UPLC-MS法同时测定人参不同部位中16种皂苷含量及差异性分析研究.pdf

特产研究DOl:10.16720/ki.tcyj.2023.128Special Wild Economic Animal and Plant Research139UPLC-MS法同时测定人参不同部位中16 种皂苷含量及差异性分析研究李莹，葛盟，王安琪，张萌，李慧，焦丽丽，吴巍（长春中医药大学，吉林省人参科学研究院，吉林长春130 117)摘要：本研究旨在建立并优化超高效液相色谱一质谱法（UPLC-MS）分析方法，同时测定人参花、人参果、人参茎叶和人参根不同部位中16 种人参皂苷含量并分析其差异性，为人参各部位质量控制与评价提供科学依据。建立UPLC-MS分析方法，采用ThermoC-18色谱柱（10 0 mm2.1mm，1.7 m），柱温30，采用二元线性梯度洗脱，流动相为0.1%甲酸水-乙腈溶液，质谱条件采用电喷雾离子源（ESI)，负离子模式（ESI-），以及母离子监测（Precursorion)方式进行扫描，测定人参不同部位中人参皂苷的含量，并结合统计学分析方法主成分分析（PCA）人参不同部位中的特征成分对药材进行区分。利用UPLC-MS方法定性定量分析了16 种人参皂苷成分，在0.1 2 0 g/mL范围内线性关系良好，相关系数R20.99，该方法检出限为0.0 3 0.17 ug/mL，定量限为0.1 0.5 g/mL。高、中、低3个水平的平均加样回收率为9 8.9 5%10 0.41%，精密度RSD为0.9 6%4.8 8%，灵敏度、准确度及精密度均符合要求。通过方法学考察UPLC-MS定量分析16 种皂苷在相应的范围内线性关系良好，测定方法快速准确。本研究可同时准确测定人参不同部位中的皂苷含量并比较其含量差异及成分差异，为人参皂苷多组分同时分析和质量评价提供理论依据。关键词：UPLC-MS；人参；不同部位；人参皂苷中图分类号：S567.5+1;R284.1Simultaneous Analysis and Determination of 16 Ginsenosides in文献标识码：ADifferent Parts of Ginseng by UPLC-MS文章编号：10 0 1-47 2 1(2 0 2 3)0 4-0 139-0 7LI Ying,GE Meng,WANG Anqi,ZHANG Meng,LI Hui,JIAO Lili,WU Wei*(Jilin Ginseng Academy,Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)Abstract:The study was aimed to establish and optimize the analysis method of Ultra-high performance liquid chromatography-mass spec-trometry(UPLC-MS),and determine the content of 16 ginsenosides in different parts of ginseng flower,ginseng fruit,ginseng stem and leav-es and analyze their differences,so as to provide scientific basis for the quality control and evaluation of all parts of ginseng.Establishingthe UPLC-MS analysis method,Using a Thermo C-18 column(100mmx2.1mm,1.7 m),Column temperature:30 C,Using a binary lineargradient for elution,mobile phase is 0.1%formic acid water-acetonitrile solution,MS conditions using an electrospray ion source(ESI),negative ion mode(ESI-),and parent ion monitoring(Precursor ion)mode for scanning,to determine the content of ginsenosides in differentparts of ginseng,combined with the statistical analysis method of principal component analysis(PCA),the characteristic components in dif-ferent parts of ginseng were distinguished.The sixteen ginsenoside components were analyzed qualitatively and quantitatively using theUPLC-MS method,with good linearly relationship from 0.1 to 20 g/mL,correlation coefficient R2 0.99,detection limit of 0.03 to 0.17g/mL and limit of quantification from 0.1 to 0.5 g/mL.The average recovery rate of high,medium and low was 98.95%100.41%,andthe precision RSD was 0.96%4.88%,and the sensitivity,accuracy and precision met the requirements.UPLC-MS quantified 16 saponinsin the corresponding range,and the determination method was fast and accurate.This study can simultaneously accurately determine thecontent of saponins in the different parts of ginseng and compare the differences in content and composition,which provides a theoretical收稿日期：2 0 2 2-11-16基金项目：大学生创新创业训练计划项目（2 0 2 110 19 9 0 15)；吉林省科技厅科技创新团队项目（2 0 2 0 0 30 10 49 RQ）作者简介：李莹（19 8 9-），女，吉林长春人，在读博士，从事中药活性物质分析研究。*通讯作者：吴巍（19 7 4-），女，博士，研究员，博士生导师，从事中药活性物质分析研究。140basis for the simultaneous analysis and quality evaluation of multicomponents of ginsenosidesKey words:UPLC-MS;Panax ginseng;different parts;ginsenosides人参(Panax ginsengC.A.Mey.)具有大补元气，复脉固脱的作用，是临床上常用的补益佳品1,2 。人参皂苷作为人参及其不同部位的主要有效成分之一3，具有很多药理活性。人参皂苷种类繁杂，其活性成分含量直接影响质量，因此，建立同时测定多成分的方法来控制其质量十分必要4。超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS)在分析中药成分方面具有显著优势，其通过提取离子流色谱峰面积可实现多种目标化合物的定量测定5,6 ，已经成为人参等中药材成分分析的有效手段之一7-16 。高效液相色谱-三重串联四级杆质谱相对于绝大多数成分而言，不需要将其基线分离，仅通过提取成分离子对，即可做到准确定量，极大缩短了分析时间；同时，动态多反应监测模式可以进一步提高检测灵敏度，在中药复杂成分同时定量中的应用也越来越广泛17-19 。陈树东等5 利用固相萃取/超高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定人参、人参叶与人参花中10 种人参皂苷含量。本研究采用UPLC-TSQ-EnduraMS质谱技术对人参不同部位中16 种人参皂苷进行同时定性定量分析，并结合PCA解释其组间差异，为人参皂苷的定量分析及准确应用提供理论支持。1仪器与药品1.1仪器Ultimate3000型液相色谱系统、TSQEndura三重四极杆质谱仪配备电喷雾离子源（ESI）（美国Thermo公司);Thermo C-18色谱柱(10 0 mmx2.1mm,1.7 m);SQP电子分析天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）；FDU-1100冻干机（东京理化，日本）；HH-4数显恒温水浴锅（常州智博睿仪器制造有限公司）；Milli-Q超纯水机（Millipore公司，美国）。1.2药品人参皂苷对照品Noto-R1（8 0 418-2 4-2）、R b 1(41753-43-9)、R b 2(110 2 1-13-9)、R b 3(6 8 40 6-2 6-8)、R c(11020-14-0)、R d(5 2 7 0 5-9 3-8)、R e(5 2 2 8 6-5 9-6)、R f(52286-58-5)、R g 1(2 2 42 7-39-0)、R g 2（5 2 2 8 6-7 4-5)、Rg3(14197-60-5)、Fi(5 39 6 3-43-2)、F2、(6 2 0 2 5-49-4)、F3(62025-50-7)、R h 1(8 0 9 5 2-7 1-2)、R h 2(39 2 6 2-14-1)、Ro（3436 7-0 4-9）、R k 1（49 47 5 3-6 9-4)，对照品（纯度98%）购自上海宝曼生物科技有限公司。乙睛（色谱纯）、甲醇（色谱纯）购于美国Fisher公司，甲酸（体积特产研究分数9 6%，色谱纯)购于美国Tedia公司，Milli-Q超纯水（18 M2cm）自制，其他试剂均为分析纯，购于北京化工厂。5 年生人参根、人参花、人参果及人参茎叶2 0 2 1年购于吉林集安，鉴定人为长春中医药大学李波博士。样品储存于长春中医药大学吉林省人参科学研究院。2订试验方法2.1溶液的制备2.1.1对照品溶液制备分别精密称取人参皂苷Noto-R1、R g 1、R e、R f、R g 2、R h 1、F3、R b 1、R c、F1、R o、R b 2、R b 3、Rd、F2 和Rg3对照品适量，用8 0%色谱级甲醇溶解，分别配制成浓度为1mg/mL的对照品储备液备用。分别精密移取对照品储备液适量于2 mL容量瓶中，8 0%色谱甲醇定容至刻度，配制成混合对照品工作液备用。2.1.2供试品溶液的制备取人参花、人参果、人参茎叶和人参根约5 g，精密称定，粉碎，置于10 0 mL容量瓶中，加8 倍量8 0%乙醇，8 5 水浴加热回流提取3次，每次提取时间为1.5 h。合并提取液，离心取上清后，6 0 水浴至无醇味，冻干，得人参花、人参果、人参茎叶和人参根的人参总皂苷提取物分别为1.8 5 7 0 g、0.1104g、0.7 8 9 5 g 和1.6 6 39 g。分别取上述提取物约2mg，精密称定，用8 0%色谱甲醇溶解并定容至2 mL容量瓶中，溶液过0.2 2 m滤膜，备用。2.2测定方法色谱条件采用 Thermo C-18 色谱柱(10 0 mm 2.1 mm,1.7m）；柱温30；采用二元线性梯度洗脱：流动相0.1%甲酸水溶液（A），乙腈（B）；梯度洗脱如下：0 5 min(19%B),5