ET-1对血管平滑肌细胞ANO1表达的影响及机制.pdf

第5 9卷 第3期2 0 2 3年0 6月青 岛 大 学 学 报(医 学 版)J OUR NA LO FQ I N G D AOUN I V E R S I T Y(ME D I C A LS C I E N C E S)V o l.5 9,N o.3J u n e 2 0 2 3 收稿日期2 0 2 1-1 2-0 9;修订日期2 0 2 2-0 6-1 1 基金项目山东省自然科学基金项目(Z R 2 0 1 9 MH 1 1 0);青岛市民生科技计划项目(1 9-6-1-1 9-n s h)第一作者吴雪(1 9 9 7-),女,硕士研究生。通信作者韩晓华(1 9 6 8-),女,博士,副教授,硕士生导师。E-m a i l:x i a o h u a.h a n 1 6 3.c o m。E T-1对血管平滑肌细胞ANO 1表达的影响及机制吴雪,张文秀,赵慧,韩晓华(青岛大学基础医学院生理学与病理生理学系,山东 青岛 2 6 6 0 7 1)摘要 目的 探讨内皮素-1(E T-1)对大鼠血管平滑肌细胞(V S MC s)钙激活氯通道a n o c t a m i n1(ANO 1)表达的影响及机制。方法 以不同浓度(0.1、1.0、1 0.0、1 0 0.0、10 0 0.0n m o l/L)E T-1处理V S MC s 2 4h或用1.0n m o l/LE T-1处理不同时间(1、6、1 2、2 4、4 8h),观察E T-1对ANO 1蛋白表达的影响。用磷酸肌醇-3-激酶(P I 3 K)抑制剂L Y 2 9 4 0 0 2阻断P I 3 K/AK T通路,检测磷酸化AK T(p-AK T)和ANO 1蛋白表达的变化。采用组织贴块法进行大鼠胸主动脉V S MC s的原代培养,采用W e s t e r nb l o t法检测ANO 1蛋白水平。结果 0.110 0 0.0n m o l/LE T-1处理明显促进ANO 1蛋白表达(F=4.3 0 2,P0.0 5),以1.0n m o l/LE T-1作用最为显著(q=8.7 0 7,P0.0 5)。用1.0n m o l/LE T-1处理细胞不同时间后,ANO 1蛋白表达水平增加(F=4.8 5 6,P0.0 5),其中E T-1作用1 24 8hANO 1表达差异具有统计学意义(q=2.9 0 35.6 7 3,P0.0 5)。采用L Y 2 9 4 0 0 2(1 0m o l/L)预处理后,与E T-1组相比较,L Y 2 9 4 0 0 2+E T-1组p-AK T和ANO 1蛋白的表达水平均显著降低(F=2 6.3 4 0、1 2.4 6 0,q=1 1.2 2 0、8.5 1 2,P0.0 5)。结论 E T-1对V S MC s的ANO 1表达具有明显的上调作用,该作用可能和激活P I 3 K/AK T信号通路有关。关键词 内皮缩血管肽1;血管;肌细胞,平滑肌;a n o c t a m i n-1蛋白 中图分类号 R 3 3 1.3 2 文献标志码 A 文章编号 2 0 9 6-5 5 3 2(2 0 2 3)0 3-0 3 7 9-0 4d o i:1 0.1 1 7 1 2/j m s.2 0 9 6-5 5 3 2.2 0 2 3.5 9.0 1 6 开放科学(资源服务)标识码(O S I D)网络出版 h t t p s:/k n s.c n k i.n e t/k c m s/d e t a i l/3 7.1 5 1 7.R.2 0 2 3 0 3 0 3.0 9 1 1.0 0 4.h t m l;2 0 2 3-0 3-0 3 1 7:3 1:0 7E F F E C TO FE N D O T H E L I N-1O NT H EE X P R E S S I O NO FA N O C T AM I N1I NV A S C U L A RS MO O T H MU S C L EC E L L SO FR A T SA N DI T SME C H A N I S M WUX u e,ZHANG W e n x i u,ZHA O H u i,HAN X i a o h u a(D e p a r t m e n to fP h y s i o l o g ya n dP a t h o p h y-s i o l o g y,S c h o o l o fB a s i cM e d i c i n e,Q i n g d a oU n i v e r s i t y,Q i n g d a o2 6 6 0 7 1,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h ee f f e c t o f e n d o t h e l i n-1(E T-1)o n t h e e x p r e s s i o no f a n o c t a m i n1(ANO 1)i nv a s-c u l a r s m o o t hm u s c l ec e l l s(V S MC s)o f r a t sa n d i t sm e c h a n i s m.M e t h o d s V S MC sw e r et r e a t e dw i t hd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n so fE T-1(0.1,1.0,1 0.0,1 0 0.0,a n d10 0 0.0n m o l/L)f o r 2 4ho r t r e a t e dw i t h1.0n m o l/LE T-1 f o r d i f f e r e n t t i m e s(1,6,1 2,2 4,a n d4 8h)t oo b s e r v et h ee f f e c to fE T-1o nt h ep r o t e i ne x p r e s s i o no fANO 1.A p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l-3k i n a s e(P I 3 K)b l o c k e r,L Y 2 9 4 0 0 2,w a su s e dt ob l o c kt h eP I 3 K/AK Tp a t h w a y,a n dt h ep r o t e i ne x p r e s s i o nl e v e l so fp h o s p h o r y l a t e dAK T(p-AK T)a n dANO 1w e r em e a s u r e d.T h e t i s s u eb l o c km e t h o dw a su s e df o r t h ep r i m a r yc u l t u r eo fV S MC sf r o mt h et h o r a c i ca o r t ao f r a t s,a n dW e s t e r nb l o tw a su s e d t om e a s u r e t h ep r o t e i ne x p r e s s i o n l e v e l o fANO 1.R e s u l t s E T-1 t r e a t m e n t a t t h e c o n c e n t r a t i o n s o f 0.1-10 0 0.0n m o l/Ls i g n i f i c a n t l yp r o m o t e dt h ep r o t e i ne x p r e s s i o n l e v e l o fANO 1(F=4.3 0 2,P0.0 5),a n d1.0n m o l/LE T-1s h o w e dt h em o s t r e m a r k a b l e e f f e c t(q=8.7 0 7,P0.0 5).A f t e r t h e c e l l sw e r e t r e a t e dw i t h1.0n m o l/LE T-1 f o r d i f f e r e n t t i m e s,t h e r ew a sas i g n i f i c a n t i n c r e a s e i nt h ep r o t e i ne x p r e s s i o n l e v e l o fANO 1(F=4.8 5 6,P0.0 5),a n dt h ec e l l s t r e a t e dw i t hE T-1f o r1 2-4 8hs h o w e dt h eg r e a t e s tc h a n g ei nt h ee x p r e s s i o no fANO 1(q=2.9 0 3-5.6 7 3,P0.0 5).A f t e rp r e t r e a t m e n tw i t hL Y 2 9 4 0 0 2(1 0m o l/L),t h eL Y 2 9 4 0 0 2+E T-1g r o u ph a ds i g n i f i c a n tr e d u c t i o n s i nt h ep r o t e i ne x p r e s s i o nl e v e l so fp-AK Ta n dANO 1c o m-p a r e dw i t ht h eE T-1g r o u p(F=2 6.3 4 0,1 2.4 6 0,q=1 1.2 2 0,8.5 1 2,P0.0 5).C o n c l u s i o n E T-1c a ns i g n i f i c a n t l yu p r e g u l a t et h ee x p r e s s i o no fANO 1 i nV S MC s,w h i c hm a yb ea s s o c i a t e dw i t ha c t i v a t i o no f t h eP I 3 K/AK Ts i g n a l i n gp a t h w a y.K E Y WO R D S e n d o t h e l i n-1;b l o o dv e s s e l s;m y o c y t e s,s m o o t hm u s c l e;a n o c t a m i n-1 高血压是目前发病率最高的心血管疾病之一,血管平滑肌细胞(V S MC s)功能异常在高血压的发生发展中起关键作用1-2。a n o c t a m i n1(ANO 1)是2 0 0 8年发现的钙激活氯通道,广泛分布于各种血管组织3。研究表明,ANO 1参与正常血管舒缩功能的调节4-5;此外它还参与多种高血压模型的血管重构过程6-8。研究发现,血管紧张素(A n g)可以明显上调正常大鼠V S MC s的ANO 1表达,该作用可能与激活磷酸肌醇-3-激酶(P I 3 K)/AK T信号通路有关6,9。内皮素-1(E T-1)是一种由血管内皮细 3 8 0青 岛 大 学 学 报(医 学 版)5 9卷胞合成和分泌的血管活性物质1 0-1 1。E T-1可以通过升高胞内钙水平激活HE K 2 9 3细胞的钙激活氯通道1 2,故我们推测E T-1可能可以上调V S MC s的ANO 1蛋白表达水平。本研究利用原代培养的V S MC s,观察了E T-1对ANO 1表达的影响并初步探讨其可能机制。1 材料与方法1.1 试剂与仪器E T-1购自上海A b M o l e公司;ANO 1抗体由上海A b c a m公司提供;-a c t i n抗体由北