沉默信息调节因子1基因多态性与广西人群显微镜下多血管炎的病例对照研究.pdf

实用医学杂志 2023年第39卷第15期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.15沉默信息调节因子1基因多态性与广西人群显微镜下多血管炎的病例对照研究冯菲1 蓝晶晶1 薛超21广西医科大学第二临床医学院（南宁530021）；2广西医科大学第二附属医院肾内科（南宁530007）【摘要】目的探讨沉默信息调节因子（SIRT1）遗传变异（rs1467568、rs4746720）与广西人群显微镜下多血管炎（microscopic polyangiitis，MPA）的相关性。方法利用多重聚合酶链反应（PCR）结合高通量测序法对208例MPA患者和211例健康志愿者的SIRT1多态性进行基因分型；比较等位基因频率和基因型分布差异，进行连锁不平衡、单体型以及遗传模型的分层分析；评价不同基因型与临床症状的发生、实验室生化指标的关系。结果SIRT1 rs1467568、rs4746720的基因型、等位基因频率以及单体型在两组之间的差异均无统计学意义（P 0.05）。在年龄 54 岁亚组中，SIRT1 rs1467568 的显性模型（OR=0.50，95%CI：0.27 0.92，P=0.026）、超显性模型（OR=0.49，95%CI：0.26 0.92，P=0.026）和加性模型（OR=0.57，95%CI：0.33 0.99，P=0.045）与MPA较低易感性相关。在rs1467568中，携带GG基因型的MPA患者具有更高水平的谷丙转氨酶（P=0.012）；在rs4746720中，携带TT、TC基因型的MPA患者具有更高水平的谷草转氨酶（P=0.036）。结论SIRT1 rs4746720与广西人群MPA易感性无关，而rs1467568可能与广西部分人群（54岁）MPA易感性相关；rs1467568、rs4746720分别与MPA患者丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶水平存在关联。【关键词】SIRT1；显微镜下多血管炎；多态性；易感性【中图分类号】R543SIRT1 gene polymorphism and microscopic polyangiitis in Guangxi population：A case control study FENG Fei*，LAN Jingjing，XUE Chao.*The Second Clinical Medicine College of Guangxi Medical University，Nanning 530021，China Corresponding author：XUE Chao Email：【Abstract】Objective To explore the relationship between SIRT1 genetic variation（rs1467568，rs4746720）and microscopic polyangiitis（MPA）in Guangxi population.MethodsThe SIRT1 polymorphisms of 208 patients with microscopic polyangiitis（MPA）and 211 healthy volunteers were genotyped by multiplex polymerase chain reaction（PCR）and high throughput sequencing.The allele frequencies and genotypes were compared.The linkage disequilibrium，haplotype and genetic model were analyzed.The relationship between different genotypes and clinical symptoms and laboratory biochemical indexes was evaluated.ResultsThe results showed no significant difference between the two groups in genotype，allele frequency，and haplotype of SIRT1 rs1467568 and rs4746720（P 0.05）.In the age group 54 years old，the dominant model（OR=0.50，95%CI：0.27 0.92，P=0.026），overdominant model（OR=0.49，95%CI：0.26 0.92，P=0.026）and additive model（OR=0.57，95%CI：0.33 0.99，P=0.045）of SIRT1 rs1467568 were associated with lower susceptibility to MPA.In rs1467568，MPA patients with GG genotype had higher levels of glutamic pyruvic transaminase（P=0.012），while in rs4746720，MPA patients with TT and TC genotypes had higher levels of glutamic oxaloacetic transaminase（P=0.036）.Conclusions In this study，SIRT1 rs4746720 was not related to the susceptibility to MPA in Guangxi population，but rs1467568 may be associated with the susceptibility to MPA in some people（54 years old）in Guangxi，and rs1467568 and rs4746720 were associated with the levels of glutamic pyruvic transaminase and glutamic oxaloacetic transaminase in patients with MPA.【Key words】SIRT1；microscopic polyangiitis；polymorphism；susceptibility临 床 研 究doi：10.3969/j.issn.1006-5725.2023.15.011基金项目：国家自然科学基金地区科学基金项目（编号：81360117）；广西自然科学基金项目（编号：2018GXNSFAA281122）；广西医疗卫生适宜技术开发与推广应用项目（编号：S2017010）通信作者：薛超 E-mail：1919实用医学杂志 2023年第39卷第15期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.15抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）相关性血管炎（AAV）是一种罕见的异质性疾病，主要表现为中小血管的炎症和坏死。AAV通常包括以下临床亚型：肉芽肿伴多血管炎（GPA）、显微镜下多血管炎（MPA）和嗜酸性肉芽肿伴多血管炎（EGPA）1。既往研究表明，地理和民族差异导致AAV在不同地区的临床表型存在差异。肉芽肿伴多血管炎（GPA）是北欧人群AAV的主要类型，而显微镜下多血管炎（MPA）是亚洲人群AAV 的主要类型2。据报道，MPA 的发病率为 0.5 24.0 例/百万人年，患病率为9.0 94.0例/百万人年，发病年龄为55 75岁3。AAV 的发病机制未阐明，流行病学的显著差异4提示了 AAV 具有遗传易感性背景。研究发现，AAV与CTLA-4、FCGR2A、PTPN22、SERPINA1、TLR1 和 TLR9 等遗传变异之间存在显著相关性，这些变异均来自非 MHC 区域。不同临床亚型其遗传背景不同。例如，GPA与HLA-DP1有关，MPA与 HLA-DQ 有关，EGPA 与 HLA-DRB4 有关。上述成果不仅有助于解释AAV的病因，还可为诊断和靶向治疗提供生物标志物5。Sirtuins 家族，其独一无二的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）依赖的去乙酰化酶功能引起了人们的广泛关注。沉默信息调节因子 1（SIRT1），sirtuins 家族成员之一，承担了 p53、叉头盒 O（FoxO）等多种转录因子和协同调节因子的去乙酰化。SIRT1可通过调节细胞分泌参与糖代谢、神经内分泌功能、炎症和肿瘤发生等生理过程6。此外，SIRT1可影响多种自身免疫性疾病的发病，如：类风湿性关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）、炎性肠病（IBD）、多发性硬化症（MS）等，是自身免疫性疾病的潜在治疗靶点7。然而，目前未见 SIRT1 基因变异与 MPA的关联性研究。为此，本研究选择 rs1467568 和rs4746720 为候选 SNP，探索 SIRT1 突变是否影响广西人群MPA的发生。1资料与方法1.1一般资料本研究的病例组源于2005-2020年在广西医科大学第二附属医院肾内科、风湿病科确诊为MPA的患者，共208例。纳入的MPA患者中，包括78例男性（37.5%）和130例女性（62.5%），平均年龄为（54.6 14.9）岁。其严格参照2012年Chapel Hill国际血管炎命名会议标准进行诊断8，排除了由感染、药物治疗、系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）和类风湿性紫癜（HSP）等引起的继发性血管炎。同时，选取了211例与MPA组年龄、性别较为匹配的健康志愿者作为对照组。其中包含了 83 例男性（39.3%）和 128 例女性（60.7%），平均年龄为（51.2 12.6）岁。一切遵循世界医学协会 赫尔辛基宣言 原则，已获得广西医科大学第二附属医院医学伦理委员会批准（编号：2018 KY-0100）。所有受试者均签署了书面知情同意书。1.2方法1.2.1资料收集收集MPA患者的一般资料、临床资料与实验室生化指标。一般资料包括受试者的年龄、性别、血压等。临床资料的收集以 MPA患者发病所伴随的咳嗽、发热、水肿等一系列临床症状为主。实验室生化指标，即红细胞、白细胞、血小板计数以及其他检测指标。1.2.2基因组DNA的提取采集所有受试者的外周静脉血5 mL置于EDTA抗凝采血管，根据DNA提取试剂盒 天根生化科技（北京）有限公司 操作说明提取外周血DNA。所纳入的DNA样本：DNA纯度（A260/A280）：1.8 2.0，DNA浓度 50 g/mL，将标本放置-20 冰箱以供后续实验。1.2.3目的 SNP 的选取利用 Ensembl 浏览器（https：/ensemblgenomes.org）对中国南方汉族人群（CHS）和中国北京汉族人群（CHB）进行基因座选择。其筛选标准如下：（1）最小等位基因频率（MAF）0.05；（2）遵循哈迪-温伯格平衡（HardyWeinberg Equilibrium，HWE），P 0.05；（3）已有文献证明目标位点与自身免疫性疾病相关。1.2.4基因分型通过多重聚合酶链反应（PCR）结合高通量测序法 生工生物工程（上海）股份有限公司 对目标位点进行检测。首先，需设计并合成引物池，然后通过两步 PCR 法扩增 SNP 位点序列制备一个 Illumina 测序文库。首轮扩增体系如下：DNA 模板（10 ng/L）2 L；上游引物池（10 mol/L）1 L；下游引物池（10 mol/L）1 L；2PCR Ready Mix 15 L（总 体 积 25 L）（Kapa HiFi Ready Mix）。待反应体系配制好后，通过PCR 仪（BIO-RAD，T100TM）完成如