白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量分析及风险评价.pdf

h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量分析及风险评价李 立1,罗 轶1*,李丽莉1*,蒋 湘2,黄燕红21.广西壮族自治区食品药品检验所,国家药品监督管理局中药材质量监测与评价重点实验室,南宁 5 3 0 0 2 1;2.广西 东盟食品检验检测中心,南宁 5 3 0 0 2 1摘要:目的 建立超高效液相色谱 串联质谱法(u l t r a p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y,U P L C-M S/M S)测定白背三七中芝麻菜叶千里光碱-N-氧化物、春千里光碱、野百合碱、春千里光碱-N-氧化物、倒千里光碱、千里光菲灵碱和千里光宁碱的含量,依据检测结果对其进行初步风险评价。方法 用A g i l e n t P o r o s h e l l 1 2 0 S B-C1 8色谱柱(1 5 0 mm3.0 mm,2.7 m),流动相A为1 m LL-1甲酸和5.0 mm o lL-1甲酸铵水溶液,B为1 m LL-1甲酸的甲醇,梯度洗脱。电喷雾离子源,正离子多反应模式监测。结果 7种吡咯里西啶生物碱在各自质量浓度范围内线性关系良好(r0.9 9 7 0);平均加样回收率为8 9.3 1%9 2.1 6%,R S D值为2.0 2%3.4 8%。5批白背三七样品中倒千里光碱的含 量 范围 为1 5 8.7 61 7 1 4.8 9 gk g-1。结论 建立的U P L C-M S/M S法稳定可行,可为白背三七中吡咯里西啶生物碱的质量控制和安全性评价提供科学依据。关键词:白背三七;吡咯里西啶生物碱;风险评价;超高效液相色谱 串联质谱法D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 4-2 4 0 7.2 0 2 3.0 5.0 0 6中图分类号:R 9 2 7.2 文献标志码:A 文章编号:1 0 0 4-2 4 0 7(2 0 2 3)0 5-0 0 3 1-0 6C o n t e n t a n a l y s i s a n d r i s k a s s e s s m e n t o f p y r r o l i z i d i n e a l k a l o i d s i n G y n u r a d i v a r i c a-t a(L.)D C.L I L i1,L UO Y i1*,L I L i l i1*,J I ANG X i a n g2,HUAN G Y a n h o n g21.G u a n g x i I n s t i t u t e f o r F o o d a n d D r u g C o n t r o l,NMP A K e y L a b o r a t o r y f o r Q u a l i t y M o n i t o r i n g a n d E v a l u a t i o n o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e,C h i n e s e M a t e r i a M e d i c a,N a n n i n g 5 3 0 0 2 1,C h i n a;2.G u a n g x i-A s e a n C e n t e r f o r F o o d S a f e t y C o n t r o l,N a n n i n g 5 3 0 0 2 1,C h i n aA b s t r a c t:OO bb jj ee cc tt ii vv ee T o e s t a b l i s h a m e t h o d f o r t h e s i m u l t a n e o u s d e t e r m i n a t i o n o f e r u c i f o l i n e N-o x i d e,s e n e c i v e r n i n e,c r o t a l i n e,s e-n e c i v e r n i n e N-o x i d e,r e t r o r s i n e,s e n e c i p h y l l i n e a n d s e n e c i o n i n e i n G y n u r a d i v a r i c a t a(L.)D C.b y u l t r a p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o-m a t o g r a p h t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y(U P L C-M S/M S),a n d t o c a r r y o u t r i s k a s s e s s m e n t a c c o r d i n g t o t h e r e s e a r c h r e s u l t s.MM ee tt hh oo dd ss T h e a s s a y w a s p e r f o r m e d o n a n A g i l e n t P o r o s h e l l 1 2 0 S B-C1 8 c o l u m n(1 5 0 mm3.0 mm,2.7 m)a n d t h e s a m p l e w a s e l u t e d w i t h a g r a d i e n t m o b i l e p h a s e c o n s i s t i n g o f 1 m LL-1 f o r m i c a c i d a n d 5.0 mm o lL-1 a mm o n i u m f o r m a t e i n w a t e r-1 m LL-1 f o r m i c a c i d i n m e t h a n o l.T h e M S s y s t e m w a s o p e r a t e d b y u s i n g e l e c t r o s p r a y i o n i z a t i o n i n t h e p o s i t i v e i o n m o d e,a n d t h e s c a n m o d e w a s i n m u l t i p l e r e a c t i o n s m o n i t o r i n g m o d e.RR ee ss uu ll tt ss S e v e n p y r r o l i z i d i n e a l k a l o i d s s h o w e d g o o d l i n e a r r e l a t i o n s h i p s w i t h i n t h e i r o w n r a n g e s(r0.9 9 7 0).T h e a v e r a g e r e c o v e r i e s w e r e 8 9.3 1%-9 2.1 6%w i t h R S D o f 2.0 2%-3.4 8%.T h e c o n t e n t r a n g e s o f r e t r o r s i n e i n t h e 5 b a t c h e s o f G y n u r a d i v a r i c a t a(L.)D C.w e r e 1 5 8.7 6-1 7 1 4.8 9 gk g-1.CC oo nn cc ll uu ss ii oo nn T h e m e t h o d e s t a b l i s h e d i n t h i s s t u d y p r o v i d e s a s c i e n t i f i c b a s i s f o r t h e q u a l i t y c o n t r o l a n d s a f e t y e v a l u a t i o n o f p y r r o l i z i d i n e a l k a l o i d s i n G y n u r a d i v a r i c a t a(L.)D C.K e y w o r d s:G y n u r a d i v a r i c a t a(L.)D C.;p y r r o l i z i d i n e a l k a l o i d s;r i s k a s s e s s m e n t;U P L C-M S/M S作者简介:李立,女,主管药师*共同通信作者:罗轶,女,主任药师;李丽莉,女,副主任药师 白背三七G y n u r a d i v a r i c a t a(L.)D C.为菊科三七草属植物白子菜的全草,又名金鸡毛草、白子菜、鸡毛菜等,具有清热、活血、止血的功效,主治咳嗽、疮疡、烫火伤、跌打损伤、风湿痛、崩漏及外伤出血1。白背三七是广西常见的壮瑶药之一,可用于各种炎症的治疗,民间广泛应用于高血脂症、胃病、糖尿病和高血压的治疗2。近年来,学者从白背三七中分离得到了黄酮类、三萜类、甾醇类、核苷类、生物碱类等化学成分3-6。李丽梅等7用液相色谱 质谱联用(l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y-m a s s s p e c t r o m e t r y,L C-M S)技术检测出白背三七中含有全缘千里光碱。吡咯里西啶生物碱(p y r r o l i z i d i n e a l k a l o i d s,P A s)及 其 氮 氧 化 物(p y r r o l i z i d i n e a l k a l o i d N-o x i d e s,P ANO s)的分子结构是1,2位具有双键的双稠吡咯啶环,其不饱和双键结构是P A s及P ANO s产生毒性的前提,摄入过多或过久都会导致不可逆的肝损伤,严重者会出现肝硬化及肝纤维化8-1 5。2 0 2 0年欧盟发布关于食品中P A s的含量规定,草药的最高限量规定为2 0 0 gk g-1,该规定适用于草药及所有食品原料,于2 0 2 2年7月1日正式实施1 6。因此对中草药的P A s及P ANO s13西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t进行检测具有重要意义。目前已在菊科植物中检测到倒千里光碱、千里光菲灵碱和千里光宁碱等P A s及P ANO s1 7-1 8。白背三七是菊科植物,但未有文献报道白背三七中含有P A s及P ANO s。本文根据文献报道菊科植物中存在的P A s及P ANO s,用超高效液相色谱 串联质谱法(u l t r a p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y,U P L C-M S/M S)对白 背三七中的芝麻菜叶千里光碱-N-氧化物、春千里光碱、野百合碱、春千里光碱-N-氧化物、倒千里光碱、千里光菲灵碱和千里光宁碱进行筛查,其分子结构见图1,根据筛查结果初步对其进行风险评价。注:1.芝麻菜叶千里光碱-N-氧化物;2.春千里光碱;3.春千里光碱-N-氧化物;4.倒千里光碱;5.千里光菲灵碱;6.千里光宁碱;7.野百合碱。图1 吡咯里西啶生物碱的分子结构F i g.1 M o l e c u