气相色谱法测定盐酸平阳霉素原料及其制剂中的残留溶剂_韩彬.pdf

.333.文章编号：1001-8689(2023)03-0333-05收稿日期：2022-12-01作者简介：韩彬，女，生于1982年，高级工程师，主要从事抗生素药品检验及质量标准研究工作，E-mail:*通讯作者，E-mail:第一作者：韩彬，女，生于1982年，高级工程师，河北医科大学药学专业。毕业后于河北省药品检验研究院抗生素室工作至今，从事抗生素药品检验及质量标准研究工作，参与并完成中国药典 部分品种质量标准起草与复核工作及国家评价性抽验任务。通讯作者：高燕霞，主任药师，药物分析专业硕士。现任河北省药品医疗器械检验研究院副院长。在国家级核心期刊共发表学术论文117余篇。完成多项药典会、省科技厅及省局课题，主研课题获全国商业科技进步奖特等奖1项，河北省科技进步一等奖1项、二等奖1项，三等奖2项。气相色谱法测定盐酸平阳霉素原料及其制剂中的残留溶剂韩彬 徐艳梅 周玉岩 李佳蕊 高燕霞*(河北省药品医疗器械检验研究院，石家庄 050021)摘要：目的 建立顶空进样-气相色谱法测定盐酸平阳霉素原料及其制剂中有机溶剂残留量，同时对国产样品质量现状进行评价。方法 采用气相色谱法，顶空进样；色谱柱为DB-624毛细管柱(60 m0.53 mm，3.0 m)，载气为高纯氮气，程序升温，氢火焰离子化检测器(FID)，进样口温度为200，检测器温度为 230，载气流速为 5.0 mL/min，分流比为 10:1，进样量1 mL。结果 盐酸平阳霉素原料中可检出甲醇、丙酮、异丙醇3种溶剂；应用经验证的新方法对征集到的原料进行测定，其中一厂家的3批产品批间差异非常小，提示其生产工艺稳定，另一厂家的产品检出的丙酮含量超出国家限定值范围。注射用盐酸平阳霉素中有机溶剂残留量远低于限度要求。结论 该方法操作简单、快速灵敏、结果准确，可通过对盐酸平阳霉素有机溶剂残留量的测定，对药品生产的工艺控制水平进行评估。建议我国药品生产企业在内控标准中增订残留溶剂检查项，并开展周期性地检验，及时发现生产中的质量波动情况；注射用盐酸平阳霉素采用冷冻干燥工艺生产，因而不需控制残留溶剂。关键词：盐酸平阳霉素；残留溶剂；质量分析；工艺控制中图分类号：R978.1 文献标志码：ADetermination of residual organic solvents in bleomycin A5 hydrochloride by GC HanBin,XuYan-mei,ZhouYu-yan,LiJia-rui,andGaoYan-xia(HebeiInstituteforDragandMedicalDeviceControl,Shijiazhuang050021)Abstract Objective Toestablishaheadspacesampling-gaschromatographymethodforthedeterminationofresidualorganicsolventsinbleomycinA5hydrochloride,andtoevaluatethequalitystatusofdomesticrawmaterialsandpowderforinjections.Methods Gaschromatographyandheadspaceinjectionwereused.ThechromatographiccolumnwasaDB-624capillarycolumn(60m0.53mm,3.0m)withhighpuritynitrogenascarriergas,temperatureprogrammed,hydrogenflameionizationdetector(FID),injectionporttemperatureof200,detector temperature of 中国抗生素杂志2023年3月第48卷第3期DOI:10.13461/ki.cja.007486.334.气相色谱法测定盐酸平阳霉素原料及其制剂中的残留溶剂 韩彬等盐酸平阳霉素，又名争光霉素是我国由平阳链霉菌发酵液中分离，并自主研发的抗肿瘤类抗生素1，制剂注射用盐酸平阳霉素为盐酸平阳霉素冻干品。临床上主要用于治疗唇癌、舌癌、齿痕癌和鼻咽癌等颈部鳞癌2，其主成分化学结构与博来霉素A5组分一致，但肺毒性低于博来霉素3，同时本品不抑制机体的免疫功能，无常用抗癌药物所引起的白细胞减少症状，且价格低廉，是优良的进口抗癌药物替代品种。1994年进入首批国家基本药物目录，现行质量标准收载于中国药典2020年版二部4。盐酸平阳霉素发酵液中伴生多种杂质5，生产过程需要多次提纯，其工艺的稳定性直接影响产品的质量。提纯中使用到的有机溶剂主要有甲醇、丙酮和异丙醇3种，然而现行质量标准中未对残留溶剂做出要求，检索近年文献，亦无相关报道。残留溶剂的评估是原料生产过程控制的重要环节。本文根据人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)的相关规定和中国药典2020年版四部通则 0861“残留溶剂测定法”的要求，采用气相色谱法测定盐酸平阳霉素原料中3种有机溶剂的残留量，进而评估盐酸平阳霉素原料的生产工艺稳定性，同时用建立的方法考察注射用盐酸平阳霉素中有机溶剂残留情况，为检查项目设置必要性提供数据支持。1 仪器与试剂1.1 仪器安捷伦7890B气相色谱仪；氢火焰离子化检测器(FID)；纯水氢气发生器(济南浩伟实验仪器有限公司)；SGK-2LB低噪空气泵(北京东方精华苑科技有限公司)；Open LBACDS Chem Station Edition工作站；德国梅特勒XS205电子分析天平。1.2 药品与试剂盐酸平阳霉素原料，厂家1，批号：Y190401、Y200901、Y200902；厂家2，批号：200322。注射用盐酸平阳霉素，厂家1，批号：190501、200501、200801、200901；厂家2，批号：20200424、20200519。水是实验室自制超纯水(电阻率18.2)；甲醇、丙酮、异丙醇均为色谱纯。2 方法与结果2.1 色谱条件采用Agilent DB-624毛细管色谱柱(60 m0.53 mm，3.0 m)；检测器为氢火焰离子化监测器(FID)；进样口温度为200；检测器温度为230；采用程序升温方式：起始柱温为40，维持2 min，以5/min的速率升温至100，维持8 min，再以20/min的速率升温至200，维持5 min；载气为高纯N2，柱流速为5 mL/min；顶空瓶平衡温度设定为70，顶空平衡时间30 min。2.2 溶液配制混合对照品贮备液：精密称取甲醇1.50 g、丙酮2.50 g、异丙醇2.50 g，分置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述3溶液各5 mL置同一50 mL量瓶中。用水稀释至刻度，摇匀，即得含甲醇、丙酮、异丙醇分别为3、5和5 mg/mL 的混合对照品贮备液。对照品溶液：精密量取混合对照品贮备液5 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取230,carriergasflowrateof5.0mL/min.Theshuntratiowas10:1,andtheinjectionvolumewas1mL.Results Threesolvents,methanol,acetoneandisopropanol,weredetectedintherawmaterialofBleomycinA5hydrochloride.Thenewverifiedmethodwasusedtodeterminethecollectedrawmaterials.Thedifferencebetweenthethreebatchesofproductsfromonemanufacturerwasverysmall,indicatingthattheproductionprocesswasstable.TheresidualamountoforganicsolventinbleomycinA5hydrochlorideforinjectionisfarbelowthelimitrequirement.Conclusion Themethodissimple,rapid,sensitive,andaccurate.ItcanbeusedtoevaluatetheprocesscontrollevelofdrugproductionbydeterminingtheresidualorganicsolventofbleomycinA5hydrochloride.ItissuggestedthatChinesedrug manufacturers should add residual solvent inspection items in the internal control standards,and carry out periodicinspectiontodiscoverthequalityfluctuationinproductionintime.ItisnotnecessarytocontroltheresidualsolventofbleomycinA5hydrochlorideforinjection,whichisproducedbyfreezedryingprocess.Key words BleomycinA5hydrochloride;Residualsolvent;Qualityanalysis;Process control.335.2 mL置顶空瓶中，密封，即得。供试品溶液：精密称取供试品0.2 g，置顶空瓶中，精密加入水2 mL溶解，密封，即得。2.3 专属性试验精密量取“2.2”项下混合对照品溶液、空白溶液(水)和供试品溶液，照“2.1”项下方法测定，记录色谱图(图1)。在该色谱条件下，出峰顺序依次为：甲醇(4.713 min)、丙酮(6.683 min)和异丙醇(6.896 min)，各色谱峰分离度均大于1.5；理论板数均大于50000，溶剂对样品测定无干扰，其它杂质峰对测定无干扰。2.4 检出限及定量限测定精密量取混合对照品溶液，逐级稀释，照“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱峰高并与信噪比(S/N)比较，当峰高约为10倍的S/N时，该供试品浓度即为定量限(LOQ)；当约为3倍的S/N时，即为检出限(LOD)。检测结果见表1。图1 专属性实验气相色谱图Fig.1 The GC chromatogramsA：混合对照，B：空白溶液，C：供试品；1：甲醇；2：丙酮；3：异丙醇4.5016.9236.706C3230282624225 10 15 20 25 B26.52625.52524.52423.52322.55 10 15 20 25 4.5011200100080060040020005 10 15 20 25 4.7136.8966.683A表1 定量限与检出限测定结果Tab.1 Determination results of LOQ and LOD被测组分LOQ/(g/mL)LOD/(g/mL)甲醇10.0593.0178丙酮1.5050.451异丙醇5.0041.5012.5 线性关系考察精密量取混合对照品贮备液各0.1、0.5、1、2和5 mL分别置于10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成系列标准曲线混合对照测试溶液。精密量取2 mL置顶空瓶中，密封，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积。以溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，分别得到甲醇、丙酮、异丙醇的标准曲线线性回归方程及线性范围，结果见表2。表2 线性方程和线性范围Tab.2 Linear regresstion equations and their concentration range被测组分回归方程r(n=5)线性范围/(g/mL)甲醇y=1.3654x-3.19230.999630.1781508.9丙