回收率为100.69%袁RSD 为0.93%曰槲皮素加样回收率为100.09%102.89%袁平均回收率为101.63%袁RSD 为1.21%曰山柰素加样回收率为100.23%102.13%袁 平均回收率为101.36%袁RSD 为1.04%遥2.4.7 样品含量测定称取柿蒂药材粉末5 份袁每份0.5 g袁按野2.3冶项方法制备供试品溶液袁按野2.1冶项色谱条件进样袁计算含量袁结果见表2遥表 2 各成分含量测定结果渊mg 窑 g原员袁n=3冤3 讨论本实验考察不同流动相体系渊乙腈-0.1%甲酸溶液尧甲醇-0.1%甲酸溶液冤的分离效果袁发现以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相体系所得的目标峰理论塔板数低袁山柰素色谱峰分离度差袁而乙腈具有洗脱能力强尧黏度低的优点袁提高了色谱峰的理论塔板数袁出峰时间提前袁故选择乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相遥4 结论柿蒂有着悠久的药用历史袁药用价值较大袁使用范围较广袁待开发的潜力大遥本研究建立HPLC 法对柿蒂中没食子酸尧金丝桃苷尧槲皮素尧山柰素进行含量测定袁该方法操作简单尧准确可靠尧重复性好袁可为柿蒂的质量控制提供参考遥参考文献1 国家药典委员会.中华人民共和国药典院2020 版一部M.北京院中国医药科技出版社袁2020院261-262.2 周本宏袁魏嫣袁张琛霞袁等.柿蒂总鞣质的抗氧化活性研究J.广东药学院学报袁2010袁26(6)院599-601.3 周本宏袁魏嫣袁郭志磊.正交试验优选柿蒂鞣质的提取工艺J.中国药师袁2010袁13(11)院1601-1603.4 赵庆华.柿蒂提取物抑制大鼠离体膈肌收缩的作用机制及其有效部位的研究 D.河北医科大学袁2005.5 杨靖袁陈志刚袁张苗靖袁等.微波辅助提取柿蒂熊果酸和齐墩果酸的工艺研究J.农产品加工袁2020袁(8)院26-30.6 周本宏袁沈恒袁魏嫣袁等.柿蒂药材的高效液相色谱指纹图谱研究J.广东药学院学报袁2011袁27(2)院147-150.张浩院HPLC法同时测定柿蒂中4种成分表 1 各成分线性关系成分渊constituents冤回归方程渊regression equation冤线性范围渊linearity冤/渊滋g 窑 mL-1冤R没食子酸渊gallic acid冤Y=25 729.72X-1 718.4424.935299.2200.9999金丝桃苷渊hyperoside冤Y=54 463.78X-2 587.795.07760.9240.9997槲皮素渊quercetin冤Y=39 197.17X+217.975.40164.8120.9998山柰素渊kaempferol冤Y=45 880.26X+515.274.94059.2800.999639