参萸补血方对再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及血液学参数的影响.pdf

2023 年 第 26 卷 第 4 期广西中医药大学学报参萸补血方对再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及血液学参数的影响陆海颂，雷宇，曾清*，程纬民，何艾（广西中医药大学第一附属医院，广西南宁530023）摘要：目的观察参萸补血方对再生障碍性贫血（AA）小鼠骨髓细胞学的影响，探讨其治疗AA的确切疗效。方法将80只小鼠按随机数字表法分为4组：正常对照组、模型组、参萸补血方组、醋酸泼尼松组，每组20只。除正常对照组外，余组小鼠以60 Co-射线照射加腹腔注射环磷酰胺、氯霉素复合方法建立AA模型。造模后参萸补血方组 剂量为16.56 g/（kgd）、醋酸泼尼松组 剂量为9.1 mg/（kgd）给药连续干预4周，每天灌胃量均为10 ml/kg。光镜下观察骨髓增生程度并计算骨髓非造血细胞百分率（包括淋巴细胞、单核细胞、浆细胞等），血细胞分析仪检测各组小鼠外周血中血液学参数情况。结果与正常对照组比较，模型组小鼠外周血中的白细胞（WBC）、血红蛋白（HGB）和血小板（PLT）水平均显著降低，骨髓中非造血细胞的百分率显著升高（P0.05），骨髓增生低下（P0.01）；与模型组比较，参萸补血方组、醋酸泼尼松组小鼠外周血中WBC、HGB、PLT水平均显著升高，骨髓中非造血细胞百分率显著下降（P0.05），骨髓增生活跃（P0.01）。结论 参萸补血方能够修复AA模型小鼠的骨髓造血功能，促进骨髓增殖，改善外周血液学参数，有效治疗AA。关键词：再生障碍性贫血；参萸补血方；骨髓增殖；血液学参数；实验研究中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：2095-4441（2023）04-0053-05引文格式：陆海颂，雷宇，曾清，等.参萸补血方对再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及血液学参数的影响 J.广西中医药大学学报，2023，26（4）：53-57.Effects of Shenyu Buxue Prescription on Bone Marrow Proliferation andHematological Parameters in Rats with Aplastic AnemiaLU Hai-song，LEI Yu，ZENG Qing*，CHENG Wei-min，HE Ai（The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning，Guangxi，530023）Abstract：ObjectiveTo observe the effect of Shenyu Buxue prescription on the myeloid cytology of rats withaplastic anemia（AA）and to explore its exact efficacy.MethodsEighty rats were divided randomly into four groups according to the random number table method：normal control group，model group，Shenyu Buxue presciption group，andprednisone acetate group，with 20 rats in each group.Except the normal control group，the rats from the other groupswere irradiated with 60 Co-radiation and intraperitoneal injection of cyclophosphamide and chloramphenicol to establish the AA model.After modeling，Shenyu Buxue prescription group with 16.56 g/（kgd）and prednisone acetate groupwith 9.1 mg/（kgd）were administered for 4 weeks，and the daily gavage volume was 10 ml/kg.The degree of bone marrow proliferation was observed under light microscopy and the percentage of non-hematopoietic cells including lympho收稿日期：2023-03-30基金项目：广西自然科学基金项目（编号：2023GXNSFBA026117）；广西中医药管理局资助项目（编号：GZZC2019058）；广西中医药大学青年基金项目（编号：2019QN024）第一作者简介：陆海颂（1985），女，主治医师，讲师，研究方向：血液肿瘤疾病中西医结合治疗*通信作者：曾清（1969），女，副主任医师，副教授，研究方向：中医治疗血液肿瘤疾病；E-mail： 532023，Vol.26 No.4Journal of Guangxi University of Chinese Medicine再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA）是一种免疫介导的以不同程度骨髓造血功能障碍、骨髓造血组织脂肪化、外周血全血细胞（白细胞、血红蛋白、网织红细胞及血小板）减少为特征的自身免疫性疾病，临床主要表现为进行性贫血、脏器出血及严重感染等。疾病后期因重度贫血、血小板严重减少和中性粒细胞极度缺乏而出现严重的出血及感染，诱导脏器功能衰竭及死亡1-2。目前AA的诊疗片面强调免疫抑制剂的使用，而忽视了骨髓衰竭的病理因素，治疗方面主要采用造血干细胞移植、免疫抑制等方法，疗效不尽如人意3。中医学认为，AA归属于中医“虚劳（髓劳）”“血虚”等范畴，脾肾亏虚为其关键病机，补肾健脾、益髓生血为AA的治疗原则。参萸补血方由党参、山茱萸肉、牡丹皮、淫羊藿、补骨脂等组成，具有补肾健脾、益髓生血的功效，临床用于AA的治疗，可以明显改善AA患者的骨髓衰竭，升高血红蛋白，并缓解乏力、头晕等症状，使患者尽早脱离输血，临床疗效显著4-6。本研究以参萸补血方干预免疫介导的AA小鼠，通过检测AA小鼠骨髓增殖及外周血中各项血液学参数的变化，探讨参萸补血方对AA小鼠骨髓增殖及血液学参数的影响。1实验材料1.1动物BalB/C 小鼠 80只，雄性，SPF 级，体质量1822 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004。小鼠分笼饲养，每笼5只，饲养动物的室内温度（232），湿度（5010）%。实验动物使用许可证号：SYXK（桂）2019-0001。1.2药品与试剂参萸补血方由党参25 g、山茱萸肉10 g、牡丹皮30 g、淫羊藿30 g、补骨脂25 g组成，所有药材由广西中医药大学第一附属医院药剂科提供。将3剂参萸补血方饮片熬制成水煎剂116 ml，合生药浓度3.12 g/ml，储存于4 冰箱备用。醋酸泼尼松片为天津力生制药股份有限公司产品，国药准字 H12020123；环磷酰胺（cyclophosphamide，CY）为上海华联制药有限公司产品（国药准字 H31000699）；氯霉素（chloramphenicol，CH）为陕西省西安妇幼制药厂产品，批号：912525。1.3仪器Varian Trilogy直线加速器（美国瓦里安医疗系统公司）；血细胞分析仪-BC-6900（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；高速冷冻离心机（德国Eppendorf 公司）；1510型酶标仪（美国赛默飞世尔科技公司）；Olympus BEION V4.2型显微镜（日本OLYMPUS公司）。2实验方法2.1分组、造模与给药将80只BalB/C小鼠按随机数字表法分为4组：正常对照组、模型组、参萸补血方组、醋酸泼尼松组，每组20只。正常对照组不造模，予普通饲料喂养，自由饮用蒸馏水。其余组采用60 Co-射线照射加腹腔注射环磷酰胺（CY）、氯霉素（CH）的方法建立AA小鼠模型7：第一天予BalB/C小鼠一次全身3Gy 60 Co-射线均匀照射，能量8 MeV，单次剂量300C Gy，源皮距100 cm，照射时间1 min。照射后第 4 d、第 5 d、第 6 d 各腹腔注射（ip）CY 50 mg/kg、CH 62.5 mg/kg 1次，造模期间自由饮水。第14 d，各组分别处死 5 只小鼠以验证 AA 小鼠模型造模是否成功。以小鼠外周血三系细胞（白细胞、红细胞、血小板）减少，网织红细胞减少，骨髓增生低下，非造血细胞（脂肪细胞）增多，有核细胞计数极度减低为造模成功标准。造模成功后，各给药组根据 药理实验方法学 中小鼠与人的体表面积比值表折算成小鼠等效灌胃剂量8，参萸补血方组灌胃给予参萸补血方药液，剂量为16.56 g/（kgd），灌胃量为10 ml/kg；醋酸泼尼松cytes，monocytes，plasma cells，etc.of bone marrow was calculated，and the hematological parameters in the peripheralblood of each group were detected by the hemocytosis.ResultsCompared with the normal control group，the levels ofwhite blood cells（WBC），hemoglobin（HGB）and platelets（PLT）in the peripheral blood in the model group was significantly reduced，the percentage of non-hematopoietic cells in the bone marrow was significantly increased（P0.05），and the bone marrow hyperplasia was low（P0.01）.Compared with the model group，the levels of WBC，HGB and PLTin the peripheral blood in the Shenyu Buxue prescription group and the prednisone acetate group increased significantly，the percentage of non-hematopoietic cells in the bone marrow decreased significantly（P0.05），and bone marrowhyperplasia was active（P0.01）.ConclusionShenyu Buxue prescription can repair the bone marrow hematopoieticfunction，promote bone marrow proliferation，improve peripheral hematological parameters，and effectively treat aplasticanemia.Keywords：aplastic anemia；Shenyu Buxue prescription；bone marrow proliferation；hematological parameters；experimental research 542023 年 第 26 卷 第 4 期广西中医药大学学报3.3骨髓细胞学检测结果3.3.1外观取材涂片观察肉眼观察：正常对照组小鼠骨髓涂片涂膜面厚薄适中，无脂肪珠，可见骨髓小粒；模型组小鼠骨髓涂片涂膜面较薄，可见脂肪珠，无