超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中藤黄酸等5种成分.pdf

分析与测评2023年8月第4期Aug.2023,No.4香料香精化妆品FLAVOUR FRAGRANCE COSMETICS112www.ffc-www.ffc-*基金项目：辽宁省检验检测认证中心青年人才创新创业项目（编号SC20210110）收稿日期：2023-01-12；修回日期：2023-02-28作 者辽宁省药品检验检测院，辽宁沈阳 110036 王 超 李 莹 陆 军 矫筱蔓超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中藤黄酸等 5 种成分*摘 要采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）技术，建立了化妆品中藤黄酸、转位藤黄酸、藤黄酸 B、异藤黄酸及新藤黄酸的测定方法。样品经过体积分数 75%甲醇水溶液超声提取后，以 Zorbax Eclipse Plus C18为色谱柱、0.1%（体积分数）甲酸水-乙腈（体积比 3070）为流动相，采用电喷雾离子（ESI）源、正离子扫描的多反应监测（MRM）模式进行定量分析。结果表明，藤黄酸等 5 种成分在 5 250 ng/mL 范围内线性关系良好，相关系数（r）0.999，加标回收率为 90.6%117.9%，相对标准偏差（RSD）均小于 10%。该方法简单、快速，为化妆品中藤黄酸等成分的检测提供了技术参考。关键词超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）化妆品 藤黄酸 转位藤黄酸 藤黄酸 B 异藤黄酸 新藤黄酸Determination of Five Components Including Gambogic Acid in Cosmetics by Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry*WANG Chao LI Ying LU Jun JIAO Xiaoman(Liaoning Institute for Drug Control,Shenyang 110036,Liaoning,China)Abstract:An ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry(UPLC/MS-MS)method for the determination of gambogic acid,gambogellic acid,morellic acid,isogambogic acid and gambogenic acid in cosmetics was developed.After ultrasonic extraction with 75%methanol-water(in volume fraction),the sample was eluted on Zorbax Eclipse Plus C18 column with mobile phase consisted of 0.1%(in volume fraction)formic acid solution-acetonitrile(volume ration 30 :70).For quantitation,the electrospray ionization(ESI)source was applied to carry out the positive ion scanning with multiple reaction monitoring(MRM)mode.The results showed that good linearities were obtained in the concentration range of 5-250 ng/mL,the correlation coefficients(r)0.999.The recoveries at different concentrations were 90.6%-117.9%with the relative standard deviations(RSDs)less than 10%.The method is simple and rapid,and provides a technical reference for the determination of gambogic acid and other components in cosmetics.Keywords:ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry(UPLC/MS-MS)cosmetics gambogic acid gambogellic acid morellic acid isogambogic acid gambogenic acid以天然植物为原料的化妆品在市场中备受青睐 1，大众普遍认为相较于以化学合成物质为原料的化妆品而言，以植物为原料的化妆品安全性较高，但并不是所有的植物原料都是绝对安全的 2-3，有些植物及其提取物因其毒性、刺激性或其他安全因素等原因不允许被作为化妆品原料使用。藤黄是化妆品安全技术规范（2015 年版）中规定的化妆品禁用植物原料中的一种，但由于目前没有相应的检测方法，无法对其使用情况进行监分析与测评王 超，等作 者 简 介王超（1985），女，硕士研究生，副主任药师，主要从事化妆品禁限用物质检测、药品非法添加等研究。联系电话：024-31266287E-mail:DOI：10.20099/j.issn.1000-4475.2023.0013第 4 期分析与测评113www.ffc-测。研究表明，藤黄具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒等药理作用 4-10，其主要特征成分为藤黄酸、异藤黄酸、新藤黄酸等 11-13，具有较大的毒性 14，被添加到化妆品中可能会危害到消费者的健康和安全。目前，文献报道藤黄酸等成分的检测方法主要为高效液相色谱法（HPLC）15-19，测定的对象均为藤黄药材及其制剂，色谱法在常量分析中具有简便高效的特点，但其灵敏度低于色谱-质谱联用技术，而植物原料多以提取物的形式作为化妆品原料使用，添加量较低，需要利用灵敏度更高的方法进行测定。目前，色谱-质谱联用技术已广泛应用于化妆品中禁限用物质的检测 20-24，因此本研究采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS），能定性定量检测化妆品中藤黄酸等成分，同时通过是否检出藤黄酸等成分间接监测化妆品中是否有添加禁用植物原料藤黄的风险。1 材料与方法1.1 仪器与试剂Xevo TQ 型超高效液相色谱串联三重四极杆质谱联用仪，美国 Waters 公司；XP26 型电子天平，瑞 士 Mettler Toledo 公 司；Milli-Q Advantage A10型超纯水仪，美国 Millipore 公司；AS3120A 型超声清洗器，天津奥特赛恩斯仪器有限公司。藤黄酸对照品（纯度 97%），中国食品药品检定研究院；转位藤黄酸对照品（纯度 98.3%），上海诗丹德标准技术服务有限公司；藤黄酸 B（纯度 95%），上海源叶生物科技有限公司；异藤黄酸和新藤黄酸对照品（纯度均大于 98%），武汉天植生物技术有限公司；甲醇、乙腈、乙醇（均为色谱纯），德国 Merck 公司；甲酸（质谱级），美国Sigma-Aldrich 公司。1.2 标准溶液配制精密称取藤黄酸、转位藤黄酸、藤黄酸 B、异藤黄酸、新藤黄酸对照品约 5 mg，分别置 10 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声溶解后用甲醇定容，摇匀，配制成单一对照品储备液。分别精密量取藤黄酸等 5 种单一对照品储备液 0.1 mL，置于 10 mL 容量瓶中，用体积分数 75%的甲醇水溶液溶解并定容，得到质量浓度为 5 g/mL 的混合标准储备溶液。再用体积分数 75%的甲醇水溶液配制成系列混合标准工作液，质量浓度分别为 5、10、25、50、100、250 ng/mL。1.3 样品前处理称取样品 0.2 g（精确至 0.001 g）置于 10 mL离心管中，加体积分数 75%的甲醇水溶液 8 mL，涡旋至样品完全分散，超声 10 min，冷却至室温后用体积分数 75%的甲醇水溶液定容，摇匀，以5 000 r/min离心5 min，上清液用0.22 m滤膜过滤。1.4 仪器条件1.4.1 液相色谱条件色 谱 柱：Zorbax Eclipse Plus C18（100 mm2.1 mm1.8 m）；柱温：35 ；进样量：2 L；流动相：0.1%（体积分数）甲酸水-乙腈（体积比 30:70）；流速：0.4 mL/min。1.4.2 质谱条件离子源：电喷雾离子（ESI）源；扫描方式：正离子扫描；毛细管电压：3.0 kV；脱溶剂温度：550 ；锥孔气流速：50 L/h；脱溶剂气流速：850 L/h；碰撞气流速：0.15 mL/min；碰撞气：氩气；其他质谱参数见表 1。表 1 藤黄酸等 5 种成分的其他质谱参数成分锥孔电压/V定量离子对（m/z）碰撞能量/eV定性离子对（m/z）碰撞能量/eV保留时间/min藤黄酸30629.5 573.414629.5 527.42616.5转位藤黄酸30629.5 573.414629.5 527.42612.2藤黄酸 B18561.5 505.312561.5 477.3224.8异藤黄酸30629.5 573.414629.5 527.42617.5新藤黄酸30631.5 507.322631.5 479.3269.62 结果与讨论2.1 色谱质谱条件的优化基于待测成分中具有极性相近的同分异构体，试验考察了不同流动相系统对分离效果的影响。有机相比较了甲醇和乙腈，但使用甲醇作为流动相会导致分析时间过长，因此有机相选择了乙腈；水相比较了水、甲酸水溶液和乙酸铵水溶液，结果发现，在流动相中加入适量的甲酸可以使同分异构体达到基线分离；因此最终确定使用乙腈-甲酸水溶液作为流动相。藤黄酸等 5 种成分在正、王 超，等：超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中藤黄酸等5种成分分析与测评2023 年 8 月香料香精化妆品114www.ffc-www.ffc-负离子扫描模式下均有响应，但当流动相系统中加入甲酸后，负离子模式响应明显降低，因此扫描方式选择正离子扫描，藤黄酸等 5 种成分混合标准溶液的多反应监测色谱图见图 1。示，使用不同提取溶剂对藤黄酸等 5 种成分回收率的影响不大，当以体积分数 75%甲醇水作为提取溶剂时回收率相对较高，因此最终确定体积分数 75%甲醇水为提取溶 剂。2.3 提取时间的选择分别向空白基质中加入藤黄酸等 5 种成分的混合标准储备溶液，制备成添加质量浓度为2.5 g/g 的加标样品，通过回收率的变化分别考察超声时间为 0、10、20、30 min 对加标样品提取效果的影响。结果显示，超声时间的长短对藤黄酸等 5 种成分回收率的影响并不显著，但当超声时间超过 10 min 时藤黄酸等 5 种成分的回收率略有下降趋势，因此最终将超声时间确定为 10 min。2.4 线性关系和检出限考察质量浓度范围为 5 250 ng/mL 的混合标准曲线系列溶液的线性，结果如表 2 所示，藤黄酸等 5 种成分在其线性范围内，线性良好，相关系数（r）0.999。以信噪比为 3 时的质量浓度作为方法的检出限，藤黄酸等 5 种成分方法的检出限均为 0.1 g/g，以信噪比为 10 时的质量浓度作为方法的定量限，藤黄酸等 5 种成分方法的定量限均为 0.25 g/g。图 1 藤黄酸等 5 种成分混合标准溶液的多反应监测色谱图5201025新藤黄酸藤黄酸 B新藤黄酸转位藤黄酸异藤黄酸15丰度2.01051.81051.61051.41051.21051.01058.01046.01044.01042.01040时间/min2.2 提取溶剂的选择分别向空白基质中加入藤黄酸等 5 种成分的混合标准储备溶液，制备成质量浓度为 2.5 g/g的加标样品，通过回收率的变化分别