单宁酸对感染猪流行性腹泻病毒仔猪生长性能、肠道屏障功能和抗氧化能力的影响.pdf

动物营养学报，（）：单宁酸对感染猪流行性腹泻病毒仔猪生长性能、肠道屏障功能和抗氧化能力的影响王思甜 徐朋涛 郑丽云 齐 雅 刘志鹏 何 来 刘诚傲侯永清 郭双双 童庆芳 张正帆 丁斌鹰（武汉轻工大学农副产品蛋白质饲料资源教育部工程研究中心，动物营养与饲料科学湖北省重点实验室，武汉；武汉市江夏区动物疫病预防控制中心，武汉）摘 要：本研究旨在探讨单宁酸（）对感染猪流行性腹泻病毒（）仔猪生长性能、肠道屏障功能和抗氧化能力的影响。试验选用 头初始体重为（）的健康 日龄杜长大仔猪，随机分为 组，分别为对照组、组、组和 组，每组 个重复，每个重复 头猪。试验期为 ，分为感染前（第 天）和感染后（第 天）个阶段。在第 天，组和 组仔猪口腔灌服 ，对照组和 组仔猪口腔灌服相同体积的液体代乳料；在第 天，组和 组仔猪口腔灌服 头 悬液（表示 组织培养感染剂量），对照组和 组仔猪灌服等体积的磷酸盐缓冲溶液。结果显示：感染 前，组仔猪平均日增重（）较对照组显著升高（）。感染 后，仔猪 显著降低（），料重比（）和腹泻指数显著升高（）；血清 木糖含量显著下降（），血清二胺氧化酶活性与十二指肠、空肠、回肠和结肠肠道损伤评分显著升高（）；十二指肠、空肠和回肠绒毛高度（）与十二指肠和回肠绒毛面积（）显著降低（），空肠、回肠和结肠隐窝深度（）显著增加（），十二指肠、空肠和回肠 显著降低（）；血清谷胱甘肽过氧化物酶（）、过氧化氢酶（）、总超氧化物歧化酶（）活性显著降低（），十二指肠、空肠、结肠 活性与回肠、结肠 活性以及空肠总抗氧化能力（）显著下降（），空肠丙二醛（）含量与十二指肠和结肠过氧化氢（）含量显著增加（）。灌服 显著缓解了 感染造成的仔猪 、腹泻指数、血清谷丙转氨酶（）活性以及十二指肠、空肠、回肠和结肠 增加（），显著缓解了 感染造成的仔猪、空肠、十二指肠和空肠 和 下降（），并显著提高了 感染仔猪十二指肠和空肠 活性与结肠 活性以及十二指肠和结肠（）。综上所述，能提高新生阶段仔猪的平均日增重，降低腹泻率，并通过提高机体抗氧化能力、改善肠道形态缓解 感染造成的仔猪肠道损伤。关键词：单宁酸；猪流行性腹泻病毒；生长性能；肠道屏障功能；抗氧化能力中图分类号：文献标识码：文章编号：（）收稿日期：基金项目：湖北省中央引导地方科技发展专项（）；湖北省重点攻关项目（）作者简介：王思甜（），女，辽宁盘锦人，硕士研究生，研究方向为动物营养与饲料科学。：同等贡献作者 通信作者：张正帆，副教授，硕士生导师，：；丁斌鹰，教授，硕士生导师，：猪流行性腹泻病毒（，）属于冠状病毒科，可引起仔猪急性腹 期王思甜等：单宁酸对感染猪流行性腹泻病毒仔猪生长性能、肠道屏障功能和抗氧化能力的影响泻，因其高传染性和高死亡率给生猪养殖业造成巨大经济损失。禁抗限抗背景下，高锌饲粮预防断奶仔猪腹泻的弊端已日益显露，如土壤锌富集和畜产品高锌残留等问题。目前，已有研究证实益生菌、益生素和有机酸等饲料添加剂可以降低断奶仔猪腹泻率，但对 引起的腹泻的改善效果不稳定。植物提取物或其衍生物可能是抗生素的潜在替代品。其中，单宁酸（，）作为多酚类化合物，因其收敛性强，具有抗腹泻、抗菌、抗氧化、调节肠道微生物稳态等作用而受到广泛关注。已被证明可以通过与肠道黏膜黏蛋白结合形成保护膜，从而起到防治腹泻、提高生长性能的作用。此外，还可以增加肠道绒毛高度，降低隐窝深度，从而改善肠道形态结构完整性，修复肠道损伤，但 在 感染仔猪上的研究较少。因此，本试验拟通过建立仔猪 感染模型，研究 对 感染仔猪生长性能、肠道屏障功能和抗氧化能力的影响，以探讨其作用机制。材料与方法 试验材料 试验仔猪购于武汉绿色巨农农牧股份有限公司。代 乳 料 由 上 海 高 得 饲 料 有 限 公 司 提 供。（株）由华中农业大学微生物重点实验室提供。五倍子 由五峰赤诚生物科技有限股份公司提供，含量为。试验设计 试验共选用 头健康状况良好、遗传背景一致、胎次、平均体重为（）的 日龄杜长大仔猪，随机分为 组，分别为对照组、组、组和 组，每组 个重复，每个重复 头猪。试验期 ，分为感染前（第 天）和感染后（第 天）个阶段。在试验第 天，组 和 组 仔 猪 口 腔 灌 服 （单宁酸溶于 液体代乳料中配成悬浊液，每千克体重灌服 悬浊液），对照组和 组仔猪口腔灌服相同体积的液体代乳料；试验第 天，组和 组仔猪口腔灌服 头 悬液（为 组织培养感染剂量），对照组和 组仔猪口腔灌服等体积的磷酸盐缓冲溶液。试验用代乳料主要成分为全脂奶粉和大豆磷脂，其营养水平见表。试验饲粮为代乳料商品维生素预混料，其中商品维生素预混料可为每千克代乳料提供维生素 、维生素 、维生素 、维生素 、维生素 、维生素 、维生素 、烟酸 、维生素 、泛酸 、叶酸、生物素 。饲养管理 本试验在湖北省武汉市农业科学院畜牧兽医研究所进行，采用 栋饲养条件完全一致的全封闭式猪舍舍内温度为（），相对湿度为，试验仔猪均单栏饲养于 的漏缝式地板圈内，每天清扫猪舍 次，并用聚维酮碘消毒液喷洒消毒栏舍，严格防止 栋猪舍之间发生交叉感染。仔猪每天饲喂 次（饲喂时间为：、：、：、：、：），代乳料用温水（）冲泡，早、中、晚各喂 次温水。表 代乳料营养水平（风干基础）（）项目粗蛋白质粗灰分粗纤维水分赖氨酸食盐钙总磷代乳料 样品采集与处理 于试验第 天：，所有仔猪均口服 木糖（），后对所有仔猪进行前腔静脉采血并保存于肝素钠抗凝管中。全群仔猪采血后肌肉注射 戊巴比妥钠，麻醉后进行屠宰取样。取十二指肠、空肠、回肠和结肠各肠道中间段（长度为 ），纵向剖开肠段，用预冷的生理盐水冲洗肠道内容物，刮取肠黏膜快速置于液氮中冷冻，后转移至 保存。检测指标与方法 生长性能 每天记录仔猪采食量，于试验第、和 天：给隔夜禁食的仔猪进行空腹称重，按照如下公式 计 算 平 均 日 增 重（）、平 均 日 采 食 量动 物 营 养 学 报 卷（）和料重比（）：总增重 试验天数；总采食量 试验天数；。腹泻评分 试验期间视觉观察并记录仔猪每天的粪便形态。按照粪便形态进行评分，分为 个等级：干燥成形，糊状，半液体状，液体状，计算每日平均值，得分 视为腹泻。按如下公式计算腹泻指数：腹泻指数（）（每头仔猪粪便评分之和观察总天数）。血清生化指标 使用全自动生化分析仪（日立，上海曼普生物科技有限公司）测定血清生化指标，试剂盒购于富士胶片和光纯耀化学有限公司。肠道屏障功能指标 参照 等描述的方法进行肠道损伤评分，分为 个评分等级：无肉眼可见出血点记 分；偶有损伤或有零星出血点记 分；有肉眼可见明显损伤即肠道出现溃疡或肠壁变薄变透记 分；肠道出现溃疡、糜烂，肠壁严重变薄变透并充血记 分。使用光学显微镜（，日本）对肠道组织切片进行观察，选取 根不同走向且完整的绒毛，测量绒毛高度（，）、隐窝深度（，）以及绒毛表面积（，），计算绒毛高度 隐窝深度（）。采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定血清 木糖含量和二胺氧化酶（）活性。血清和肠道抗氧化指标 采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒使用多功能酶标仪（，）测 定 血 清 和 肠 道 组 织 总 抗 氧 化 能 力（）与谷胱甘肽过氧化物酶（）、过氧化氢酶（）和总超氧化物歧化酶（）活性以及丙二醛（）和过氧化氢（）含量。数据统计分析 试验数据先采用 软件进行预处理，再使用 软件对仔猪感染前生长性能数据进行单因素方差分析，对感染后的试验数据进行双因素方差分析（），组间多重比较用 氏法进行。试验结果以平均值标准差体现，表示显著差异，表示有趋势。结 果 对仔猪生长性能的影响 对仔猪生长性能的影响见表 和表。感染 前，灌服 仔猪的 显著提高（），和 无显著变化（）。感染 后，仔猪 显著下降（），显著升高（）；灌服 显著提高了 感染仔猪的（），显著降低了 （），且 与 在 上存在交互效应（）。表 对仔猪生长性能（第 天）的影响 （）（）项目 对照组 组 值 平均日增重 平均日采食量 料重比 同行数据肩标不同字母表示差异显著（）。下表同。，（）对 感染仔猪腹泻指数的影响 对 感染仔猪腹泻指数的影响见表。感染 后，仔猪的腹泻指数显著升高（）；灌服 可显著降低 感染仔猪的腹泻指数（）。对 感染仔猪血清生化指标的影响 由表 可知，感染 后，仔猪血清总胆固醇（）、磷（）、低密度脂蛋白（）和高密度脂蛋白（）含量显著下降（），血清甘油三酯（）和 葡 萄 糖（）含 量 显 著 升 高（）；灌服 能显著降低感染 仔猪血清谷草 转 氨 酶（）活 性（），且 与 在 血 清 活 性 上 存 在 交 互 效 应（）。仔猪血清总胆红素（）、总蛋白（）、白 期王思甜等：单宁酸对感染猪流行性腹泻病毒仔猪生长性能、肠道屏障功能和抗氧化能力的影响蛋白（）、钙（）、肌酐（）和直接胆红素（）含量及碱性磷酸酶（）、谷氨酰转移酶（）和乳酸脱氢酶（）活性各组之间无显著差异（）。表 对 感染仔猪生长性能（第 天）的影响 （）项目 值 平均日增重 平均日采食量 料重比 ：未感染猪流行性腹泻病毒；：感染猪流行性腹泻病毒；：未灌服单宁酸；：灌服单宁酸；：猪流行性腹泻病毒效应；：单宁酸效应；：猪流行性腹泻病毒与单宁酸的交互效应。下表同。：；：；：；：；：；：；：表 对 感染仔猪腹泻指数（第 天）的影响 （）项目 值 腹泻指数 表 对 感染仔猪血清生化指标的影响 项目 值 总胆红素 （）总蛋白 （）白蛋白 （）谷丙转氨酶（）谷草转氨酶（）碱性磷酸酶（）总胆固醇（）甘油三酯（）葡萄糖（）钙 （）磷 （）肌酐 （）高密度脂蛋白（）动 物 营 养 学 报 卷续表 项目 值 低密度脂蛋白（）谷氨酰转移酶（）直接胆红素（）乳酸脱氢酶（）对 感染仔猪肠道损伤评分和肠道吸收功能指标的影响 由表 可知，感染 后，仔猪小肠（十二指肠、空肠、回肠）和结肠肠道损伤评分均显著升高（），血清木糖含量显著降低（），血清 活性显著上升（）；灌服 显著降低感染 仔猪空肠肠道损伤评分（），有降低十二指肠（）和空肠（）肠道损伤评分的趋势。表 对 感染仔猪肠道损伤评分和肠道吸收功能指标的影响 项目 值 肠道损伤评分 分十二指肠 空肠 回肠 结肠 肠道吸收功能指标 二胺氧化酶（）木糖（）对 感染仔猪肠道形态的影响 由表 可知，感染 后，仔猪小肠各肠段 以及十二指肠和回肠 显著降低（），空肠、回肠和结肠 显著增加（），小肠各肠段 均显著下降（）；灌服 可显著增加感染 仔猪十二指肠和空肠（），显 著 降 低 小 肠 各 肠 段 和 结 肠 （），显著增加十二指肠（），显著增加小肠各肠段 （）；与 在空肠，小肠各肠段和结肠，十二指肠、空肠和回肠 以及十二指肠和空肠 上存在交互效应（）。对 感染仔猪血清和肠道抗氧化指标的影响 由表 可知，感染 后，仔猪血清 和 活性显著下降（）；灌服 能显著提高感染 仔猪血清（），但对血清、活性和 含量无显著影响（）。由表 可知，感染 后，仔猪十二指肠、空肠、结肠 活性与回肠、结肠 活性以及空肠 显著下降（），空肠 含量与十二指肠和结肠 含量显著增加（）；灌服 能显著提高 感染仔猪十二 期王思甜等：单宁酸对感染猪流行性腹泻病毒仔猪生长性能、肠道屏障功能和抗氧化能力的影响指肠、空肠和结肠 活性与 空 肠 和 结 肠活性以及十二指肠（），显著降低空肠 含量（）；与 在十二指肠、空肠和结肠 活性与空肠和结肠 活性以及十二指肠和结肠 上存在交互效应（）。表 对 感染仔猪肠道形态的影响 项目 值 绒毛高度 十二指肠 空肠 回肠 隐窝深度 十二指肠 空肠 回肠 结肠 绒毛面积 十二指肠 空肠 回肠 绒毛高度 隐窝深度 十二指肠 空肠 回肠 表 对 感染仔猪血清抗氧化指标的影响 项目 值 谷胱甘肽过氧化物酶（）过氧化氢酶（）总超氧化物歧化酶（）丙二醛（）总抗氧化能力（）讨 论 本试验中仔猪感染 后出现急性腹泻和呕吐，解剖后小肠和结 肠 肠 壁 变 薄 变 透 明，与 感染症状相符，说明 模型建立成功。研究表明，饲粮中添加 能显著提高仔猪的日增重，降低料重比，但添加高剂量（）可能降低仔猪的采动 物 营 养 学