精准医学杂志2023年10月第38卷第5期JPrecisMed,October2023,Vol.38,No.5doi:10.13362/j.jpmed.202305006文章编号:2096-529X(2023)05-0400-06[收稿日期]2023-04-02;[修订日期]2023-06-10[基金项目]山东省重点研发项目(2019GSF107025)[通讯作者]吴琍,Email:wuliqd@163.commiR-429对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制牛婷婷1吴琍1侯琳2仇碧茹2赵晓晖1李金洋1(1青岛大学附属医院乳腺外科,山东青岛266003;2青岛大学医学部生物化学与分子生物学系)[摘要]目的探讨miR-429对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和免疫印迹法,分别检测乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT-549细胞及正常乳腺上皮细胞MCF-10A的eIF4EmRNA和蛋白相对表达量。在MCF-7细胞中转染miR-429mimics(A组)、mimicsNC(B组)、miR-429inhibitors(C组)及inhibitorsNC(D组),采用RT-qPCR法、CCK8法、细胞划痕实验和免疫印迹法检测A~D组细胞miR-429表达情况、细胞增殖和迁移情况、eIF4EmRNA和蛋白相对表达量。在293T细胞中转染eIF4E-3'UTR-Wt+miR-429mimics(E组)、eIF4E-3'UTR-Wt+mimicsNC(F组)、eIF4E-3'UTR-Mut+miR-429mimics(G组)、eIF4E-3'UTR-Mut+mimicsNC(H组),检测E~H组细胞相对荧光素酶活性,分析miR-429对eIF4E的靶向调控作用。结果RT-qPCR与免疫印迹检测结果显示,MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT-549细胞中的eIF4EmRNA以及蛋白的相对表达量均明显高于正常乳腺上皮细胞MCF-10A(F=74.414、1981.243,P<0.01)。RT-qPCR法检测结果显示,A组细胞的miR-429相对表达量明显高于B组(t=25.390,P<0.01),而eIF4EmRNA相对表达量明显低于B组(t=-6.363,P<0.05),C组细胞miR-429相对表达量明显低于D组(t=-4.652,P<0.05),而eIF4EmRNA相对表达量明显高于B组(t=-2.928,P<0.05)。CCK8实验检测结果显示,与B组细胞相比,A组细胞第24、48、72小时时的增殖活力明显降低(F=26.148~40.997,P<0.01);与D组细胞相比,C组细胞第24、48、72小时增殖活力明显增高(F=6.410~82.593,P<0.05)。细胞划痕实验显示,A组细胞愈合率明显低于B组(t=-22.584,P<0.01),C组细胞愈合率明显高于D组(t=11.464,P<0.01)。免疫印迹法检测结果显示,A组细胞中eIF4E蛋白相对表达量明显低于B组(t=-20.355,P<0.01),C组细胞eIF4E蛋白相对表达量明显高于D组(t=3.622,P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,各组细胞相对荧光素酶活性比较差异具有显著性(F=366.823,P<0.05),而且E组细胞相对荧光素酶活性显...
