OSID开放科学标识码Jun.20232023年6月JournalofJinanUniversity(NaturalScience&MedicineEdition)No.3Vol.44第44卷第3期暨南大学学报（自然科学与医学版）miR-9-5p靶向调控ZAK对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响宋北平，蔡梦婷，李光义²，易丹*（湖南省人民医院湖南师范大学附属第一医院1.核医学科；2.胃肠外科，湖南长沙410005）[摘要]目的：阐明miR-9-5p通过靶向调控ZAK表达从而影响结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法：通过qPCR、Westermblot检测结直肠癌细胞系（HCT116、SW260、HT29及LoVo）及结直肠癌患者组织样本中miR-9-5p表达水平及ZAK的mRNA和蛋白表达水平。生物信息学方法分析miR-9-5p与ZAK结合的靶向序列。双荧光素酶基因报告实验检测miR-9-5p对ZAK的靶向调控关系。脂质体法将miR-9-5pmimic或/和ZAK质粒共转染结直肠癌细胞系HCT116及SW620，通过CCK-8及克隆形成实验观察miR-9-5p/ZAK信号轴对细胞增殖的影响,通过Transwell观察对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果：与人正常上皮细胞系相比，在结直肠癌细胞系中ZAK的mRNA及蛋白水平显著上调（P<0.05）；在结直肠癌临床组织样本中,ZAK蛋白水平亦显著上调（P<0.05）;miR-9-5p的表达水平在癌细胞系及组织样本中下调（P<0.05）。双荧光素酶报道基因实验显示miR-9-5p能显著影响ZAK3'UTR野生型表达载体的荧光素酶活性（P<0.05），过表达miR-9-5pmimic片段可抑制ZAK蛋白表达，而inhibitor片段促进ZAK蛋白表达。CCK-8、克隆形成实验及Transwell实验表明，过表达ZAK可显著促进结直肠癌细胞系细胞的增殖、克隆形成、细胞迁移和侵袭能力（均P<0.05），而同时过表达miR-9-5p则可抵消ZAK对细胞功能的促进作用（均P<0.05）。结论：结直肠癌中ZAK呈高表达，而miR-9-5p呈低表达；ZAK是miR-9-5p的靶向调控基因;miR-9-5p/ZAK信号轴共同调控结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭，参与结直肠癌的发生发展。[关键词]miR-9-5p；ZAK；结直肠癌；增殖；迁移；侵袭【中图分类号】R735.3+5;R735.3+7[文献标志码]A[文章编号]1000-9965(2023)030248-11D0I:10.11778/j.jdxb.20220242TheimpactofmiR-9-5ptargetedZAKtoregulatetheproliferation,migrationandinvasionofcolorectalcancercellsSONGBeiping',(CAIMingting',ILIGuangyi,)YIDan'1*(1.DepartmentofNuclearMedicine,2.DepartmentofGastrointestinalSurgery,HunanProvincialPeople'sHospital/theFirstAffilatedHospitalofHunanNormalUniversity,Cha...
