虫草素抑制TNF⁃α诱导的人角质形成细胞系HaCaT增殖.pdf

年 月第 卷 第 期基础医学与临床 收稿日期：修回日期：基金项目：广西中医药大学广西一流学科建设开放课题（）通信作者（）：文章编号：（）研究论文虫草素抑制 诱导的人角质形成细胞系 增殖梁辉勇，韦秋慧，丁 亚，彭小青，姚 静，苏齐鉴，广西中医药大学 研究生院，广西 南宁；前海人寿广西医院 皮肤科，广西 南宁；广西中医药大学附属瑞康医院 中西医结合转化医学中心，广西 南宁；钦州市第一人民医院 科技科，广西 钦州 摘要：目的 探讨虫草素对肿瘤坏死因子（）诱导人角质形成细胞系 增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 将 细胞分为对照组（）、模型组（）及低、中、高浓度虫草素干预组（、），先用 对模型组、虫草素干预组诱导 ，制作银屑病（）样细胞模型；之后虫草素干预组加入相应浓度的虫草素，继续培养 ；用 法检测细胞增殖，用流式细胞仪检测细胞凋亡，用 检测炎性细胞因子白介素（）、相对表达量。结果 虫草素干预 后细胞增殖率下降（），细胞凋亡率升高（），和 的 表达水平下降（）。结论 虫草素可抑制 诱导的人角质形成细胞系增殖、炎性反应并促进细胞凋亡。关键词：人角质形成细胞；虫草素；银屑病；细胞增殖；炎性反应中图分类号：；文献标志码：，；，；，；，：，（，），（），（），（）梁辉勇 虫草素抑制 诱导的人角质形成细胞系 增殖 （）：；银屑病（，）是易复发的慢性炎性皮肤病，中国发病率约 ，银屑病皮损的两大特征是炎性细胞浸润和表皮增殖失控，炎性反应导致皮肤瘙痒、红肿、鳞屑性斑块甚至系统性的损害，严重影响患者的身心健康；银屑病发病机制复杂，重要致病因素有遗传、环境、免疫等。银屑病治疗以药物为主，目前不能根治，病情易反复，寻找新的药物、方法仍然是研究的重要方向。虫草素（），又称“脱氧腺苷”，是蛹虫草、冬虫夏草等植物中的活性成份，有抗炎、抗菌、抗肿瘤、调节免疫等作用；这些作用与银屑病致病因素相对应，推测虫草素可能对银屑病有治疗作用。以下以细胞模型作为研究对象，以体外实验的方式，初步探讨虫草素对银屑病的潜在治疗作用。材料与方法 材料（色谱纯，公司）；虫草素（色谱纯，）和总 提取试剂盒（北京 公司）；细胞增殖检测试剂盒（，北京 公司）；细胞凋亡试剂盒（江苏凯基生物技术股份有限公司）；反转录试剂盒（公司）；实时荧光定量试剂盒（公司）；人角质形成细胞系（广州赛库生物有限公司）；完全培养基（含 低糖培养基、胎牛血清、非必需氨基酸、青链霉素）。方法 细胞的分组及处理：将细胞分为对照组（）、模型组（）及低浓度（）、中浓度（）、高浓度（）虫草素干预组，对照组用完全培养基，模型组、虫草素干预组在完全培养基中加入（终浓度 ）培养 ，之后低、中、高浓度虫草素组加入相应浓度虫草素，使虫草素终浓度分别为 、。各组继续培养 。法检测细胞增殖：按试剂盒说明书操作，细胞增殖率（）（实验 空白）（对照 空白）。流式细胞仪检测凋亡：按试剂盒说明书操作。检测细胞、相对表达量：提取、反转录、均按相应试剂盒说明书操作。以 作为内参，引物序列：，上游引物，下 游 引 物；，上游引物，下游引物；，上游引物，下游引物。目的基因 内参基因，实验组对照组 平均值，基因相对表达量。统计学分析用 软件进行统计分析。计量资料用均数标准差（）表示，当数据符合正态分布时，组间比较采用 单因素方差分析；数据不符合正态分布时，组间比较采用秩和检验。两变量相关性用 等级相关分析。结果 法检测结果虫草素呈浓度依赖性抑制 细胞的增殖，（，）（表）。表 细胞增殖率 （，）（）；基础医学与临床 （）细胞凋亡检测结果虫草素可促进模型细胞的凋亡，增加早期凋亡及晚期凋亡的比例（图）。结果 可使模型细胞、相对表达量升高，而虫草素可使它们下调（表）。讨论银屑病发病机制复杂，免疫因素及其引起的炎性反应最终导致表皮的过度增殖，形成银屑病皮损。促炎细胞因子 在银屑病发病机制中起重要作用。皮损表皮浆细胞样树突状细胞（，）活化，活化的 产生、干 扰 素（，）等 炎 性 因 子；、刺激常规树突状细胞（，）的 样受体、型凝集素受体，使 分泌、等；刺激辅助性 细胞（，），使 细胞分泌 ；图 细胞凋亡率 表 相对表达量 （，）（）；、等；进一步刺激表皮细胞增殖并分泌 等趋化因子，趋化因子使炎性细胞向表皮聚集，聚集的炎性细胞又分泌多种炎性因子，形成连锁反应，导致或加重病变。主要来源于表皮角质形成细胞，损伤刺激使表皮释放，反过来促进角质形成细胞及 细胞等产生炎性反应；在银屑病皮损中，升高并激活真皮中的 等细胞分泌，是银屑病病变细胞过度增生及炎性反应的重要因素。梁辉勇 虫草素抑制 诱导的人角质形成细胞系 增殖 细胞在 的诱导下，出现增殖失调及炎性反应，具有类似银屑病病变细胞过度增生及炎性反应的特性，因而常用来构建银屑病细胞模型。本研究利用 细胞模型，观察虫草素抑制 诱导的细胞异常增殖和炎性反应的作用，结果显示，虫草素能抑制 诱导的 细胞增殖，促进细胞凋亡，并下调炎性因子、的 表达水平，提示虫草素对银屑病可能有治疗作用。虫草素是一种腺苷类似物。内源性腺苷遍布于人体细胞，影响各种细胞、组织、器官的生理机能。腺苷可促进病变细胞的凋亡，如白血病细胞、黑色素瘤细胞、星形细胞瘤细胞等。与腺苷类似，虫草素可抑制病变细胞增殖、迁移、侵袭、促进病变细胞凋亡。此外，虫草素可抗炎、调节免疫；如在特应性皮炎的小鼠中，虫草素降低胸腺基质淋巴细胞生成素、水平，抑制趋化因子 及皮损中 的表达和活性；在小鼠炎性模型中，虫草素调节相关受体，抑制 细胞的过度活化；在脂多糖致小鼠肾小管上皮损伤中，虫草素显著降低细胞内活性氧水平，抑制炎性反应。虫草素的这些作用，可能解释了它能抑制模型细胞增殖和炎性反应的原因。今后应进一步开展动物实验和临床研究，以验证虫草素对于银屑病的治疗效果。参考文献：中华医学会皮肤性病学分会银屑病专业委员会中国银屑病诊疗指南（完整版）中华皮肤科杂志，：，：罗骏，王聪懿，吴庆琛虫草素增强顺铂诱导的食管癌细胞系 凋亡基础医学与临床，：周艳丽，许剑怡，王宏娟，等虫草素的药理作用及应用前景中国医药导报，：安然，邓云华肿瘤坏死因子 抑制剂的皮肤不良反应及治疗进展 中国皮肤性病学杂志，：，：赵京霞，王燕，底婷婷，等 轴在银屑病免疫发病机制中的作用基础医学与临床，：，：陈健勤，邹玲，王莎莉，等银屑号含药血清对银屑病样细胞模型的增殖、凋亡相关蛋白及基因的影响中国皮肤性病学杂志，：黄涛，周炳杰，耿骥，等 积雪草酸对 诱导的 细胞增殖的抑制作用国际药学研究杂志，：，：，：，：蔡曦，尚超，孟丽荣虫草素抗肿瘤药理作用及其机制的研究进展药物评价研究，：，：杨永丽，项辉，肖志英虫草素对脂多糖诱导大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用中华危重病急救医学，：