布托啡诺调节HIF-1α_VEGF信号通路对子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成的影响.pdf

:./.论著布托啡诺调节/信号通路对子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成的影响刘庆冬 宋美微 袁魁项目来源:黑龙江省中医药科研项目(编号:)作者单位:黑龙江省牡丹江市肿瘤医院麻醉科(刘庆冬)妇瘤二科(袁魁)黑龙江省牡丹江市第一人民医院呼吸内科(宋美微)【摘要】目的 探讨布托啡诺()调节缺氧诱导因子()/血管内皮生长因子()信号通路对子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成的影响 方法以人子宫内膜癌 细胞为研究对象用不同浓度(、.、/)处理 细胞 法检测 细胞增殖并计算半抑制浓度()取对数生长期的 细胞将其分为对照组(组)、低剂量 组(组/)、中剂量 组(组/)、高剂量 组(组/)、(激活剂)组(/)、组(/)划痕实验检测 细胞迁移能力 实验检测 细胞侵袭能力基质胶法检测 细胞管腔形成 检测 细胞中基质金属蛋白酶()、环氧化酶()、蛋白表达 结果 与 /比较.、/处理的 细胞 值降低(.)经计算得 值为./因此选取、/作为后续处理 细胞的低、中、高剂量浓度 与 组比较 组、组、组 细胞划痕愈合率、细胞侵袭数目、管腔形成数、蛋白表达降低 组 细胞划痕愈合率、细胞侵袭数目、管腔形成数、蛋白表达升高(.)与 组比较 组 细胞划痕愈合率、细胞侵袭数目、管腔形成数、蛋白表达升高(.)结论 可能通过抑制/信号通路抑制 细胞迁移、侵袭和血管生成【关键词】子宫内膜癌布托啡诺缺氧诱导因子/血管内皮生长因子信号通路迁移侵袭血管生成【中图分类号】.【文献标识码】【文章编号】()/.【】()()/()./()().()/()/()/()/()/().()()././(.)././.(.)(.).(.)./.【】/子宫内膜癌是妇科常见肿瘤严重威胁女性身心健康 世界卫生组织国际癌症研究机构的数据显示河北医药 年 月 第 卷 第 期 年全球大约有 万例子宫内膜癌新病例 其中中国约有 万例约占全球发病率的/越来越多的研究表明细胞迁移、侵袭和血管生成参与了子宫内膜癌的进展 目前子宫内膜癌的治疗以手术为主放疗、化疗、孕激素治疗、新型靶向治疗为辅 然而经过一段时间的治疗后癌细胞容易发生转移最终导致治疗失败 因此开发新的药物抑制子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成具有重要的临床意义 布托啡诺()是一种合成阿片类药物该类药物已被证明可以抑制肿瘤生长和转移 已有研究报道 可抑制肝癌细胞转移和血管生成 而 能否抑制子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成尚不明确 相关研究显示抑制缺氧诱导因子()/血管内 皮 生 长 因 子()的表达显著提高了子宫内膜癌细胞的放射敏感性 而笔者发现 能否通过调控/信号通路影响子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成尚不明确 因此本研究主要探究 对子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和血管生成的影响以及其作用机制 材料与方法.细胞来源人子宫内膜癌细胞系 购自厦门逸漠生物科技有限公司.主要试剂 布托啡诺(规格:)购自南京北鱼生物科技有限公司 激活剂 购自北京安必奇生物科技有限公司 试剂盒购自无锡菩禾生物医药技术有限公司兔源一抗基质金属蛋白酶()、环氧化酶()、辣根过氧化物酶()标记的羊抗兔 二抗均购自英国 公司.细胞培养人子宫内膜癌细胞系 在补充有 胎牛血清的 培养基中孵育 所有细胞均在、的加湿培养箱中培养.法检测 细胞增殖取对数生长期的 细胞稀释其浓度为 个/取 细胞悬液置于 孔板中加入终浓度为、.、/含 胎牛血清的 培养液处理 然后每孔加入 试剂孵育 酶标仪测量 处的光密度()值并计算半抑制浓度().细胞分组 取对数生长期的 细胞将其分为对照组(组)、低剂量 组(组)、中剂量 组(组)、高剂量 组(组)、(激活剂)组、组参考文献及前期预实验结果 组、组、组、组 细 胞 分 别 用/、/、/、/处理 组 细胞同时用 /和 /处理 组 细胞为正常培养的 细胞.划痕愈合实验检测 细胞迁移 将 细胞以 个/孔的密度接种于 孔板中当细胞单层达到 汇合度时用 移液管尖端轻轻地刮擦细胞层 将含有 的培养基更换为无 的培养基 在、观察细胞划痕的宽度并记录 的划痕宽度为 的划痕宽为 划痕愈合率()()/.检测 细胞侵袭将 预涂于 上室并接种 个 细胞下室加入含 的培养基、条件下孵育 将侵袭的细胞用甲醇固定 .结晶紫染色 利用光学显微镜观察 细胞侵袭情况并计数.基质胶法检测 细胞管腔形成将 胶预涂于 孔板的每个孔上待其凝固后加入 个/细胞悬液在细胞培养箱中培养 利用倒置显微镜观察 细胞管腔形成情况.检测 细胞中、蛋白表达使用 缓冲液提取 细胞蛋白质 将蛋白质进行定量、电泳、转膜、封闭后将膜与一抗()、()、()、()、()、()在 孵育过夜 随后将膜和 标记的山羊抗兔 二抗()共同孵育 通过 系统观察蛋白质条带 软件评估蛋白条带灰度值.统计学分析应用 .统计软件计量资料以 表示多组间采用单因素方差分析 组间比较采用 检验.为差异有统计学意义 结果.不同浓度 对 细胞增殖能力的影响 与 /比较.、/处理的 细胞 值降低(.)经计算得 值为./因此后续分别选取河北医药 年 月 第 卷 第 期 、/作为后续处理 细胞的低、中、高剂量浓度 见表 表 组 细胞 值比较 组别 值/././././././.注:与 /比较.对 细胞迁移能力的影响与 组比较 组、组、组 细胞划痕愈合率降低 组 细胞划痕愈合率升高(.)与 组比较 组 细胞划痕愈合率升高(.)见表 图 表 组 细胞划痕愈合率比较 组别划痕愈合率()组.组.组.组.组.组.注:与 组比较.与 组比较.与 组比较.与 组比较.图 划痕愈合实验检测 细胞迁移.对 细 胞 侵 袭 能 力 的 影 响 实验结果显示与 组比较 组、组、组 细胞侵袭数目降低 组 细胞侵袭数目升高(.)与 组比较 组 细胞侵袭数目升高(.)见表 图 表 组 细胞侵袭数目比较个 组别细胞侵袭数目 组.组.组.组.组.组.注:与 组比较.与 组比较.与 组比较.与 组比较.图 实验检测 细胞侵袭.对 细胞血管生成的影响与 组比较 组、组、组 细胞管腔形成数减少 组 细胞管腔形成数增加(.)与 组比较 组河北医药 年 月 第 卷 第 期 细胞管腔形成数增加(.)见图 表 图 组 细胞管腔形成数比较()表 组 细胞管腔形成数比较个 组别管腔形成数(个)组.组.组.组.组.组.注:与 组比较.与 组比较.与 组比较.与 组比较.对 细胞中、及/信号通路相关蛋白表达的影响与 组比较 组、组、组 细胞中、蛋白表达降低 组 细胞中、蛋白表达升高(.)与 组比较 组 细胞中、蛋白表达升高(.)见图 表 图 检测 组细胞中、蛋白表达 组 组 组 组 组 组表 组 细胞中、蛋白表达比较 组别/组.组.组.组.组.组.注:与 组比较.与 组比较.与 组比较.与 组比较.讨论子宫内膜癌在世界范围内发病率高治愈率低 科学家们也一直致力于该肿瘤的发病机制研究希望能为其诊断、治疗和预后提供帮助 据报道子宫内膜癌发生发展与肿瘤细胞转移与血管生成密切相关 因此开发新的药物抑制子宫内膜癌细胞迁移、侵袭及血管生成具有重要意义 是一种合成阿片类药物对疾病具有镇痛和抗炎作用此外其还具有抑癌作用 据报道 可抑制卵巢癌细胞的恶性增殖和转移 可抑制肺癌细胞侵袭 以上研究表明 可抑制卵巢癌、肺癌等细胞的恶性生物学行为 属于锌依赖性河北医药 年 月 第 卷 第 期 内肽酶家族可集中降解几乎所有细胞外基质成分破坏癌细胞侵袭的组织学屏障使癌细胞逃出原发肿瘤通过血管基底膜迁移进入周边组织 在迄今为止鉴定的所有 蛋白中 和 被认为是参与肿瘤迁移和侵袭的最关键成员 血管生成即静脉、动脉或淋巴管形成的过程快速增长的血管可使组织内部大量因子失调给机体免疫反应造成干扰进而促进肿瘤发展 可通过上调 来参与血管的生成 本研究发现 可抑制子宫内膜癌 细 胞 迁 移、侵 袭 及 血 管 生 成 同 时 抑 制 细胞中、蛋白表达且呈剂量依赖性提示 可能成为治疗子宫内膜癌的潜在有效药物 可促进其下游因子 诱导的血管生成 据报道抑制/通路可抑制肺癌血管生成抑制/通路可抑制肝癌细胞 的增殖、迁移和侵袭激活/信号通路促进了卵巢癌血管形成过程最终参与卵巢癌发病 本研究结果与其是一致的本研究显示与 组比较 组 细胞中、蛋白表达升高细胞迁移、侵袭和血管生成能力增强 表 明/信 号 通 路 确 实 参 与 了 细胞迁移、侵袭和血管生成过程 此外本研究还发现 可呈剂量依赖性地抑制 细胞中、蛋白表达推测 可能通过抑制/信号通路抑制 细胞迁移、侵袭和血管生成 为了验证该猜想本研究在高剂量 作用的基础上再加上 激活剂 干预 细胞结果显示 减弱了高剂量 对 细胞迁移、侵袭及血管生成的抑制作用 证实了猜想的正确性即 可能通过抑制/信号通路抑制 细胞迁移、侵袭和血管生成 综上所述 可能通过抑制/信号通路抑制 细胞迁移、侵袭和血管生成 本研究仅仅在体外细胞水平上探讨了 对 细胞迁移、侵袭和血管生成的影响以及其作用机制未进行进一步体内实验验证是本研究的不足之处后期将会深入探究参考文献 .():.():./.():.():.():.:.():.()():./.():.刘辉 王雅琳 李福龙等.布托啡诺抑制/信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.中国优生与遗传杂志():.姚刘旭 滕文彬 黄素琴等./信号通路在脂多糖诱导 细胞屏障损伤中的作用及机制.中国病理生理杂志():.:.():.滕昕 陈艳 曹福源.子宫内膜癌超声参数与病灶组织中增殖凋亡侵袭及血管生成基因表达的关系.中国妇幼保健():.:.柳小平 李淑华 杨燕霞等.布托啡诺抑制 信号通路对肺癌细胞紫杉醇敏感性的影响.毒理学杂志():./.():.于敏孙苗苗贾相奇等.子宫内膜癌抗血管生成靶向药物治疗进展.中国妇产科临床杂志():.刘军 徐冉 赵晓昆.人参皂苷 对膀胱癌细胞血管生成相关蛋白的表达及癌细胞生长和转移的影响.中药新药与临床药理():./.():.杨倩宇 闫梓乔 李潇等.黄芪莪术抑制肺癌血管生成及其对/和 /信号通路的影响.中华中医药杂志():.韩志伟 张德智 赵玉鹏.西地尼布抑制/通路对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响.中国普外基础与临床杂志():.孙丽莎 邓红玉 沈浩明等.介导 通过/信号通路影响卵巢癌的血管形成.重庆医科大学学报():.(收稿日期:)河北医药 年 月 第 卷 第 期