miR-127、miR-221、miR-223在新生儿肺炎中的表达及临床意义.pdf

西藏医药2 0 2 3年第44卷第4期（总16 9期）基础医学miR-127、m i R-2 2 1、m i R-2 2 3在新生儿肺炎中的表达及临床意义*吴敏汪勇芬福建医科大学附属第二医院儿科福建泉州36 2 0 0 0摘要：目的探讨miR-127、m i R-2 2 1、m i R-2 2 3在新生儿肺炎中的表达及临床意义。方法收集2 0 2 2 年310月入住我院诊断新生儿肺炎的患儿10 例设为肺炎组，以未罹患肺部疾病或感染性疾病的新生儿10 例设为对照组。在治疗前分别采集肺炎组及对照组血液标本，待肺炎组治疗7 天后再次采集肺炎组血液标本。比较两组治疗前后血液中miR-127、m i R-2 2 1、m i R-2 2 3的表达水平。结果肺炎组（治疗前）miR-127、m i R-2 2 1及miR-223的表达水平高于对照组(P0.05);肺炎组治疗前后miR-127、m i R-2 2 1及miR-223的表达水平明显下降(P0.05)。结论miR-127、mi R-2 2 1、mi R-2 2 3可能在新生儿肺炎发病中发挥关键作用，具有临床意义。关键词：新生儿肺炎miR-127miR-221miR-223新生儿肺炎是新生儿时期的常见病，可导致显著死亡率，每年有7 5 12 0 万新生儿因此而死亡，占到十分之一全球儿童总死亡率!。传统上主要根据患者的病史、临床表现、炎症指标及胸片等进行诊断存在局限性。MicroRNAs(miRNAs)存在于我们人体的各细胞内及体液之中,具有高度稳定性及耐RNA酶活性，对组织和疾病状态有特异性表达。近年来，循环miRNAs的水平已作为心血管疾病、前列腺癌等多种疾病诊断或预后的生物标志物被广泛研究2。同时也发现多种miRNAs与肺部感染的发生、发展及转归密切相关,其现患者病灶情况，并通过血流指标直接反映病灶的血流情况。而结果也显示恶性病变组RI值、PI值均高于良性病变组,其血流信号率(56.9 0%)高于良性病变组（47.55%）。恶性病变患者因其囊肿内存在丰富血流信号,致使其血流阻力较小,RI值、PI值高。但Thomas8学者在研究中表明良性病变组RI值更高。深人分析推测可能与恶性囊肿内新生血管出现异常，导致血管壁性质改变,厚度减小，弹性降低，引起血管末端的静脉池平滑肌缺失等原因有关。而Alaczar超声评分系统以6 分作为临界标准，能有效鉴别良恶性囊变的发生，同时Alaczar超声评分系统不受临床分期等因素的干扰,具有较一定的可信度9。正常卵巢血管分布呈动、静脉大致平行的曼状，而卵巢肿瘤血管生成无规律,血管更易生长和扩张,进而形成肿瘤血管网中的动静脉短路，另一方面，本次研究结果也显示经彩色多普勒超声检查得出有49 7 例卵巢囊性病变患者,彩色多普勒超声检查诊断灵敏度为92.6 7%（2 15/2 32）、特异度为95.8 5%（2 54/2 6 5）阳性预测值为95.13%（2 15/2 2 6）、阴性预测值为93.7 3%（2 54/2 7 1）、准确度为94.37%（46 9/497）。与Orlando10学者所得研究基本吻合，提示彩色多普勒超声检查对卵巢囊性病的诊断及良恶性鉴别诊断均有一定的临床价值。在二维超声中，良性囊肿多表现为形态规整、壁薄光滑、边界清晰且有完整的包膜，但恶性囊肿则与之相反，出现不规则边界、分隔薄厚不均匀等现象。彩色多普勒超声检查则是在二维超声的基础上叠加多普勒信号处理及彩色编码形成彩色多普勒图像，具有高分辨率可对病灶组织展开实质性观察；同时该项检查从多角度、多方位展现囊肿形态、内部回声、囊肿厚度、血流等信息。另外彩色多普勒超声检查对人体工程学的适应性较高，且无射线、光波辐射影响，因而具有较高的安全性及实用性。【参考文献】(略）本文责任编辑邓长安基金项目：泉州市科技计划资助项目（2 0 19N088S)通讯作者：汪勇芬29西藏医药2 0 2 3年第44卷第4期（总16 9期）中miR-127、m i R-2 2 1、m i R-2 2 3研究较多，但均未涉及新生儿肺炎。因此，本研究推测三者可能与新生儿肺炎密切相关,利用RT-qPCR技术检测三者在新生儿肺炎中的差异表达，为研究其在新生儿肺炎诊断或治疗作用提供线索，也为后期进一步研究其机制奠定基础。1材料和方法1.1研究对象收集2 0 2 2 年3 10 月人住我院诊断新生儿肺炎的患儿10 例设为肺炎组，以未罹患肺部疾病或感染性疾病的新生儿10 例设为对照组。肺炎组平均胎龄36.262.66周，体重2.590.38 Kg，对照组平均胎龄36.636.93周，体重2.8 50.43Kg，两组间的胎龄及体重比较差异无统计学意义(P0.05）。本研究排除标准为：有先天性及遗传性疾病、严重的出生室息，或其母分娩前有抗生素治疗或免疫性疾病。所有新生儿均系剖宫产娩出，出生后6 小时内、未采取治疗前采集动脉血，肺炎组于治疗7 天后再次采集动脉血设为肺炎组（治疗后）。肺炎组患儿均行广谱青霉素及呼吸支持治疗，再次采血时均已无氧气支持。本研究经医院医学伦理委员会批准并家长签署知情同意。1.2RNA提取及RT-qPCR实验使用Trizol法提取全血总RNA，利用紫外分光光项目对照组(n=10)肺炎组（治疗前）(n=10)肺炎组（治疗后）(n=10)HP注：a示与对照组比较，P0.05,b示与肺炎组（治疗后）比较，P0.05。3讨论由于新生儿肺炎患病率及致死率高，早期识别极其关键，但新生儿肺部感染病史、临床表现缺乏特异性，易误诊为其他呼吸系统相关疾病。此外,新生儿对射线敏感，过多地暴露于可能会造成生殖系统发育障碍等，所以CT不作为首选。而肺部超声操作时间长、体位因素难以取得患儿的配合。故而，需要找到能够早期、准确地识别新生儿肺炎的生物标志物，且其可能成为疾病预后的参考指标。本研究显示,miR-127、miR-221、m iR-2 2 3在新生儿肺炎中表达水平均表现为上调,其中以miR-127、m iR-2 2 3上调更为显著,对比对照组差异具有统计学意义，提示三者均参与了新生儿肺炎。另外治疗前后三者的表达水平出现显著改变,其可能可以作为判断新生儿肺炎治疗疗效的指标。其中,对照组miR-127的表达水平低于肺炎组（治30度计测定浓度，电泳检测确保RNA完整性后进行逆转录。根据试剂盒说明书进行逆转录反应，获得cDNA样品。miRNAs的RT-qPCR采用SYBR法，以小核RNAU6为内参，由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成引物序列（见表1）。取cDNA用于RT-qPCR反应，最终数据采用2-Ct方法计算表示。表1 PCR引物序列基因引物序列F:5-CTCGCTTCGGCAGCACA-3H-U6R:5-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3hsa-miR-221-3p5-GCTACATTGTCTGCTGGGTTTCAA-35-GCGCCCGTGTATTTGACAAGCT-hsa-miR-223-5phsa-miR-127-5p1.3统计学分析采用IBMSPSS Statistics26.0统计软件对数据进行分析。符合正态分布计量资料以均数标准差(又s)表示，两组间均数比较采用两独立样本t检验，多组间均数比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。对于不符合正态分布计量资料以中位数（四分位间距)M(P25,P75)表示，多组间比较采用Kruskal-WallisH检验。P0.05为差异有统计学意义。2结果miR-127、m iR-2 2 1及miR-223的表达水平表2 miR-127、m i R-2 2 1、m i R-2 2 3表达水平 M(P25,P75)miR-1270.28(0.07,0.63)1.22(0.61,1.60)a.b0.28(0.07,0.30)12.70P0.05GAG-35-CTGAAGCTCAGAGGGCTCTGAT-3miR-2210.25(0.08,0.79)1.01(0.70,1.47)a,b0.33(0.15,0.59)10.66P0.05疗前),这与Huang等人通过对腺病毒感染的肺炎儿童和对照组进行RNA测序所得出的结果一致 5。同时Ying等人在实验室水平也得到相同的结果，通过向革兰氏阴性菌脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺炎小鼠气管内注人miR-127模拟物后，小鼠肺部炎症加剧,相反,巨噬细胞中miR-127的缺失抑制促炎细胞因子的产生、增加抗炎细胞因子的表达,从而减轻小鼠肺部炎症 4。而Xie等人发现在肺损伤体内外miR-127的表达水平下调，负向调节巨噬细胞释放细胞因子，改善肺部炎症 3。实验结果的不同可能与肺炎的模型有关，本次研究对象痰培养均未培养出致病菌,是否为病毒或特殊病原体尚缺乏进一步检测。另外,Huang等人 5还发现肺炎的产生主要通过MAPK这一信号通路实现的，而Ying等人 4发现miR-127促进巨噬细胞的促炎发育是通过JNK依赖信号通路实现，不同的病原miR-2230.56(0.12,0.80)1.44(1.01,1.66)a,b0.28(0.04,0.35)17.16P0.05西藏医药2 0 2 3年第44卷第4期（总16 9期）体可能导致不同信号通路被激发，从而使得miR-127需要多中心扩大样本量并在不同胎龄、体重新生儿样出现选择性表达。本中进行深人研究。miRNAs的功能主要是通过改变miR-221在肺炎组（治疗前）的表达水平与对照组靶向mRNA的表达来实现，目前关于miRNAs的研究更相比差异同样具有统计学意义，但相较于miR-127及多地聚焦于上下游信号通路及靶基因，而探索其分子miR-223上调水平不显著。目前关于miR-221在炎症作用机制也将是我们接下来的研究重点。方面的研究较少,Zhu等人发现LPS可以显著上调miR-221的表达，使肺泡上皮细胞生长加快，促进上皮细胞增殖帮助维持其完整性 7。同样的,Othumpangat等人实验发现呼吸道合胞病毒可以通过抑制miR-221的表达，从而干扰被感染细胞的调亡，有利于病毒复制，验证了相关miRNA的表达对炎症起保护作用 6。但miR-221在新生儿肺炎中充当何种角色尚不清楚，其可能在肺部炎症时通过上调自身表达水平促进肺上皮细胞的生长从而起到肺部自我修复、保护肺部的作用,而抑制其表达可能导致炎症进一步加重,这有赖更多的研究进行相关探讨，而这也将会为治疗新生儿肺炎提供新的思路。此外，结果显示肺炎组（治疗前）miR-223表达水平显著高于对照组，表明miR-223也是诊断新生儿肺炎的良好生物标志物。但因为本研究样本量较低，还需要进一步收集相关数据。同样地，有研究发现暴露于雾化LPS后小鼠肺部先天免疫应答过程中miRNAs表达谱中miR-223显著升高 8。Zhang等人通过向小鼠气管内灌注LPS,检测出微囊泡miR-223的分泌增强，且通过囊泡介导的细胞内miR-223的恢复可以抑制巨噬细胞的激活和肺部炎症 9。同时也有人提出miR-223可以通过从中性粒细胞向肺上皮细胞的细胞间转移抑制急性肺损伤 10。与肺炎组(治疗前)患儿相比,肺炎组（治疗后）的miR-223水平明显下降，但因为缺乏对照组7 天后血液中miR-223的表达水平检测，所以miRNAs是随着日龄的增加而表达水平逐渐降低还是治疗后的结果尚不清楚，有待进一步验证。本研究结果不仅提示miR-127、m i R-2 2 1、m i R-223与新生儿肺炎的发生、发展有着密切关联，三者均是新生儿肺炎早期诊断的潜在生物标志物，研究血液miR-127、m iR-2 2 1、m iR-2 2 3表达水平可以为新生儿肺炎的诊断及疗效评估提供新的思路。但由于样本量较少,若要应用于临床新生儿肺炎的筛查及早期诊断，【参考文献】1JHooven TA,Polin RA.Pneumonia J.Semin Fetal NeonatalMed,2017,22(4):20613.2JBeermann J,Piccoli