circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3与糖尿病视网膜病变的相关性研究.pdf

天津医药 2023 年 9 月第 51 卷第 9 期circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3与糖尿病视网膜病变的相关性研究隋源，张成森，王爽，李雪丽，勾晓梅摘要：目的探讨环状RNA（circRNA）-锌指蛋白532（ZNF532）、circRNA-同源域相互作用蛋白激酶3（HIPK3）与糖尿病视网膜病变（DR）的相关性。方法纳入109例DR患者（DR组）、110例单纯糖尿病患者（DM组）和65例健康体检志愿者（对照组）。实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达，酶联免疫吸附试验检测血清血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素（IL）-1、肿瘤坏死因子（TNF）-、IL-6水平。Pearson分析DR患者血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与血清VEGF、IL-1、TNF-、IL-6水平相关性。单因素和多因素Logistic回归分析DR危险因素，受试者工作特征（ROC）曲线分析circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3诊断DR的价值。结果DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达以及VEGF、IL-1、TNF-、IL-6水平高于DM组和对照组（P0.05）。DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与VEGF、IL-1、TNF-、IL-6水平均呈正相关（P0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示高水平circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3及VEGF是糖尿病患者发生DR的独立危险因素（P0.05）。三者诊断糖尿病患者发生DR的曲线下面积分别为0.736、0.740和0.864，联合诊断高于单独诊断（P0.05）。结论糖尿病患者血清中circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达上调与DR发生有关，两者可以作为DR辅助诊断的潜在指标。关键词：糖尿病视网膜病变；RNA，环状；转录激活因子类；tristetraprolin蛋白；同源盒结构域蛋白质类；炎症；血管内皮生长因子类；同源域相互作用蛋白激酶3中图分类号：R774.13文献标志码：ADOI：10.11958/20230048Correlation analysis of circRNA-ZNF532 and circRNA-HIPK3 with diabetic retinopathySUI Yuan,ZHANG Chengsen,WANG Shuang,LI Xueli,GOU XiaomeiDepartment of Ophthalmology,Harbin 242 Hospital,Harbin 150000,ChinaCorresponding AuthorE-mail:Abstract:ObjectiveTo investigate the correlation between circrNa-Zinc finger protein 532(ZNF532),circrNa-homologous domain interaction protein kinase-3(HIPK3)and diabetic retinopathy(DR).MethodsA total of 109 patientswith DR(DR group),110 patients with simple diabetes(DM group)and 65 healthy volunteers(control group)were selectedfrom our hospital from October 2020 to October 2022.Serum circRNA-ZNF532 and circRNA-HIPK3 expression levels weredetected by real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR),and serum vascular endothelial growth factor(VEGF),interleukin(IL)-1,tumor necrosis factor(TNF)-and IL-6 levels were detected by enzyme-linkedimmunosoradsorption assay.The correlation between serum circRNA-ZNF532 and circRNA-HIPK3 expression and serumlevels of VEGF,IL-1,TNF-and IL-6 were analyzed by Pearson method.Univariate Logistic regression analysis andmultivariate Logistic regression analysis were used for DR risk factors,and receiver operating characteristic curve(ROC)wasused for analysis of circRNA-ZNF532 and circRNA-HIPK3 diagnostic value of DR.ResultsSerum expressions ofcircRNA-ZNF532 and circRNA-HIPK3 and levels of VEGF,IL-1,TNF-and IL-6 were significantly higher in the DRgroup than those in the DM group and the control group(P0.05).Serum circRNA-ZNF532 and circRNA-HIPK3expression were positively correlated with levels of VEGF,IL-1,TNF-and IL-6 in the DR group(P0.05).MultivariateLogistic regression analysis showed that high levels of VEGF,circRNA-ZNF532 and circRNA-HIPK3 were risk factors fordeveloping DR in diabetic patients(P0.05).The areas under the curve of circRNA-ZNF532,circRNA-HIPK3 and VEGFin the diagnosis of DR in diabetic patients were 0.736,0.740 and 0.864.Combined diagnosis was higher than that ofcircRNA-ZNF532,circRNA-HIPK3 and VEGF alone(P0.05).ConclusionThe up-regulated expression levels ofcircRNA-ZNF532 and circRNA-HIPK3 in serum of diabetic patients are related to the occurrence of DR,and bothcircRNA-ZNF532 and circRNA-HIPK3 can be used as potential indicators for the auxiliary diagnosis of DR.作者单位：哈尔滨二四二医院眼科（邮编150000）作者简介：隋源（1978），女，副主任医师，主要从事眼底及眼表疾病方面研究。E-mail：通信作者E-mail：临床研究993Tianjin Med J,September 2023,Vol.51 No.9糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病严重致残性并发症之一。据统计，我国糖尿病人群中DR患病率为 18.45%，而 普 通 人 群 视 网 膜 病 变 患 病 率 仅1.14%1。DR如不及时治疗可严重损害视力，最终发展为失明2。研究认为持续高血糖刺激下，微血管功能失调和过度炎症反应可引起血管通透性增加、黄斑水肿、血管新生和纤维组织收缩，导致视网膜扭曲脱离、新生血管出血及神经元退行性病变3。环状RNA（circRNA）在视网膜广泛表达并参与微血管功能失调相关蛋白，如血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子（TGF）、Sirtuin（SIRT）差异表达，且其表达水平与DR发病过程中氧化应激、炎症反应、细胞凋亡、血管新生密切相关4。研究发现，circRNA-锌指蛋白532（ZNF532）参与调控视网膜血管内皮周细胞功能，与血管内皮功能障碍有关5。circRNA-同源域相互作用蛋白激酶-3（HIPK3）通过miR-29a介导胰岛素样生长因子1表达，降低氧化应激诱导的心脏微血管内皮功能障碍6。而关于circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3 在 DR 的临床报道十分少见。本研究拟检测DR患者血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达，分析其与DR发生的关系。1对象与方法1.1研究对象连续性选择2020年10月2022年10月我院眼科收治的109例DR患者（DR组）。纳入标准：（1）经临床诊断为2型糖尿病，符合 中国2型糖尿病防治指南（2017版）7诊断标准。（2）出现视力逐渐下降，经眼底检查提示存在微血管瘤、渗出、出血等眼底病变，符合 我国糖尿病视网膜病变临床诊疗指南（2014）年8诊断标准。（3）年龄18周岁。排除标准：（1）患青光眼、白内障、玻璃体液化、眼表感染、屈光不正等。（2）阿尔茨海默病、认知障碍或精神疾病。（3）原发性肾病，肺和肝脏疾病。（4）感染、恶性肿瘤、自身免疫疾病。（5）近1个月应用抗感染、激素、免疫抑制剂治疗。（6）妊娠或哺乳期。另采用抽签法选择同期我院收治的110例单纯糖尿病患者（DM组），均为2型糖尿病，参照文献 7 诊断标准，排除DR，眼内和眼表疾病，心、肺、肝、肾等系统性疾病。同期于门诊体检的健康志愿者中选择65例为对照组。本研究经我院伦理委员会批准（伦理号：200952），全部研究对象均知情同意。1.2主要仪器及试剂RNAsimple 总 RNA 提取试剂盒、InRcute lncRNA cDNA Synthesis Kit（北京天根生化科技有限公司）；ABI 7500 Real-Time PCR系统（美国应用生物系统公司）；VarioskanLUX酶标仪、Invitrogen iBright免疫化学发光分析仪（美国赛默飞公司）；AU5800全自动生化分析仪（美国贝克曼库尔特公司）；JL-760糖化血红蛋白分析仪（青岛三凯医学科技有限公司）。TNF-、IL-1、IL-6酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司；VEGF试剂盒购自上海研启生物科技有限公司。1.3方法1.3.1circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3 检测采集患者外周血3 mL，取血液凝固后上层血清，2 500 r/min离心5 min，取上层液-80 待检备检。RNAsimple总RNA提取试剂盒提取总RNA，InRcute lncRNA cDNA Synthesis Kit将其反转录为cDNA。ABI 7500 Real-Time PCR系统进行实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）。反应体系：cDNA模板2 L，上、下游引物各 1 L，Premix Ex Taq DNA 聚合酶 10 L，灭菌蒸馏水7 L。引物由美国Invitrogen公司合成。circRNA-ZNF532引物：上 游 5-ACGAGTGGACAAAACAT