《发育医学电子杂志》2023年7月第11卷第4期JDevMed(ElectronicVersion),Jul.2023,Vol.11,No.4·241·miR-92a-3p在小鼠胚胎神经管闭合中的作用及机制张燕秋付佳琳黄琬淇袁正伟顾卉（中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室，辽宁沈阳110004）·论著·【摘要】目的探讨miR-92a-3p与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（nicotinamideadeninedinucleotidephosphateoxidase4，NOX4）之间的相互作用，以及两者在神经管畸形（neuraltubedefect，NTD）中对细胞迁移的影响。方法实验动物采用C57BL/6J小鼠，孕鼠随机分为NTD组与对照组，每组30只，NTD组采用全反式维A酸（all-transretinoicacid，ATRA）诱导NTD模型，于E9.5采集胚胎样本。实验所用细胞系为小鼠神经干细胞C17.2，转染NOX4过表达质粒、miR-92a-3p模拟物/抑制剂、模拟物对照/抑制剂对照。采用实时定量PCR（real-timequantitativePCR，RT-qPCR）检测胚胎和C17.2细胞中miR-92a-3p表达，采用蛋白质印迹法检测NOX4的表达。通过双荧光素酶报告基因实验明确miR-92a-3p对NOX4的结合及靶向调控关系。采用细胞划痕实验与Transwell实验观察miR-92a-3p和NOX4对细胞迁移活动的影响。统计学方法采用单因素方差分析、独立样本t检验。结果NTD组胚胎miR-92a-3p表达低于对照组（0.753±0.052与1.006±0.126，t=3.212，P=0.033），NOX4蛋白表达高于对照组（0.870±0.039与0.688±0.056，t=4.621，P=0.010）。在转染NOX43’端非翻译区（3’untranslatedregions，3’UTR）荧光素酶报告基因的C17.2细胞中，共转染miR-92a-3p模拟物组的荧光素酶活性低于模拟物对照组（0.368±0.102与1.000±0.149，t=5.530，P=0.005）；共转染miR-92a-3p抑制剂组的荧光素酶活性高于抑制剂对照组（1.254±0.080与1.000±0.129，t=2.899，P=0.044）。C17.2细胞转染miR-92a-3p模拟物组，NOX4的蛋白表达低于模拟物对照组（1.077±0.142与1.432±0.300，t=2.396，P=0.044）；转染miR-92a-3p抑制剂组，NOX4的蛋白表达高于抑制剂对照组（1.443±0.054与1.249±0.090，t=3.709，P=0.010）。细胞划痕的实验结果表明，转染NOX4质粒后，细胞伤口愈合的速度低于对照组［（8.8±6.5）%与（44.1±6.8）%，t=6.513，P=0.003］，然而当过表达NOX4的同时转染miR-92a-3p，与转染NOX4组比较，细胞伤口愈合速度加快［（37.2±11.7）%与（8.8±6.5）%，t=3.680，P=0.021］。Transwell实验发现，转染NOX4质粒后，迁移的细胞数量低于对照组［（102....
