科学研究|组稿\Email：nmgxmy2008@sina.com布鲁菌S2疫苗株GL_0002189基因原核表达及生物信息学分析王文龙1,红梅²,呼和巴特尔1*（1.内蒙古农业大学兽医学院，农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，内蒙古呼和浩特010018；2.内蒙古医科大学，内蒙古呼和浩特010010)摘要：为区分羊种布鲁菌S2疫苗株为疫苗免疫还是自然感染，本课题组对布鲁菌S2疫苗株进行了测序，将测序得到的基因与已在NCBI数据库中提交的布鲁菌基因组进行比对,找出了布鲁菌S2(猪种)疫苗株特有的GL_0002189基因，再对GL_0002189基因进行克隆、表达及验证，并采用布鲁菌BP26基因当作阳性对照。同时对GL_0002189基因进行了生物信息学分析。结果发现，以绵羊S2疫苗免疫的血清当作抗体检测，重组蛋白BL21(pETBP26)、BL21(pETGL_0002189)与空菌BL21(DE3)比较，分别在32kDa和29kDa处出现条带。结果表明重组蛋白BL21(pETBP26)、BL21(pETGL_0002189)能够与布鲁菌S2免疫血清中的抗体特异性结合,且具有很好的免疫原性。另外,重组蛋白BP26与自然感染的血清发生特异性反应，而重组蛋白GL_0002189与自然感染的血清不发生特异性反应，因此GL_0002189基因在布鲁菌S2疫苗株中存在，而在羊种布鲁菌自然流行株中不存在。通过生物信息学分析发现,GL_0002189基因编码蛋白分子量约为24.1kDa，含有1个660bp的完整的开放阅读框，编码219个氨基酸，无跨膜区，有5个抗原表位。由此表明，本研究中的GL_0002189抗原可用于布鲁菌S2疫苗免疫与羊种布鲁菌自然感染的鉴别诊断，为布鲁菌病的诊断提供了理论支持。关键词：布鲁氏菌;GL_0002189基因；原核表达；鉴别诊断中图分类号：S852.61布鲁菌病是一种由属于布鲁菌属的微生物引起的细菌性人畜共患病,布鲁菌进人体后，约有90%的菌被中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞杀死,然而少部分细菌会在巨噬细胞内寄生,并扩散到细胞和组织中[-2]。自20世纪80年代末以来，布鲁菌病在部分国家和地区快速流行，感染了60多种野生动物，并对畜牧业造成了巨大的经济损害3。人类很容易通过动物及其产品感染布鲁菌病。即使人类不是这种疾病的携带者，但感染布鲁菌可导致生殖能力丧失，也可导致孕妇流产。1材料与方法1.1材料布鲁菌S2疫苗株为金宇保灵生物药品有限公司生产;E.coliBL21(DE3)和E.coliDH5a购自全式金生物技术有限公司；辣根过氧化物酶标记的驴抗绵羊IgG购自依托生物有限公司；布鲁菌自然感染的血基金项目：内蒙古自治区科技计划项目(201502071)作者简介：王文龙（1976一）...
