苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡生长性能、免疫功能及肠道健康的影响.pdf

动物营养学报，（）：苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡生长性能、免疫功能及肠道健康的影响樊 政 刘远斌 张翘楚 宋亚汝 楚丽翠 侯丹熹 左建军 王伟唯（华南农业大学动物科学学院，广州；帝斯曼（中国）有限公司，上海）摘 要：本试验旨在探究苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡生长性能、免疫功能及肠道健康的影响。选取 只 日龄 雌性肉仔鸡，随机分为 组，每组 个重复，每个重复 只。对照组（组）和模型组（组）肉仔鸡饲喂基础饲粮；苯甲酸组（组）肉仔鸡饲喂基础饲粮 苯甲酸。组和 组肉仔鸡分别于 日龄感染艾美尔球虫，于 日龄期间感染产气荚膜梭菌。试验期 。结果显示：）与 组相比，球虫和产气荚膜梭菌联合感染显著降低了 日龄和 日龄肉鸡的平均末重（）、平均日增重（）及 日龄和 日龄肉鸡的平均日采食量（）（）；显著提高了肉鸡 日龄时的肝脏指数和法氏囊指数（）；显著提高了肉鸡 日龄时血清中白细胞介素（）、肿瘤坏死因子（）及 日龄时血清中白细胞介素（）含量（）；显著降低了肉鸡 日龄时血清中免疫球蛋白（）含量（）；显著降低了肉鸡 日龄时空肠和 日龄时回肠的绒毛高度与隐窝深度比值（）（），显著提高了肉鸡 日龄时空肠和回肠的隐窝深度（）（）；显著上调了肉鸡 日龄时空肠、回肠白细胞介素（）相对表达量（）；显著下调了肉鸡 日龄时空肠闭合小环蛋白（）、黏蛋白（）及 日龄时空肠、回肠闭锁蛋白（）和 相对表达量（）。）与 组相比，添加苯甲酸可显著缓解因球虫和产气荚膜梭菌联合感染导致的肉鸡、及 的降低（）；显著降低受感染肉鸡 日龄时肝脏指数和法氏囊指数（）；显著降低受感染肉鸡 日龄时血清中 含量（）；显著提高受感染肉鸡 和 日龄时血清中免疫球蛋白（）、免疫球蛋白（）含量（）；显著提高受感染肉鸡 日龄时空肠和回肠 、回肠绒毛高度（）及 日龄时空肠（）；显著降低受感染肉鸡 日龄时空肠（）；显著降低受感染肉鸡 日龄时回肠、及 日龄时回肠 相对表达量（）；显著提高受感染肉鸡 日龄时空肠 相对表达量（）。综上所述，饲粮中添加 苯甲酸能有效缓解球虫和产气荚膜梭菌联合感染对 日龄肉鸡造成的肠道炎症及肠道屏障损伤，增强肉鸡免疫功能，改善肠道组织形态，维护肠道健康，从而提高生长性能。关键词：苯甲酸；球虫；产气荚膜梭菌；肉鸡；生长性能；免疫功能；肠道健康中图分类号：文献标识码：文章编号：（）收稿日期：作者简介：樊 政（），男，湖北荆州人，硕士研究生，动物营养与饲料科学专业。：通信作者：左建军，教授，博士生导师，：；王伟唯，副研究员，硕士生导师，：饲料端“禁抗”后，畜禽疾病频发，其中禽坏死性肠炎（，）尤为突出。又称肠毒血症，是一种主要由 型产气荚膜梭菌（，）引起的肠道疾病，在动 物 营 养 学 报 卷生产中常与球虫病相伴或相继发生。家禽感染 后，食欲减退，肠道出血、溃疡、坏死，腹泻率提高，生长性能降低，急性 感染还可导致鸡群突然大量死亡。给全球养殖业带来了巨大的经济损失，据统计，年经济损失高达 亿美元。因此，为了遏制禽 的病发率，兼顾抗生素杀菌抑菌和促生长两大特性，寻求绿色安全的饲用抗生素替代品迫在眉睫。研究表明，短链有机酸能够作用于畜禽小肠后端和大肠，增强肠道屏障功能和免疫功能，并在消化道后端创造弱酸性环境，抑制病源微生物的定植，调控肠道微生态平衡，提高养分消化率和生长性能，且无污染、无残留，应用前景广阔。苯甲酸作为最简单的芳香酸，具备短链有机酸的功能。目前苯甲酸在正常饲养肉鸡上的应用研究已经较多，但关于苯甲酸在预防球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡上的应用研究较少。因此，本研究旨在探究苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡生长性能、免疫功能及肠道健康相关指标的影响，为白羽肉鸡生产中缓解 感染提供一种新的营养策略。材料与方法 试验材料 试验所采用的苯甲酸（含量）由上海某公司提供。鸡球虫病三价活疫苗（堆型、巨型、柔嫩艾美尔球虫混合株）购自佛山某生物技术有限公司。产气荚膜梭菌（编号：，主要产生 毒素）购自广东省微生物菌种保藏中心。试验设计 试验选用体况正常、健康的 日龄 雌性白羽肉仔鸡 只，随机分为 组，分别为对照组（组）、模型组（组）和苯甲酸组（组），每组 个重复，每个重复 只，各组试验鸡初始体重差异不显著（）。组和 组肉仔鸡饲喂 基 础 饲 粮；组 肉 仔 鸡 饲 喂 基 础 饲 粮 苯甲酸。组和 组肉仔鸡在 日龄时每只灌服 混合型球虫卵液（含 个混合虫卵），再于 日龄期间每天灌服 产 气 荚 膜 梭 菌 菌 液（活 菌 数 为 ）；组肉鸡同期灌服等量无菌的生理盐水或庖肉培养基。试验期为 。基础饲粮 试验采用玉米豆粕型基础饲粮，基础饲粮根据我国肉鸡饲养标准（）配制，其组成及营养水平见表。饲养管理 饲养试验于广东省畜牧研究所家禽代谢室进行。各组肉鸡饲养环境和管理条件保持一致且符合 白羽肉鸡饲养要求，按照所在试验场地的常规管理规程和免疫程序进行饲养管理。肉鸡饲养期间，自由采食和饮水。饲养前 保持 光照，之后每天光照时间减少 ，直至每天光照时间恒定为 。试验鸡除每周称重 次外，在 日龄和 日龄攻毒前禁食 ，攻毒当天进行称重。于 和 日龄进行屠宰取样。表 基础饲粮组成及营养水平（干物质基础）（）项目含量 日龄 日龄 原料 玉米 豆粕 豆油 石粉 食盐 磷酸氢钙 氯化胆碱 蛋氨酸 赖氨酸盐酸盐 预混料）期樊 政等：苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡生长性能、免疫功能及肠道健康的影响续表 项目含量 日龄 日龄 合计 营养水平 ）代谢能 （）粗蛋白质 钙 总磷 有效磷 赖氨酸 蛋氨酸 蛋氨酸半胱氨酸 色氨酸 苏氨酸 ）预混料为每千克饲粮提供 ：，生物素 ，叶酸 ，泛酸 ，烟酸 ，（），（），（），（），（），（）。）营养水平均为计算值。屠宰取样 分别于 和 日龄：，从每个重复中挑选 只体重接近该重复平均体重的肉鸡，每组 只，共计 只，禁食 后，颈静脉采血 ，静置 后，于 离心 ，分离上层血清，于 保存。将采血后的肉鸡进行解剖，分离器官及肠道，称重免疫器官，收集空肠、回肠组织置于 冻存管中，液氮速冻。取十二指肠、空肠和回肠中段组织 左右，在磷酸盐缓冲液（）中清洗食糜后，置于 多聚甲醛溶液中固定。指标测定 生长性能 每周对试验鸡进行空腹称重，计算 日龄、日龄肉鸡的平均末重（）、平均日采食 量（）、平 均 日 增 重（）和 料 重比（）。免疫器官指数 屠宰前对每只待屠宰试验鸡进行称重，记录活体重，取样后去除肝脏、脾脏、胸腺和法氏囊周边脂肪，称重并记录，计算器官指数，计算公式为：器官指数器官重（）活体重（）。血清免疫指标 采用酶联免疫吸附测定（）法测定、日龄肉鸡血清中免疫球蛋白（）、免疫球蛋白（）、免疫球蛋白（）含量（试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司）和血清中细胞因子白细胞介素 （）、白细 胞 介 素 （）、白细胞介素（）、肿瘤坏死因子（）含量（试剂盒购自武汉华美生物工程有限公司）。肠道组织形态 将固定好的肠道组织样用于制作苏木精伊红（）染色石蜡切片，并将切片置于显微镜 倍下观察，测量绒毛高度（）、隐窝深度（），并计算二者的比值（）。肠道病理损伤评分 肉鸡肠道损伤评分标准参照张贝贝的文章，评分标准如下：分，无明显损伤；分，小肠的浆膜面和肠系膜严重充血；分，肠壁变薄、变脆、有红色出血点（个）；分，肠腔内有气体，肠壁出现针尖样坏死或溃疡点；分，肠腔内充满气体，肠壁出现成片状坏死或溃疡；分，肠腔内有大量气体，出现弥漫性坏死。肠道屏障及炎症相关基因表达 采用组织总 抽提试剂盒，生工生物工程（上海）股份有限公司提取空肠、回肠组织总，提取完毕后使用 核酸蛋动 物 营 养 学 报 卷白测定仪测定 的浓度与纯度，通过 琼脂糖凝胶电泳确定 完整性。确认提取的总 可用于后续试验后，采用逆转录 试剂盒（南京诺唯赞生物科技股份有限公司）对提取的组织总 进行反转录制备，然后使用实时荧光 仪及 染料体系（南京诺唯赞生物科技股份有限公司）对反转录得到的 进行。以 肌动蛋白（）作为内参基因，采用 法来计算各目的基因的 相对表达量。内参基因，肠道炎症相关基因、，肠道屏障相关基因闭合蛋白（）、闭锁蛋白（）、闭合小环蛋白（）、黏蛋白（）引物序列根据 中 提 供 的 基 因 序 列，使 用 软 件 进行设计，各基因特异性上、下游引物见表。试验所用引物均由北京擎科生物科技有限公司合成。表 特异性引物序列 项目引物序列 （）产物长度 肌动蛋白：白细胞介素：白细胞介素：白细胞介素：白细胞介素：肿瘤坏死因子：闭合蛋白：闭锁蛋白：闭合小环蛋白：黏蛋白：数据处理与分析 试验数据经过 进行初步处理后，采用 统计软件进行单因素方差分析（），方差齐性时使用 氏法多重比较检验组间差异的显著性，方差不齐时使用 检验与 检验判断差异的显著性，试验数据用平均值和均值标准误（）表示，为差异显著，表示有显著趋势。结果与分析 苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡生长性能的影响 由表 可知，日龄时，组肉鸡 和 与 组相比显著降低（），组肉鸡生长性能与 组和 组差异不显著（）；日龄时，组和 组肉鸡 显著高于 组（），组肉鸡 恢复到 组水平（）；从整个试验期（日龄）来看，组和 组肉鸡、期樊 政等：苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡生长性能、免疫功能及肠道健康的影响均显著高于 组（），且 组肉鸡 显著高于 组（）。表 苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡生长性能的影响 项目组别 值 日龄 平均初重 平均末重 平均日采食量 平均日增重 料重比 日龄 平均日采食量 平均日增重 料重比 日龄 平均末重 平均日采食量 平均日增重 料重比 同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著（），不同小写字母表示差异显著（）。下表同。，（），（）苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡免疫器官指数的影响 由表 可知，日龄时，组肉鸡肝脏指数和法氏囊指数显著高于 组和 组（）。日龄时，各组间免疫器官指数差异不显著（）。表 苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡免疫器官指数的影响 项目组别 值 日龄 肝脏指数 脾脏指数 法氏囊指数 胸腺指数 日龄 肝脏指数 脾脏指数 法氏囊指数 胸腺指数 苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡血清细胞因子含量的影响 由表 可知，日龄时，与 组相比，组肉 鸡 血 清、含 量 显 著 提 高（），血清 含量有提高的趋势（）；与 组相比，组肉鸡血清 含量显著降动 物 营 养 学 报 卷低（），血清 含量有降低的趋势（）。日龄时，组肉鸡血清 含量显著高于 组和 组（），各组间肉鸡血清、和 含量差异不显著（）。表 苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡血清细胞因子含量的影响 项目组别 值 日龄 白细胞介素 白细胞介素 白细胞介素 肿瘤坏死因子 日龄 白细胞介素 白细胞介素 白细胞介素 肿瘤坏死因子 苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡血清免疫球蛋白含量的影响 由表 可知，日龄时，与 组相比，组和 组 肉 鸡 血 清 含 量 显 著 降 低（）；与组相比，组肉鸡血清、含量显著提高（）。日龄时，与 组相比，组和 组肉鸡血清 含量显著提高（）；与 组相比，组肉鸡血清 含量显著提高（）。表 苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡血清免疫球蛋白含量的影响 项目组别 值 日龄 免疫球蛋白 免疫球蛋白 免疫球蛋白 日龄 免疫球蛋白 免疫球蛋白 免疫球蛋白 苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡肠道组织形态的影响 由表 可知，日龄时，与 组相比，组肉鸡空肠 显著降低（）；与 组相比，组肉鸡空肠、回肠 和回肠 均显著提高（）。日龄时，与 组相比，组肉鸡空肠和回肠 显著提高（），回肠 显著降低（）；与 组相比，组肉鸡空肠 显著降低（），空肠 显著提高（）。期樊 政等：苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡生长性能、免疫功能及肠道健康的影响表 苯甲酸对球虫和产气荚膜梭菌联合感染肉鸡肠道组织形态的影响 项目组别 值 日龄 绒毛高度 空肠 隐窝深度 绒毛高度 隐窝深度 绒毛高度 回肠 隐窝深度 绒毛高度 隐窝深度 日龄 绒毛高度 空肠 隐窝深度 绒毛高度 隐窝深度 绒毛高度 回肠