超高效液相色谱质谱联用技术测定动物源食品中的11种磺胺类兽药残留.pdf

Aug.2023 CHINA FOOD SAFETY 45分析检测超高效液相色谱质谱联用技术测定动物源 食品中的 11 种磺胺类兽药残留李雯雯，杜蒙*，王晓军，孙允超（聊城市农业科学院，山东聊城 252000）摘要：本研究建立了基于超高效液相色谱串联质谱技术（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）的磺胺类兽药残留分析方法。方法学考察表明，11 种磺胺类兽药残留在 10 200 gL-1呈现良好的线性关系；方法检出限为 0.84 1.62 gkg-1，方法定量限为 2.8 5.4 gkg-1；在3个浓度水平下，目标化合物的加标回收率为74.5%109.9%，相对标准偏差为0.09%8.12%。该方法可用于动物源食品中多种磺胺类兽药残留的定性、定量分析及筛查。关键词：磺胺类兽药残留；液相色谱串联质谱技术；分析筛查Ultra Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for the Determination of Eleven Sulfonamides Veterinary Drug Residues in Animal Derived FoodLI Wenwen,DU Meng*,WANG Xiaojun,SUN Yunchao(Liaocheng Academy of Agricultural Sciences,Liaocheng 252000,China)Abstract:In this study,a method for the analysis of sulfa veterinary drug residues based on ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS)was established.Methodological investigation showed that the residues of 11 sulfonamides showed a good linear relationship in the range of 10 200 gL-1.The limits of detection were 0.84 1.62 gkg-1,and the limits of quantification were 2.8 5.4 gkg-1.The recoveries were 74.5%109.9%and the relative standard deviations were 0.09%8.12%at the three concentration levels.The method is suitable for qualitative and quantitative analysis and screening of various sulfonamides veterinary drug residues in animal derived food.Keywords:sulfonamides veterinary drug residues;ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry;analysis and screening磺胺类药物是一类以对氨基苯磺酰胺为基本母核结构的化学合成抗菌药物，具有广谱、高效、价低等特点，在畜禽养殖过程中，为预防和控制疾病，常被添加到饲料中使用1。但磺胺类药物在人体中代谢时间较长，易在人体内蓄积。随着近年来兽药的大量使用，甚至滥用和误用，出现了耐药性、药物残留过高、部分人群过敏中毒等问题。动物源食品中的磺胺类药物残留逐渐引起人们的重视，从 2005 年起，农业农村部对动物产品中的磺胺类药物残留进行重点管控。2022 年 9 月，农业农村部发布了第 594 号公告，发布了食品安全国家标准 食品中 41 种兽药最大残留限量（GB 31650.12022）2，对磺胺类药物（总量）和磺胺二甲嘧啶的最大残留量分别进行了补充。与此同时，磺胺类药物残留的检测技术逐步更新。传统的磺胺类兽药残留检测方法包括液相色谱质谱法、液相色谱法、酶联免疫分析法和荧光分析法，其中液相色谱质谱联用技术因灵敏度高、准确度好、高通量等优点，被广作者简介：李雯雯（1990），女，山东聊城人，硕士，助理农艺师。研究方向：农产品理化检测。作者简介：杜蒙（1990），女，山东聊城人，硕士，助理农艺师。研究方向：农产品理化检测。E-mail:。46 食品安全导刊 2023年8月（下）分析检测泛应用于动物源食品中的兽药多残留检测分析3-4。本研究拟建立 11 种磺胺类兽药残留的液相色谱质谱检测技术，通过对质谱的检测参数进行优化和方法学评估，形成一种高效、精确的磺胺类兽药残留分析方法。1材料与方法1.1材料与试剂磺胺类标准品：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲恶唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺间二甲氧嘧啶，均购于坛墨质检科技股份有限公司；Knorth HLB固相萃取柱，北京科德诺思技术有限公司；猪肉，购自聊城华盛超市；HPLC 甲醇、HPLC 乙腈，美国 Fisher Scientific公司；超纯水，广州屈臣氏食品饮料有限公司。1.2仪器与设备Triple Quad 5500+超高效液相串联质谱，AB SCIEX 公司；氮吹浓缩仪，广州得泰仪器科技有限公司；冷冻离心机，湖南平凡科技有限公司；涡旋混合器，海门市其林贝尔仪器制造有限公司。1.3试验方法1.3.1标准储备溶液和工作液将 11 种兽药标准品（100 mgL-1）分别移取 100 L 于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容，得到 1 mgL-1的磺胺混合标准溶液；称取（1.000.02）g 不含 11 种兽药残留的空白猪肉样品，提取和净化，得到空白基质溶液；混合标准溶液用空白基质溶液逐级稀释，分别得到 10 gL-1、20 gL-1、50 gL-1、100 gL-1、150 gL-1和 200 gL-1的基质混合标准工作液，用于绘制基质匹配校准曲线。1.3.2上机溶液制备取 猪 肉 样 品，绞 碎 并 均 质，称 取 试 样（1.000.02）g，加入 Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液，涡旋振荡、超声、离心，取上清液，残渣用磷酸盐缓冲液重复提取，合并两次上清液备用；采用 Knorth HLB 固相萃取柱对上清液进行净化和洗脱，洗脱液涡旋混匀、氮吹至干，用 10%甲醇-10%乙腈水溶液（含 0.1%甲酸）复溶过膜，得到待上机样品溶液。1.3.3仪器检测条件（1）色 谱 条 件。Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱，柱温 35，流速 0.3 mLmin-1，进样量 1 L，流动相 A 为含 0.1%甲酸的水溶液，流动相 B为含 0.1%甲酸的甲醇乙腈（2 8，体积比）溶液，洗脱方式为梯度洗脱，见表 1。表 1流动相梯度洗脱比例时间/minVA/%VB/%09552.085155.060407.05957.19559.0955（2）质谱条件。电喷雾离子源（ESI），喷雾电压为正离子模式（ESI+）5 500 V；离子源温度 350，气帘气（Curtain gas）35 psi，离子源气体 1（Gas )和气体 2（Gas）分别设置为 50 和 60，检测方式MRM。2结果与分析2.1净化方法选择动物源食品的基质比较复杂，易对液质联用的电喷雾离子化过程中形成的目标化合物分子信号造成干扰，影响检测灵敏度和准确性。有效的基质净化前处理方法能减弱和消除基质效应。其中，固相萃取技术在动物源性食品基质净化领域中应用广泛，能够快速、简便、高效地去除各类食品中的干扰基质，达到分离和富集待测组分的目的5。故本试验选择固相萃取柱净化样品，通过方法学评估，能满足磺胺类兽药残留的检测需求。2.2质谱条件优化及谱图将 200 gL-1的 11 种磺胺混合标准溶液以针泵的方式连续进样，在正离子模式下，采用一级质谱扫描（Q1 Scan）确定母离子质荷比；采用碎片离子扫描（Product Ion Scan)确定干扰少、信噪比高的 1 2 个子离子，分别作为定性离子和定量离子；采用多反应监测扫描（Multiple Reaction Monitoring，MRM）优化定性离子和定量离子的去簇电压（Declustering Potential，DP）和碰撞能量（Collision Energy，CE），最终建立质谱采集参数，结果见表 2。以优化的质谱参数为方法，获得 11 种磺胺类化合物的总离子流图（见图 1）和磺胺甲噁唑质谱图（见图 2、图 3）。2.3方法学评估2.3.1线性关系和检出限、定量限使用基质空白溶液配制 10 200 gL-1的标准工作液，以磺胺类化合物的浓度为横坐标，定量Aug.2023 CHINA FOOD SAFETY 47分析检测离子峰面积为纵坐标绘制标准曲线，本试验在猪肉空白基质中加入 10 gkg-1混合标准物质，参考章萍萍等6的计算方法，按试验方法进行 6 次平行试验，计算检测结果的标准偏差（Standard Deviation，SD）、3SD（检出限）、10SD（定量限），结果见表3。11 种磺胺类化合物在 10 200 gL-1呈现良好的线性关系，相关系数大于0.994 8，检出限为0.84 1.62 gkg-1，定量限为 2.8 5.4 gkg-1，均满足食品安全国家标准 动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法（GB 31658.172021）7的要求，且低于标准。表 211 种磺胺类兽药的质谱参数化合物名称 母离子（m/z）子离子（m/z）DP/VCE/eV磺胺嘧啶251.0156.0*402292.038磺胺甲噁唑254.0156.0*6522108.036磺胺噻唑256.0156.0*4022108.032磺胺甲嘧啶265.0156.1*8225172.125磺胺二甲 异噁唑268.0156.0*8222113.225磺胺甲噻二唑271.0156.1*6521108.036磺胺二甲 嘧啶279.0186.0*6023156.027磺胺间甲 氧嘧啶281.0156.0*752592.030磺胺甲 氧哒嗪281.0156.0*7525126.127磺胺邻二 甲氧嘧啶311.0156.0*7030108.237磺胺间二 甲氧嘧啶311.0156.0*7028218.028注：*表示定量离子。2.3.2精密度和回收率准确称取空白基质样品，在低、中、高 3 个浓度水平下，采用优化后的检测方法，进行6次平行试验，根据结果计算回收率和精密度，用于评价方法。由表4 可知，3 个水平下，回收率为 74.5%109.9%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）为0.09%8.12%，本方法的回收率和精密度均符合兽药多残留分析要求。Max.7.1e5 cps.TIC of+MRM(54 pairs):from Sample 50(STD20)of 31658.17.wiff(Turbo Spray)0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5Time,min0.05.0e41.0e51.5e52.0e52.5e53.0e53.5e54.0e54.5e55.0e55.5e56.0e56.5e57.0e5Intensity,cps4.393.365.323.555.814.043.264.692.582.301.757.884.9