HPLC双波长法同时测定骨碎补中原儿茶酸、新北美圣草苷和柚皮苷的含量.pdf

双波长法同时测定骨碎补中原儿茶酸、新北美圣草苷和柚皮苷的含量罗洪莲 万红才 徐作刚 刘晓艳 段 萍 曾 琦 谭 敏(黔南州检验检测院 贵州 都匀)【摘要】目的:建立采用高效液相色谱()双波长法同时测定骨碎补中原儿茶酸、新北美圣草苷和柚皮苷含量的方法 方法:用 ()色谱柱 以乙腈 磷酸水溶液进行梯度洗脱 流速 /柱温 检测波长 (原儿茶酸)、(新北美圣草苷和柚皮苷)进样量 结果:个待测成分与相邻色谱峰分离度大于 原儿茶酸、新北美圣草苷、柚皮苷分别在 /、/和 /范围内线性关系良好(均为 )精密度()、重复性()、稳定性(内)试验的 均低于 平均回收率在 ()均低于 结论:该方法操作简便、专属性强、准确度高 可为骨碎补药材的质量控制提供参考【关键词】骨碎补 原儿茶酸 新北美圣草苷 柚皮苷 含量测定【中图分类号】【文献标识码】【文章编号】()骨碎补为水龙骨科植物槲蕨 ()的干燥根茎 骨碎补中含有黄酮类、酚酸类、苯丙素类、三萜类和甾体类等几十种化合物 其中黄酮类化合物柚皮苷和新北美圣草苷具有抗菌、抗炎、抗骨质疏松、改善细胞损伤等作用 酚酸类化合物原儿茶酸具有 抗 菌、抗 炎、抗 蛋 白 纤 维 化、抗 氧 化 应 激 等 作用 在 年版 中国药典 中 仅以柚皮苷作为质量控制的指标 与单一指标相比 多指标的质量评价模式更能全面地反映中药材的整体质量信息 本文采用 双波长法同时测定骨碎补中原儿茶酸、新北美圣草苷和柚皮苷的含量 以期为进一步提升骨碎补药材的质量控制体系提供参考 仪器与试药 仪器 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)色谱柱(美国安捷伦公司)型十万分之一电子天平、万分之一电子天平(瑞士梅特勒公司)试药与材料原儿茶酸(批号:纯度:中国食品药品检定研究院)柚皮苷(批号:纯度:中国食品药品检定研究院)新北美圣草苷(批号:纯度 成都乐美天医药科技有限公司)乙腈(色谱纯)甲醇(分析纯)水为娃哈哈纯净水 骨碎补样品共 批 批购买于药店或医院 剩余 批采集于贵州各地 详见表 洗净后 干燥 粉碎 过 号筛备用表 骨碎补样品信息表样品编号采集时间采集地点 贵州都匀北京同仁堂药房 贵州都匀一树药房 贵州都匀湘君药房 贵州黔南州中医院 贵州兴义兴仁县 贵州贵阳开阳县 贵州凯里丹寨县 贵州黔南独山县上司镇 贵州黔南独山县基长镇 贵州都匀市王司镇 贵州都匀市打蛇冲 贵州都匀市青云湖 作者简介:罗洪莲()女 主管药师 主要从事药物质量检测第 卷第 期 黔 南 民 族 医 专 学 报 年 月 方法与结果 色谱条件与系统适用性试验色谱柱:():流动相:磷酸溶液()乙腈()梯度洗脱:流速:/柱温:检测波长:(原儿茶酸)、(新北美圣草苷、柚皮苷)进样量:在该色谱条件下 种待测成分与相邻色谱峰分离效果好 峰型尖锐、对称性好 理论板数以原儿茶酸峰计不低于 混合对照品溶液和供试品溶液色谱图见图 图 混合对照品溶液和供试品溶液的色谱图 对照品溶液分别精密称取原儿茶酸、新北美圣草苷、柚皮苷对照品约 置 量瓶中 加甲醇溶解并稀释至刻度 制成浓度分别为 、/的对照品贮备液 分别精密量取原儿茶酸对照品贮备液、新北美圣草苷贮备液、柚皮苷贮备液、置 量瓶中 加 甲醇稀释至刻度 摇匀 即得 供试品溶液 取骨碎补粉末约 精密称定 置具塞锥形瓶中 精密加入 甲醇 称定重量 水浴加热回流 放冷 再称定重量 甲醇补足减失重量 摇匀 用 滤膜滤过 取续滤液 专属性试验分别取空白溶液(甲醇)、混合对照品溶液、供试品溶液进样 结果显示 供试品溶液中原儿茶酸、新北美圣草苷和柚皮苷与相应的对照品峰保留时间一致 与相邻色谱峰分离度较好 空白溶液无干扰色谱峰纯度达到要求 线性关系考察分别精密量取“”项下对照品溶液、注入液相色谱仪 记录色谱图 以峰面积()为纵坐标 质量数()为横坐标进行线性回归计算 得回归方程、相关系数()和线性范围 见表 结果显示在各自线性范围内各成分线性关系良好表 各成分线性关系成分回归方程线性范围(/)原儿茶酸 新北美圣草苷 柚皮苷 精密度考察取“”项下混合对照品溶液 连续进样 次 记录各成分峰面积 结果原儿茶酸、新北美圣草苷、柚皮苷峰面积的 分别为 、表明仪器精密度符合要求 重复性考察 精密称取 样品粉末 份 按“”项下方法平行制备 份供试品溶液 进样测定每份样品各成分含量 测得原儿茶酸、新北美圣草苷、柚皮苷的平均含量分别为:、/分别为、表 明 该 方 法 重 复 性 符 合 要求第 卷 黔 南 民 族 医 专 学 报 第 期 稳定性考察 取同一份供试品溶液 分别在、时进样测定 记录色谱图 原儿茶酸、新北美圣草苷、柚皮苷峰面积的 分别为 、表明供试品溶液在 内稳定性较好 加样回收率试验 平行取已知各成分含量的 样品粉末(原儿茶酸、新北美圣草苷、柚皮苷的平均含量分别为:/、/、/)份 约 精密称定 精密加入含有原儿茶酸(/)、新北美圣草苷(/)、柚皮苷(/)对照品的混合溶液 照“”项下方法 自“称定重量 水浴加热回流 ”起 平行制备供试品溶液 进样测定每份样品中各成分的含量 计算各成分的回收率和 见表 结果显示该方法回收率良好 满足分析要求表 回收率试验结果()成分样品称量()样品含量()加入量()测得量()回收率()平均回收率()()原儿茶酸 新北美圣草苷 柚皮苷 样品含量测定 取表 中各批次样品粉末约 精密称定 按“”项下方法制备供试品溶液 每批次平行制备 份 进样测定 记录色谱图 按外标法以峰面积计算各批次样品中上述 种待测成分的平均含量 结果显示 骨碎补中原儿茶酸的含量为 /新北美圣草苷的含量为 /柚皮苷的含量为 /批次间 种成分的含量差异较大 见表 将上述 种成分的含量和总含量作变量进行聚类分析 得出聚类树状图 见图 当样品分为 类时 自成一类 种成分含量的差异最为明显 其中原儿茶酸和柚皮苷含量最低 柚皮苷含量为 远低于 年版 中国药典 规定的 和 为一类 其余批次统为第三类 第三类骨碎补样品中 中成分的含量较为接近图 批骨碎补样品的聚类树状图第 卷第 期 黔 南 民 族 医 专 学 报 年 月 表 骨碎补中各成分含量测定结果(/)编号原儿茶酸含量新北美圣草苷含量柚皮苷含量总量 讨论经参考相关文献 笔者考察了甲醇 磷酸水溶液、乙腈 磷酸水溶液、乙腈 醋酸水溶液、乙腈 甲酸水溶液等几种流动相对样品中上述 种成分的分离效果及峰形影响 结果显示 选用乙腈 磷酸水溶液作流动相时 基线漂移小 成分分离效果好 峰型尖锐、峰理论板数高对于样品的提取时长和提取方式 笔者直接参考了 年版 中国药典 中骨碎补的含量测定方法 然后采用了单因素考察法比较了甲醇、甲醇、乙醇、乙醇等不同的提取溶剂 加热回流 制备供试品溶液 结果以甲醇和 甲醇提取的供试品溶液的上述各成分含量最高 但由于流动相中不含甲醇 且水相比例较高 选用纯甲醇做溶剂时产生的溶剂效应影响较大导致原儿茶酸的峰型差 理论板数低 故选用 甲醇作提取溶剂笔者采用 检测器对上述三种成分进行全波长()紫外扫描 结果显示 原儿茶酸在 波长处有最大吸收 新北美圣草苷和柚皮苷在 波长处有最大吸收 考虑到 种成分间最大吸收波长差异较大 为确保待测成分能够较好地响应 故选用双波长同时进行检测 以更准确地检测骨碎补中原儿茶酸、新北美圣草苷和柚皮苷的含量本试验建立了 双波长法同时测定骨碎补中原儿茶酸、新北美圣草苷和柚皮苷的含量 该方法操作简便、专属性强、准确度高 可为骨碎补药材的质量控制提供参考参考文献 周群曾弦黄丹等 骨碎补化学成分和生物活性研究进展.世界科学技术(中医药现代化)():梁永红叶敏韩健等 骨碎补的木脂素和黄酮类成分研究.中草药():梁永红叶敏张灵芝等 骨碎补中的两个新酚酸类化合物.药学学报 ():杨新荣窦霞李国峰等.柚皮苷药理作用及机制的研究进展.中草药():芦平刘欢肖苗等.原儿茶酸对副溶血弧菌的抑菌和减毒作用.现代食品科技():张玉珠于超郑慧华等.原儿茶酸对 诱导的小鼠子宫内膜炎的作用机制研究.中国畜牧兽医():王瑞朱文清郑洁等.原儿茶酸对人血清白蛋白淀粉样纤维化的抑制作用.分析科学学报():陈益耀陈轶何周桃等 原儿茶酸、白杨素对非酒精性脂肪肝细胞模型的抗氧化作用.中西医结合肝病杂志():国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部.北京:中国医药科技出版社:国家药典委员会.中华人民共和国药典:四部.北京:中国医药科技出版社:陈雪雷霞王迪等.法同时测定骨碎补中两种黄酮类化合物含量.广东化工():李遇伯孟繁浩潘晓峰等.同时测定骨碎补药材中新北美圣草苷和柚皮苷的含量.药物分析杂志():胡燕珍黄斌张媛媛等.双波长法同时测定乌蕨中原儿茶酸、原儿茶醛、牡荆苷的含量.现代中药研究与实践():收稿日期:责任编辑:雷长国欢 迎 投 稿欢 迎 订 阅第 卷 黔 南 民 族 医 专 学 报 第 期