miR-429对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制.pdf

精准医学杂志2 0 2 3年1 0月第3 8卷第5期 JP r e c i sM e d,O c t o b e r2 0 2 3,V o l.3 8,N o.5d o i:1 0.1 3 3 6 2/j.j p m e d.2 0 2 3 0 5 0 0 6 文章编号:2 0 9 6-5 2 9 X(2 0 2 3)0 5-0 4 0 0-0 6 收稿日期2 0 2 3-0 4-0 2;修订日期2 0 2 3-0 6-1 0 基金项目山东省重点研发项目(2 0 1 9 G S F 1 0 7 0 2 5)通讯作者吴琍,Em a i l:w u l i q d 1 6 3.c o mm i R-4 2 9对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制牛婷婷1 吴琍1 侯琳2 仇碧茹2 赵晓晖1 李金洋1(1 青岛大学附属医院乳腺外科,山东 青岛 2 6 6 0 0 3;2 青岛大学医学部生物化学与分子生物学系)摘要 目的 探讨m i R-4 2 9对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量P C R(R T-q P C R)法和免疫印迹法,分别检测乳腺癌MC F-7、MD A-MB-2 3 1、MD A-MB-4 6 8、B T-5 4 9细胞及正常乳腺上皮细胞MC F-1 0 A的e I F4EmR NA和蛋白相对表达量。在MC F-7细胞中转染m i R-4 2 9m i m i c s(A组)、m i m i c sN C(B组)、m i R-4 2 9i n h i b i t o r s(C组)及i n h i b i t o r sN C(D组),采用R T-q P C R法、C C K 8法、细胞划痕实验和免疫印迹法检测AD组细胞m i R-4 2 9表达情况、细胞增殖和迁移情况、e I F4EmR NA和蛋白相对表达量。在2 9 3 T细胞中转染e I F 4 E-3 UT R-W t+m i R-4 2 9m i m i c s(E组)、e I F 4 E-3 UT R-W t+m i m i c sN C(F组)、e I F 4 E-3 UT R-M u t+m i R-4 2 9m i m i c s(G组)、e I F 4 E-3 UT R-M u t+m i m i c sN C(H组),检测EH组细胞相对荧光素酶活性,分析m i R-4 2 9对e I F4E的靶向调控作用。结果 R T-q P C R与免疫印迹检测结果显示,MC F-7、MD A-MB-2 3 1、MD A-MB-4 6 8、B T-5 4 9细胞中的e I F4EmR NA以及蛋白的相对表达量均明显高于正常乳腺上皮细胞MC F-1 0 A(F=7 4.4 1 4、19 8 1.2 4 3,P0.0 1)。R T-q P C R法检测结果显示,A组细胞的m i R-4 2 9相对表达量明显高于B组(t=2 5.3 9 0,P0.0 1),而e I F4EmR NA相对表达量明显低于B组(t=-6.3 6 3,P0.0 5),C组细胞m i R-4 2 9相对表达量明显低于D组(t=-4.6 5 2,P0.0 5),而e I F4EmR NA相对表达量明显高于B组(t=-2.9 2 8,P0.0 5)。C C K 8实验检测结果显示,与B组细胞相比,A组细胞第2 4、4 8、7 2小时时的增殖活力明显降低(F=2 6.1 4 84 0.9 9 7,P0.0 1);与D组细胞相比,C组细胞第2 4、4 8、7 2小时增殖活力明显增高(F=6.4 1 08 2.5 9 3,P0.0 5)。细胞划痕实验显示,A组细胞愈合率明显低于B组(t=-2 2.5 8 4,P0.0 1),C组细胞愈合率明显高于D组(t=1 1.4 6 4,P0.0 1)。免疫印迹法检测结果显示,A组细胞中e I F 4 E蛋白相对表达量明显低于B组(t=-2 0.3 5 5,P0.0 1),C组细胞e I F 4 E蛋白相对表达量明显高于D组(t=3.6 2 2,P0.0 1)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,各组细胞相对荧光素酶活性比较差异具有显著性(F=3 6 6.8 2 3,P0.0 5),而且E组细胞相对荧光素酶活性显著低于F组(t=-4 2.9 6 1,P0.0 1)。结论 m i R-4 2 9或通过靶向调控e I F4E基因进而抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移。关键词 乳腺肿瘤;微R NA s;真核细胞起始因子4 E;细胞增殖;细胞运动 中图分类号 R 7 3 7.9 文献标志码 AE F F E C TO Fm i R-4 2 9O NT H EP R O L I F E R A T I O NA N DM I G R A T I O NO FB R E A S TC A N C E RC E L L SA N DI T SME C H A N I S M N I UT i n g t i n g,WUL i,HO UL i n,Q I UB i r u,ZHA OX i a o h u i,L IJ i n y a n g(D e p a r t m e n t o fB r e a s t S u r g e r y,T h eA f f i l i a t e dH o s p i t a lo fQ i n g d a oU n i v e r s i t y,Q i n g d a o2 6 6 0 0 3,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o fm i R-4 2 9o n t h ep r o l i f e r a t i o na n dm i g r a t i o no f b r e a s t c a n c e r c e l l s a n d i t sm e c h a n i s m.M e t h o d s R T-q P C Ra n dW e s t e r nb l o t t i n gw e r eu s e d t om e a s u r e t h e r e l a t i v emR NAa n dp r o t e i ne x p r e s s i o n l e v e l so fe I F4Ei nb r e a s tc a n c e rMC F-7,MD A-MB-2 3 1,MD A-MB-4 6 8,a n dB T-5 4 9c e l l sa n dn o r m a lb r e a s te p i t h e l i a lMC F-1 0 Ac e l l s.MC F-7c e l l sw e r e t r a n s f e c t e dw i t hm i R-4 2 9m i m i c s(g r o u pA),m i m i c sN C(g r o u pB),m i R-4 2 9 i n h i b i t o r s(g r o u pC),a n d i n h i b i-t o r sN C(g r o u pD),a n dR T-q P C R,C C K-8a s s a y,w o u n dh e a l i n ga s s a y,a n dW e s t e r nb l o t t i n gw e r eu s e d t om e a s u r e t h e e x p r e s s i o no fm i R-4 2 9,c e l l p r o l i f e r a t i o na n dm i g r a t i o n,a n d t h e r e l a t i v emR NAa n dp r o t e i ne x p r e s s i o n l e v e l so fe I F4Ei ng r o u p sA-D.T h e2 9 3 Tc e l l sw e r e t r a n s f e c t e dw i t he I F 4 E-3 UT R-W t+m i R-4 2 9 m i m i c s(g r o u pE),e I F 4 E-3 UT R-W t+m i m i c sN C(g r o u pF),e I F 4 E-3 UT R-M u t+m i R-4 2 9m i m i c s(g r o u pG),a n de I F 4 E-3 UT R-M u t+m i m i c sN C(g r o u pH),a n dr e l a t i v e l u c i f e r a s ea c t i v i t yw a sm e a s u r e df o rg r o u p sE-H.T h et a r g e t e dr e g u l a t o r ye f f e c to fm i R-4 2 9o ne I F4Ew a sa n a l y z e d.R e s u l t s R T-q P C Ra n dW e s t e r nb l o t t i n gs h o w e dt h a t t h er e l a t i v emR NAa n dp r o t e i ne x p r e s s i o nl e v e l so fe I F4Ei n MC F-7,MD A-MB-2 3 1,MD A-MB-4 6 8,a n dB T-5 4 9c e l l sw e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e r t h a nt h o s e i nn o r m a l b r e a s t e p i t h e l i a lMC F-1 0 Ac e l l s(F=7 4.4 1 4,19 8 1.2 4 3,P0.0 1).R T-q P C Rs h o w e dt h a t c o m p a r e dw i t hg r o u pB,g r o u pAh a da s i g n i f i c a n t l yh i g h e r r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l o fm i R-4 2 9(t=2 5.3 9 0,P0.0 1)a n das i g n i f i c a n t l y l o w e r r e l a t i v emR NAe x p r e s s i o n l e v e l o fe I F4E(t=-6.3 6 3,P0.0 5);g r o u pCh a da s i g n i-f i c a n t l y l o w e r r e l a t i v ee x p r e s s i o n l e v e l o fm i R-4 2 9t h a ng r o u pD(t=-4.6 5 2,P0.0 5)a n das i g n i f i c a n t l yh i g h e rr e l a t i v emR NAe x p r e s s i o n l e v e l o fe I F4Et h a ng r o u pB(t=-2.9 2 8,P0.0 5).C C K 8a s s a ys h o w e dt h a t c o m p a r e dw i t hg r o u pB,g r o u pAh a das i g n i f i c a n tr e d u c t i o n i np r o l i f e r a t i o na c t i v i t ya t 2 4