草鱼生长性状相关微卫星标记的初步筛选.pdf

收稿日期:.基金项目:国家自然科学基金资助项目().作者简介:顾剑峰(),男,硕士生.通信作者:毛慧玲(),女,教授.E m a i l:h u i l i n m c o m.顾剑峰,吴初新,王隽隽,等草鱼生长性状相关微卫星标记的初步筛选J南昌大学学报(理科版),():GUJF,WUCX,WAN GJ J,e t a l S c r e e n i n ga n da n a l y s i s o fm i c r o s a t e l l i t eD NAm a r k e r s a s s o c i a t e dw i t hg r o w t h t r a i t s o fG r a s sc a r p(C t e n o p h a r y n g o d o ni d e l l u s)JJ o u r n a l o fN a n c h a n gU n i v e r s i t y(N a t u r a lS c i e n c e),():草鱼生长性状相关微卫星标记的初步筛选顾剑峰a,吴初新b,王隽隽a,龚瑞玥a,胡成钰a,毛慧玲a(a 南昌大学生命科学学院,江西 南昌 ;b 豫章师范学院,江西 南昌 )摘要:以 尾草鱼为样本,利用微卫星分子标记技术初步筛选出与生长性状相关的分子标记.K S和QQ图分析显示草鱼体长、体高和体重个主要生长性状均为正态分布.利用S P S S 分析不同基因对草鱼生长性状的影响,共获得 个基因型;同时发现D基因对草鱼生长性状具有负调控作用,而B、C基因对D基因有抑制作用.微卫星标记与草鱼个主要生长性状关联分析显示,对引物HL J C 、HL J C 、C 、HL J C 均与草鱼不同生长性状相关联,其中,HL J C 与体长极显著相关,与体高、体重显著相关;HL J C 与体长、体重显著相关;HL J C 与体长、体高极显著相关;C 仅与体重显著相关.关键词:草鱼;微卫星;分子标记;生长性状中图分类号:S 文献标志码:A文章编号:()S c r e e n i n ga n da n a l y s i so fm i c r o s a t e l l i t eD N Am a r k e r sa s s o c i a t e dw i t hg r o w t ht r a i t so fG r a s s c a r p(C t e n o p h a r y n g o d o ni d e l l u s)GUJ i a n f e n ga,WUC h u x i nb,WANGJ u n j u na,GONGR u i y u ea,HUC h e n g y ua,MAO H u i l i n ga(a S c h o o l o fL i f eS c i e n c e s,N a n c h a n gU n i v e r s i t y,N a n c h a n g ,C h i n a;b Y u z h a n gN o r m a lU n i v e r s i t y,N a n c h a n gU n i v e r s i t y,N a n c h a n g ,C h i n a)A b s t r a c t:I nt h i sp a p e r,f i s hw e r eu s e da s s a m p l e s t os c r e e n t h em i c r o s a t e l l i t em o l e c u l a rm a r k e r s r e l a t e dt ot h eg r o w t ht r a i t so fG r a s sc a r p T h er e s u l t so f t h eK Sa n a l y s i sa n dt h eQQ m a ps h o w e dt h a t t h eg r o w t ht r a i t so f t h eb o d yl e n g t h,t h eb o d yh e i g h t,a n dt h eb o d yw e i g h ta r ei nan o r m a ld i s t r i b u t i o n T h ee f f e c to f t h em i c r o s a t e l l i t em a r k e r so nt h eg r o w t ht r a i t sw a s a n a l y z e db yS P S S a n d g e n o t y p e sw e r eo b t a i n e d A l s o,i tw a sf o u n dt h a tt h eDg e n eh a dn e g a t i v er e g u l a t o r ye f f e c to nt h eg r o w t ho fG r a s sc a r p,w h i l et h eBa n dCg e n e s c o u l ds u p p r e s s t h e e x p r e s s i o no f t h eDg e n e T h e a s s o c i a t i o na n a l y s i s o fm i c r o s a t e l l i t em a r k e r sw i t hg r o w t ht r a i t s s h o w e dt h a t t h ep a i rp r i m e r so fHL J C ,HL J C ,C ,a n dHL J C w e r e r e s p e c t i v e l yr e l a t e d t od i f f e r e n tg r o w t ht r a i t so fG r a s s c a r p Am o n g t h e m,t h eHL J C l o c u sw a s e x t r e m e l yr e l a t e dt ot h eb o d y l e n g t h,t h eb o d yh e i g h t,a n dt h eb o d yw e i g h t T h eHL J C l o c u sw a ss i g n i f i c a n t l yc o r r e l a t e dw i t h t h eb o d y l e n g t ha n d t h eb o d yw e i g h t T h eHL J C l o c u sw a s e x t r e m e l y r e l a t e d t o t h eb o d y l e n g t ha n dt h eb o d yh e i g h t T h eC l o c u sw a so n l yr e l a t e dt ot h eb o d yw e i g h t B a s e do nt h er e s u l t s,i t c a nb eu s e da sc a n d i d a t e l o c i f o ra p p l y i n gt om o l e c u l a rm a r k e r sa s s i s t e db r e e d i n go fG r a s sc a r p K e yW o r d s:G r a s sc a r p;m i c r o s a t e l l i t e;m o l e c u l a rm a r k e r;g r o w t ht r a i t s草鱼(C t e n o p h a r y n g o d o ni d e l l a)是江西省淡水鱼类养殖产量最大的品种.草鱼性成熟较晚,传统的育种方法多是采用从长江捕捞的原种作为养殖亲本,该方式周期长、难度大.相比之下,分子育种第 卷第期 年月南昌大学学报(理科版)J o u r n a l o fN a n c h a n gU n i v e r s i t y(N a t u r a lS c i e n c e)V o l N o J u n 技术在提高育种效率、缩短育种年限、提高产量、增强品质等方面都表现出巨大的应用前景,已广泛应用于作物、家畜及水产动物的育种,.微卫星标记由于其量大、呈中性、共显性以及可检测等位基因多的特点,被认为是研究物种遗传多样性的有效工具,现已广泛应用于连锁图谱分析、基因定位以及性状分析等方面的研究,.鱼类遗传育种中,生长性状是重要经济性状.近些年,与鱼类性状相关的分子标记陆续被发现报道.张义凤()等人从 个微卫星标记中筛选出个与鲤鱼生长性状相关的标记,其中个与体重、体长、体高相关,个与体高相关,并且找到与生长性状相关的基因型.随后,徐美佳()等人利用E S T S S R对鲤鱼的个性状进行单回归分析,最终得到个与鲤鱼吻长、头长、尾长、眼间距有关的分子标记.张丽博()等人利用 个S S R及E S T标记对柏氏鲤进行基因型检测,单标记回归分析共得到 个与饲料转化率相关的标记.在草鱼生长性状方面,丁炜东()等人使用S R A P技术分析野生草鱼和家养草鱼,筛选出与草鱼种质退化相关的分子遗传标记.王解香()分析了 对草鱼E S T S S R分子标记,发现对微卫星引物与草鱼生长性状具有关联性.最近,余成晨()等在前期研究的基础上,对草鱼生长相关的微卫星标记在长江草鱼选育群体的 个个体进行验证分析,确定出各多态性位点的优势基因型.但总体而言,有关与草鱼性状相关的分子标记的研究还是偏少.本研究将少量多态性丰富的微卫星位点排列组合,拟从 对微卫星引物中进行筛选,获得与草鱼体长、体高、体重个主要性状显著相关的标记,并分析其基因型对生长性状的影响效应,获得优势基因型,为草鱼的分子辅助育种提供理论依据.材料与方法实验材料实验用鱼为二龄草鱼,年月取样于江西省瑞昌长江四大家鱼原种场(国家级).实验方法数量性状的测量随机选取 尾草鱼,利用刻度尺(精度为mm)、电子台秤(精度为 g)分别测量和记录草鱼的体长、体高、体重等生长数据.D NA的提取参照刘哲的方法,采用改良T r i s饱和酚氯仿 法,以 草 鱼 鱼 鳞 作 为 材 料 提 取 草 鱼 基 因 组D NA.微卫星引物的筛选筛选实验室自行设计和引自文献 的 对微卫星引物,最终获得扩增效果多态性较好的对引物(上海生工生物工程有限公司)(表),可用于草鱼后续研究.其余引物因扩增产物一致化、多态性不佳被弃除.表对微卫星引物序列及退火温度T a b T h e s e q u e n c e so f s e v e nm i c r o s a t e l l i t ep r i m e r sa n da n n e a l i n g t e m p e r a t u r e序号引物名称引物序列退火温度片段大小/b pH L J C F:G C A A G C T G C A T T C A C T C T G A R:T G G A G A A A A G G G C T G T A G G A H L J C F:G C A A A G C A A A A C A C A G C A A A R:C G A C G A T C T G T C C A T C A G T G H L J C F:C A G A T G A G A G A G G G G G A G G T R:A A C A A G G C T G T T G T C A C T G C H L J C F:T T C T C T G C C C T G T T G T G T T G