第52卷第4期第482页2023年8月华中科技大学学报(医学版)ActaMedUnivSciTechnolHuazhongVol.52No.4P.482Aug.2023*武汉市卫生健康委员会重点项目(No.WX20B04)徐建群,女,1980年生,主治医师,E-mail:375738977@qq.com△通讯作者,Correspondingauthor,E-mail:2865723312@qq.comMETTL3通过m6A修饰β-catenin影响顺铂诱导肺癌细胞DNA损伤的修复*徐建群,周利君,程津津,方思,王红娟,郭红荣,戴芹△武汉市第三医院呼吸内科,武汉430071摘要:目的基于顺铂诱导肺癌细胞DNA损伤细胞模型,探讨甲基转移酶样3(methyltransferase-like3,METTL3)介导的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰β-catenin在肺癌中的作用机制。方法通过顺铂诱导,建立A549细胞DNA损伤模型,再接受合成METTL3siRNA和siRNA空载质粒(NC)转染。将细胞分成对照组、顺铂诱导组、顺铂诱导+siRNA组、顺铂诱导+NC组,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,qRT-PCR和Westernblot检测METTL3mRNA和蛋白表达,Westernblot检测各组细胞中β-catenin、H2AX、ERCC1、NDRG1和ATM的蛋白表达,m6ARNA甲基化定量试剂盒测定RNA中m6A的水平。结果成功转染METTL3siRNA后,A549细胞中METTL3mRNA表达降低(P<0.01)。与对照组相比,顺铂诱导组细胞增殖能力下降(P<0.01),凋亡率上升(P<0.01),细胞周期G0~G1期延长,S期和G2~M期均缩短(均P<0.01),METTL3mRNA和蛋白表达水平下调(均P<0.01),H2AX、ERCC1、NDRG1蛋白表达上升(均P<0.01),ATM和β-catenin蛋白表达下降(均P<0.01),m6A水平显著下调(P<0.01);与顺铂诱导组相比,顺铂诱导+siRNA组上述趋势更加显著;而顺铂诱导+NC组细胞与其差异无统计学意义。结论METTL3敲低通过m6A修饰β-catenin抑制顺铂诱导肺癌细胞DNA损伤的修复。关键词:肺癌;顺铂;甲基转移酶样3;N6-甲基腺苷;DNA损伤中图分类号:R734.2DOI:10.3870/j.issn.1672-0741.2023.04.008METTL3Modifiedβ-cateninbym6AtoAffectCisplatin-inducedDNADamageRepairinLungCancerCellsXuJianqun,ZhouLijun,ChengJinjinetalDepartmentofRespiratoryMedicine,WuhanThirdHospital,Wuhan430071,ChinaAbstractObjectiveToinvestigatethemechanismofmethyltransferase-like3(METTL3)mediatedN6-methyladenosine(m6A)modificationofβ-catenininlungcancerbasedoncisplatin-inducedDNAdamagemodeloflungcancercells.MethodsTheDNAdamagemodelofA549cellswasconstructedbycisplatin-induction,andthenitwastransfectedwithsiRN...
