miRNA-19、miRNA-146、miRNA-155在支气管哮喘患者中的表达及与气道重塑的相关性.pdf

实验与检验医学 2023 年 4 月第 41 卷第 2 期 Experimental and Laboratory Medicine,Apr.2023,Vol.41,No.2miRNA-19、miRNA-146、miRNA-155 在支气管哮喘患者中的表达及与气道重塑的相关性苏爱峰1，王怀俊1，李云2渊1.南阳市第二人民医院呼吸与危重症医学科袁河南 南阳 473012;2.南阳市第二人民医院内分泌科袁河南 南阳 473012冤支气管哮喘是临床常见的变态反应性呼吸内科疾病袁患者临床以气道慢性炎症尧气道高反应性为主要表现1遥 支气管哮喘具有发病急骤尧进展迅速等特点袁患者若得不到及时救治袁可能引起气道不可逆缩窄及气道重塑袁从而严重影响生命安全2遥现阶段关于支气管哮喘的发病机制尚未完全阐明袁微小 RNA渊miRNA冤已被证实对支气管哮喘的发生及发展有着重要作用3遥 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 均属于 miRNA 家族袁能通过转录调控靶基因袁 进而影响生命过程中的重要生理病理进程遥近年来临床关于 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 与自身免疫疾病尧 肿瘤发生及发展的报道较多4-6袁但关于三者在支气管哮喘患者血清中表达的研究鲜少遥 基于此袁本研究探讨 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 在支气管哮喘患者中的表达及与气道重塑的相关性袁现将结果报告如下遥1 资料与方法1.1 一般资料选取 2019 年 2 月至 2021 年 2 月92 例支气管哮喘患者作为研究组遥 纳入标准院渊1冤符合叶支气管哮喘防治指南曳7中诊断标准曰渊2冤处于缓解期曰渊3冤年龄不低于 18 岁曰渊4冤近期未接受抗生素尧糖皮质激素和抗组胺药物治疗曰渊5冤患者签署知情同意书曰渊6冤具备基本理解尧表达能力袁积极配合研究遥 排除标准院渊1冤 存在肺部手术史者曰渊2冤合并肺部肿瘤尧气胸尧慢性支气管炎尧支气管扩张及支气管囊性纤维化者曰渊3冤精神及认知功能严重损伤者曰渊4冤合并严重感染尧自身免疫性疾病者曰渊5冤合并结核性哮喘尧心源性哮喘等其他类型哮喘者曰渊6冤合并心尧脑尧肾等重要器官功能严重障碍者曰渊7冤临床资料不完整者遥 另取同期 60 例健康体检者作为对照组遥 研究组院男性 52 例袁女性 40 例曰年龄 2467 岁袁平均渊45.82依7.14冤岁曰体质量指数18.25-25.28 kg/m2袁平均渊22.19依1.56冤 kg/m2遥 对照组院男性 34 例袁女性 26 例曰年龄 2663 岁袁平均渊46.34依6.84冤岁曰体质量指数 18.82-24.95 kg/m2袁平均渊21.94依1.32冤 kg/m2遥 两组一般资料比较袁差异无统计学意义渊P跃0.05冤遥1.2 方法1.2.1血清 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155检测 于清晨采集所有受试者空腹静脉血 3 mL袁摘要:目的 探讨微小 RNA-19渊miRNA-19冤尧微小 RNA-146渊miRNA-146冤尧微小 RNA-155渊miRNA-155冤在支气管哮喘患者中的表达及与气道重塑的相关性遥 方法 选取 2019 年 2 月至 2021 年 2 月 92 例支气管哮喘患者作为研究组袁根据病情严重程度分为重度组渊n=17冤尧中度组渊n=30冤及轻度组渊n=45冤袁根据胸部高分辨率 CT 诊断结果将研究组分为气道重塑组渊n=34冤及非重塑组渊n=58冤袁另取同期 60 例健康体检者作为对照组袁检测并比较各组血清 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155袁采用 Perason 相关性系数分析血清 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 与病情严重程度尧气道重塑的相关性遥 结果 研究组血清 miRNA-19尧miRNA-146 水平高于对照组袁miRNA-155 水平低于对照组渊P约0.05冤曰重度组血清 miRNA-19尧miRNA-146水平均高于中度组尧轻度组袁中度组血清 miRNA-19尧miRNA-146 水平均高于轻度组渊P约0.05冤曰重度组血清 miRNA-155 水平低于中度组尧轻度组袁中度组血清 miRNA-155 水平低于轻度组渊P约0.05冤曰重塑组血清 miRNA-19尧miRNA-146 水平均高于非重塑组袁miRNA-155 水平低于非重塑组渊P约0.05冤曰Perason 相关性分析显示袁血清 miRNA-19尧miRNA-146 与病情严重程度尧气道重塑呈正相关袁血清 miRNA-155 与病情严重程度尧气道重塑呈负相关渊P约0.05冤遥 结论 支气管哮喘患者血清 miRNA-19尧miRNA-146 呈高表达尧miRNA-155 呈低表达袁三者均与病情严重程度及气道重塑情况存在相关性遥关键词:支气管哮喘曰微小 RNA-19曰微小 RNA-146曰微小 RNA-155曰病情严重程度中图分类号：R562.2+5文献标识码：A文章编号：1674-1129(2023)02-0234-04DOI院10.3969/j.issn.1674-1129.2023.02.030 检验与临床 234窑窑实验与检验医学 2023 年 4 月第 41 卷第 2 期 Experimental and Laboratory Medicine,Apr.2023,Vol.41,No.2以 3 000 r/min 离心速度袁 离心 10 min 后取上清液袁贮存于不含抗凝剂或防腐剂的试管袁于-80益冰箱保存袁并于当天完成检验遥 采用实时荧光定量聚合酶链反应渊RT-PCR冤检测血清 miRNA-19尧miR鄄NA-146尧miRNA-155 水平袁 采用 RNeasy Mini Kit总 RNA 提取试剂盒 渊购置于美国 Life Technology公司袁批号院20183845冤袁严格遵循操作步骤提取血清游离总 RNA袁将其逆转录成 cDNA 用于扩增袁以U6 为内参袁其中 miRNA-19 引物序列8院5-AGU鄄UUUGCAUAGUUGCACUACA-3曰miRNA-146 引物序列9院5-GCTGAGAACTGAATTCCATGGGT-3曰miRNA-155 引物序列10院5-CTCAACTGGT鄄GTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGA鄄GACCCCTAT-3遥 按照涉及的循环参数进行 PCR扩增袁 反应条件院95益预变性 5 min袁95益变性 10min袁60益退火 20 s袁72益延伸 20 s袁 共计 42 个循环遥 结果使用吟循环阈值渊Ct冤法处理袁吟Ct=目标Ct 值-内参 Ct 值袁miRNA-19尧miRNA-146尧miR鄄NA-155 表达水平使用 2-吟吟Ct表示遥1.2.2 气道重塑 所有受试者均接受胸部高分辨率CT 扫描渊飞利浦 Ingenuity64 排螺旋 CT 机冤袁以评估气道重塑情况遥 患者取仰卧位袁深吸气屏住呼吸进行 CT 薄层扫描袁采用估算法对气道进行三维重建袁采用 120kV 扫描电压范围于肺尖至肺底袁层厚1 mm袁层距 10 mm袁矩阵 512伊512袁窗宽 1500HU袁窗外-450HU遥 选择主动脉弓层 面上下 4 个层面袁每个气道每项参数均测量 3 次袁取平均值袁具体参数为院 气管内径 渊L冤尧 气管壁厚度与外径比值渊T/D冤尧气管壁面积与气管总横断面积比值渊WA冤袁其中 WA=渊气道腔面积-气道总面积冤/气道总面积伊100%遥1.3 观察指标 渊1冤比较研究组尧对照组血清 miR鄄NA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 水平遥 渊2冤比较不同病情严重程度患者血清 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 水平袁 根据病情严重程度将研究组分为重度组渊n=17冤尧中度组渊n=30冤及轻度组渊n=45冤袁病情严重程度参考叶支气管哮喘防治指南曳7遥渊3冤 比较不同气道重塑情况患者血清 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 水平袁根据胸部高分辨率CT 诊断结果将研究组分为气道重塑组渊n=34冤及非重塑组渊n=58冤遥 渊4冤分析血清 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 与病情严重程度尧 气道重塑的相关性遥1.4 统计学方法 采用 SPSS20.0 统计软件处理数据遥 计量资料以均数依标准差渊x依s冤表示袁两组间比较采用 t 检验曰 采用 Perason 相关性系数分析血清miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 与病情严重程度尧气道重塑的相关性遥 P约0.05 为差异有统计学意义遥2 结果2.1两组血清 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 水平比较研究组血清 miRNA-19尧miRNA-146 水平均高于对照组袁miRNA-155 水平低于对照组渊P约0.05冤遥 见表 1遥2.2 不同病情严重程度患者血清 miRNA-19尧miR鄄NA-146尧miRNA-155 水平比较 重度组血清 miR鄄NA-19尧miRNA-146 水平均高于中度组尧 轻度组袁中度组血清 miRNA-19尧miRNA-146 水平均高于轻度组渊P约0.05冤遥 重度组血清 miRNA-155 水平低于中度组尧轻度组袁中度组血清 miRNA-155 水平低于轻度组渊P约0.05冤遥 见表 2遥2.3 不同气道重塑情况患者血清 miRNA-19尧miR鄄NA-146尧miRNA-155 水平比较 重塑组血清 miR鄄NA-19尧miRNA-146 水平均高于非重塑组袁miR鄄NA-155 水平低于非重塑组渊P约0.05冤遥 见表 3遥2.4 血清 miRNA-19尧miRNA-146尧miRNA-155 与病情严重程度尧 气道重塑的相关性分析 Perason相关性分析显示袁血清 miRNA-19尧miRNA-146 与miRNA-19miRNA-1463.260.821.340.2917.4230.0002.450.471.010.2421.9240.000miRNA-1550.510.130.840.2111.9710.000组别n研究组对照组t 值P值9260表 1两 组 血 清 miRNA-19、miR-NA-146、miRNA-155 水平比较（xs）表 2 不同病情严重程度患者血清 miRNA-19、miRNA-146、miRNA-155 水平比较（xs）miRNA-19miRNA-1464.470.71ab3.550.64a2.610.5165.8180.0003.620.42ab2.820.33a1.760.29224.3310.000miRNA-1550.360.11ab0.460.16a0.600.1914.4900.000组别n重度组中度组轻度组F值P值173045注院与轻度组比较袁aP约0.05曰与中度组比较袁bP约0.05遥235窑窑实验与检验医学 2023 年 4 月第 41 卷第 2 期 Experimental and Laboratory Medicine,Apr.2023,Vol.41,No.2病情严重程度尧气道重塑呈正相关袁血清 miRNA-155 与病情严重程度尧 气道重塑呈负相关 渊P约0.05冤遥 见表 4遥3 讨论目前全球范围内哮喘发病率不断升高袁 哮喘发作时会释放大量炎症因子袁损伤气道内皮组织袁破坏气道壁细胞功能袁引起气道狭窄袁从而导致气道重塑11-12遥 临床研究发现袁气道重塑是支气管哮喘发生及病情进展的基础13遥如何延缓支气管哮喘患者气道重塑已逐渐成为临床研究的热点内容遥因此袁 探寻可以有效预测气道重塑的血清标志物对控制病情进展尧改善气道重塑具有重要的价值遥既往研究显示袁嗜酸性粒细胞尧白细胞介素等炎症因子与支气管哮喘有关袁但其特异度不高袁无法准确预测气道重塑情况14遥 miRNA 能作用于多个靶位基因袁在炎症发生尧细胞凋亡及肿瘤形成等生物过程中起着关键作用袁 是免疫系统中重要的调节