Barx2驱动口腔鳞状细胞癌肿瘤特异性MHC-Ⅱ类信号诱导CD4%5E%28 %29T_CD8%5E%28 %29T细胞活化.pdf

基金项目 国家自然科学基金(编号:8 2 2 7 3 2 0 1、8 1 9 7 2 5 5 2)作者简介 李易玮(1 9 9 7),女,湖北武汉人,硕士在读,主要从事口腔肿瘤基础研究。*通信作者 张佳莉,E-m a i l:j i a l i_z h a n g w h u.e d u.c n口腔颌面外科学研究B a r x 2驱动口腔鳞状细胞癌肿瘤特异性MH C-类信号诱导C D 4+T/C D 8+T细胞活化李易玮 孙雅楠 潘军臣 胡雅英 张钰莹 马纪源 张佳莉*口颌系统重建与再生全国重点实验室,口腔生物医学教育部重点实验室,口腔医学湖北省重点实验室,武汉大学口腔医(学)院口腔病理科 湖北 武汉 4 3 0 0 7 9 摘要 目的:探究B a r H-样同源框蛋白2(B a r H-l i k e h o m e o b o x 2,B a r x 2)通过促进MHC 类信号通路杀伤肿瘤细胞的机制。方法:(1)通过高通量测序,q P C R和W e s t e r n B l o t实验分析B a r x 2过表达的O S C C细胞系中CT A/MHC-信号轴相关分子的表达量;(2)双荧光素酶实验验证B a r x 2与CT A p 启动子的结合;(3)提取人外周血单核细胞(P BMC),分别与对照组和B a r x 2过表达组肿瘤细胞共培养。共培养后,结晶紫染色检测肿瘤细胞的数量;应用C F S E染色标记及流式细胞学实验分析P BMC中C D 4+T细胞和C D 8+T细胞增殖活性。结果:(1)高通量转录组测序结果结合G S E A-基因集富集分析和K E G G信号通路分析发现,过表达B a r x 2 上调了抗原加工与提呈通路MHC-信号分子相关因子;在B a r x 2过表达细胞系中,q P C R及W e s t e r n b l o t进一步验证了上述基因表达的显著上调;(2)B a r x 2能直接与CT A p 启动子上游结合,促进主要表达于淋巴细胞的CTA转录本的转录。(3)肿瘤细胞与P BMC共培养后,B a r x 2过表达肿瘤细胞的增殖被显著抑制;过表达B a r x 2的肿瘤细胞显著促进了C D 4+T和C D 8+T细胞的增殖活性。结论:B a r x 2通过驱动CT A/MHC-信号轴活化,促进肿瘤细胞表达以HL A-D R为主的MHC-类分子,从而活化C D 4+T细胞和C D 8+T细胞,发挥杀伤肿瘤细胞的作用。关键词 B a r H-样同源框蛋白2;MHC-;口腔鳞状细胞癌;肿瘤免疫 文献标识码 A 文章编号 1 6 7 17 6 5 1(2 0 2 3)0 80 6 8 40 6d o i 1 0.1 3 7 0 1/j.c n k i.k q y x y j.2 0 2 3.0 8.0 0 5B a r x 2 D r i v e s T u m o r-s p e c i f i c MH C-S i g n a l i n g t o I n d u c e C D 4+T/C D 8+T C e l l A c t i v a t i o n i n O r a l S q u a m o u s C e l l C a r c i-n o m a.L I Y i w e i,S UN Y a n a n,P AN J u n c h e n,HU Y a y i n g,ZHANG Y u y i n g,MA J i y u a n,ZHANG J i a l i*.S t a t e K e y L a b o r a t o r y o f O r a l&M a x i l l o f a c i a l R e c o n s t r u c t i o n a n d R e g e n e r a t i o n,K e y L a b o r a t o r y o f O r a l B i o-m e d i c i n e M i n i s t r y o f E d u c a t i o n,H u b e i K e y L a b o r a t o r y o f S t o m a t o l o g y,D e p a r t m e n t o f O r a l P a t h o l o g y,S c h o o l&H o s p i t a l o f S t o m a t o l o g y,W u h a n U n i v e r s i t y,W u h a n 4 3 0 0 7 9,C h i n a.A b s t r a c t O b j e c t i v e:T o e x p l o r e t h e m e c h a n i s m o f B a r H-l i k e h o m e o b o x 2(B a r x 2)k i l l i n g t u m o r c e l l s b y p r o m o-t i n g MHC C l a s s m o l e c u l e s.M e t h o d s:T h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f CTA/MHC-r e l a t e d m o l e c u l e s i n B a r x 2 o v e r-e x p r e s s e d O S C C c e l l l i n e s w e r e a n a l y z e d b y h i g h-t h r o u g h p u t s e q u e n c i n g,q P C R,a n d W e s t e r n B l o t.T h e c o m b i n a-t i o n o f B a r x 2 a n d CT A p p r o m o t e r w a s v e r i f i e d b y d o u b l e l u c i f e r a s e a s s a y.H u m a n p e r i p h e r a l b l o o d m o n o n u c l e-a r c e l l s(P BMC)w e r e e x t r a c t e d a n d c o-c u l t u r e d w i t h t u m o r c e l l s i n t h e c o n t r o l g r o u p a n d B a r x 2 o v e r e x p r e s s i o n g r o u p,a n d t h e n u m b e r o f t u m o r c e l l s w a s d e t e c t e d b y c r y s t a l v i o l e t s t a i n i n g.T h e p r o l i f e r a t i o n a c t i v i t y o f C D 4+T c e l l s a n d C D 8+T c e l l s i n P BMC w a s a n a l y z e d b y f l o w c y t o m e t r y a f t e r l a b e l i n g P BMC w i t h C F S E.R e s u l t s:H i g h-t h r o u g h p u t t r a n s c r i p t o m e s e q u e n c i n g r e s u l t s c o m b i n e d w i t h G S E A g e n e s e t e n r i c h m e n t a n a l y s i s a n d K E G G s i g n a l i n g p a t h w a y a n a l y s i s s h o w e d t h a t o v e r e x p r e s s i o n o f B a r x 2 e n h a n c e d t h e u p-r e g u l a t i o n o f f a c t o r s r e l a t e d t o a n t i g e n p r o-c e s s i n g a n d p r e s e n t a t i o n p a t h w a y a n d MHC-s i g n a l i n g m o l e c u l e s.I n B a r x 2 o v e r e x p r e s s e d c e l l l i n e s,q P C R a n d W e s t e r n b l o t f u r t h e r c o n f i r m e d t h e s i g n i f i c a n t u p r e g u l a t i o n o f t h e a b o v e g e n e s.B a r x 2 c o u l d d i r e c t l y b i n d u p s t r e a m t o CTA p p r o m o t e r.A f t e r c o-c u l t u r e w i t h P BMC,t h e n u m b e r o f t u m o r c e l l s o v e r e x p r e s s i n g B a r x 2 w a s s i g n i f i-c a n t l y l e s s t h a n t h a t i n t h e c o n t r o l g r o u p.O v e r e x p r e s s i o n o f B a r x 2 t u m o r c e l l s p r o m o t e d t h e p r o l i f e r a t i o n o f C D 4+T a n d C D 8+T c e l l s.C o n c l u s i o n:B a r x 2 c a n d r i v e t h e a c t i v a t i o n o f CTA/MHC-s i g n a l a x i s,i n d u c e t h e e x p r e s s i o n o f HL A-D R-d o m i n a t e d MHC-c l a s s m o l e c u l e s i n t u m o r 486J o u r n a l o f O r a l S c i e n c e R e s e a r c h,A u g.2 0 2 3,V o l.3 9,N o.8 c e l l s,a n d f u r t h e r a c t i v a t e C D 4+T a n d C D 8+T c e l l s t o p l a y a r o l e i n k i l l i n g t u m o r c e l l s.K e y w o r d s B a r H-l i k e h o m e o b o x 2;MHC-;o r a l s q u a m o u s c e l l c a r c i n o m a;i mm u n i t y t o t u m o r s 近年来,免疫疗法在恶性肿瘤治疗方面获得了突破性进展,包括免疫检查点抑制在内的多种疗法显著提高了部分肿瘤患者的生存率,但仍有许多患者不能从中获益1。因此,进一步了解肿瘤细胞如何表达免疫相关细胞因子以及如何被T细胞识别是十分重要