circNT5E靶向调控miR-152-3p对胃癌细胞生物学行为的影响.pdf

第5 2卷第4期第5 2 5页2 0 2 3年8月 华中科技大学学报(医学版)A c t aM e dU n i vS c iT e c h n o lH u a z h o n g V o l.5 2 N o.4 P.5 2 5A u g.2 0 2 3*河南省高等学校重点科研项目(N o.1 6 A 3 1 0 0 2 4)陈 希,女,1 9 8 8年生,初级技师,E-m a i l:h n d x b l k 0 3 0 41 6 3.c o mc i r c NT 5 E靶向调控m i R-1 5 2-3 p对胃癌细胞生物学行为的影响*陈 希1,齐永利1,张金宁1,姚亚辉1,张海龙21河南大学淮河医院病理科,开封 4 7 5 0 0 02河南大学基础医学院,开封 4 7 5 0 0 4摘要:目的 探讨c i r c N T 5 E对胃癌细胞生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法 采用q R T-P C R法检测胃癌组织、癌旁组织与人胃黏膜上皮细胞G E S-1、人胃癌细胞HG C 2 7中c i r c N T 5 E、m i R-1 5 2-3 p的表达量。双荧光素酶报告基因实验检测m i R-1 5 2-3 p过表达对野生型载体w t-c i r c N T 5 E、突变型载体m u t-c i r c N T 5 E荧光素酶活性的影响。以HG C 2 7细胞为研究对象进行体外细胞实验,实验分组为s i-N C组、s i-c i r c N T 5 E组、s i-c i r c N T 5 E-N C组、s i-c i r c N T 5 E-1 5 2-3 p组。C C K-8法、平板克隆形成实验、流式细胞术与T r a n s w e l l实验分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移及侵袭能力。W e s t e r nb l o t检测B a x、B c l-2蛋白表达量。结果 与癌旁组织和G E S-1细胞相比,c i r c N T 5 E在胃癌组织和细胞中表达量升高(均P0.0 5),m i R-1 5 2-3 p的表达量降低(均P0.0 5);进一步机制分析提示m i R-1 5 2-3 p是c i r c N T 5 E的靶基因。功能实验表明敲除c i r c N T 5 E抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭的能力,诱导细胞凋亡(均P0.0 5)。敲除m i R-1 5 2-3 p可逆转c i r c N T 5 E表达降低对细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用和对凋亡的促进作用(均P0.0 5)。结论 c i r c-N T 5 E可通过调控m i R-1 5 2-3 p介导胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。关键词:胃癌;c i r c N T 5 E;m i R-1 5 2-3 p;细胞增殖;迁移;侵袭;凋亡中图分类号:R 7 3 5.2 D O I:1 0.3 8 7 0/j.i s s n.1 6 7 2-0 7 4 1.2 0 2 3.0 4.0 1 4T h eE f f e c t o f c i r c N T 5 Eo nt h eB i o l o g i c a lB e h a v i o ro fG a s t r i cC a n c e rC e l l sb yT a r g e t i n gm i R-1 5 2-3 pC h e nX i,Q iY o n g l i,Z h a n gJ i n n i n ge t a lD e p a r t m e n t o fP a t h o l o g y,H u a i h eH o s p i t a l o fH e n a nU n i v e r s i t y,K a i f e n g4 7 5 0 0 0,C h i n aA b s t r a c t O b j e c t i v e T os t u d yt h ee f f e c to fc i r c N T 5 Eo nt h eb i o l o g i c a lb e h a v i o ro fg a s t r i cc a n c e rc e l l sa n di t sp o s s i b l em e c h a n i s m.M e t h o d s T h eq R T-P C Rw a su s e dt od e t e c t t h ee x p r e s s i o no f c i r c N T 5 Ea n dm i R-1 5 2-3 p i ng a s t r i cc a n c e r t i s s u e s,a d j a c e n t t i s s u e s,h u m a ng a s t r i cm u c o s a l e p i t h e l i a l c e l lG E S-1,a n dh u m a ng a s t r i c c a n c e r c e l lHG C 2 7.D u a l-l u c i f e r a s e r e p o r t e r e x-p e r i m e n tw a su s e dt od e t e c t t h ee f f e c to fm i R-1 5 2-3 po v e r e x p r e s s i o no nt h e l u c i f e r a s ea c t i v i t yo fw i l d-t y p ev e c t o rw t-c i r c N T 5 Ea n dm u t a n tv e c t o rm u t-c i r c N T 5 E.I nv i t r oc e l l e x p e r i m e n t sw e r ep e r f o r m e du s i n gHG C 2 7c e l l s,a n dt h ec e l l sw e r ed i v i d e di n t os i-N Cg r o u p,s i-c i r c N T 5 Eg r o u p,s i-c i r c N T 5 E-N Cg r o u p,a n ds i-c i r c N T 5 E-1 5 2-3 pg r o u p.T h eC C K-8m e t h o d,p l a t ec o l o n yf o r-m a t i o ne x p e r i m e n t,f l o wc y t o m e t r ya n dT r a n s w e l l e x p e r i m e n tw e r eu s e d t od e t e c t c e l l p r o l i f e r a t i o n,c o l o n y f o r m a t i o n,a p o p t o s i s,m i g r a t i o na n di n v a s i o na b i l i t y,r e s p e c t i v e l y.W e s t e r nb l o tw a su s e dt od e t e c tt h ep r o t e i ne x p r e s s i o no fB a xa n dB c l-2.R e s u l t sC o m p a r e dw i t ha d j a c e n t t i s s u e sa n dG E S-1c e l l s,t h ee x p r e s s i o no fc i r c N T 5 Ei ng a s t r i cc a n c e rt i s s u e sa n dc e l l sw a si n c r e a s e d(b o t hP0.0 5),w h i l e t h ee x p r e s s i o no fm i R-1 5 2-3 pw a sd e c r e a s e d(b o t hP0.0 5).F u r t h e rm e c h a n i s ms t u d ys u g g e s t e dt h a tm i R-1 5 2-3 pw a s t h e t a r g e t g e n eo f c i r c N T 5 E.F u n c t i o n a l t e s t s s h o w e dt h a tk n o c k d o w no f c i r c N T 5 Ei n h i b i t e dt h ep r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o na n d i n v a s i o no f g a s t r i c c a n c e r c e l l s a n d i n d u c e dc e l l a p o p t o s i s(a l lP0.0 5).R e s c u e e x p e r i m e n t c o n f i r m e d t h a t k n o c k-d o w no fm i R-1 5 2-3 pc o u l dr e v e r s e t h e i n h i b i t o r ye f f e c to fc i r c N T 5 Es i l e n c i n go nc e l lp r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o na n di n v a s i o n,a n dt h ep r o m o t i n ge f f e c to nc e l la p o p t o s i s(a l lP0.0 5).C o n c l u s i o n c i r c N T 5 Ec a nm e d i a t ep r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n,i n v a s i o na n da p o p t o s i so fg a s t r i cc a n c e rc e l l sb yr e g u l a t i n gm i R-1 5 2-3 p.K e yw o r d s g a s t r i cc a n c e r;c i r c N T 5 E;m i R-1 5 2-3 p;c e l l p r o l i f e r a t i o n;m i g r a t i o n;i n v a s i o n;a p o p t o s i s 胃癌是我国常见的一种恶性肿瘤,发病率呈逐年上升趋势,随着医疗技术的进步,胃癌患者治愈率与生存期明显改善,然而,胃癌的症状无特异性,转移率高,大多数患者常在晚期确诊,预后较差1。随着分子靶向治疗的发展,寻找胃癌发生发展相关靶基因成为研究重点,已有研究表明环状R NA(c i r c u-l a rR NA,c i r c R NA)在胃癌中差异表达,c i r c R NA稳定性高,高度保守,具有组织及发育阶段特异性的特征,已被证实在胃癌发生发展中发挥着重要的潜在作用2-3。此 外,c i r c R NA可 通 过 吸 附 微 小R NA(m i R NA)而抑制其表达从而调节胃癌细胞生物学行为,进而在胃癌发生及发展过程中发挥重要调控作用4。在Y a n g等5关于膀胱癌的研究中发现,c i r c NT 5 E通过充当m i R-5 0 2-5 p的海绵分子促进膀胱癌病情进展及恶性肿瘤细胞增殖行为。然而,关于c i r c NT 5 E在胃癌发展中的作用及潜在机制鲜见报道。本次实验通过S t a r b a s e生物信息学预测发现m