双酚AF经口亚急性染毒对小鼠糖脂代谢的影响_郭承熙.pdf

工业卫生与职业病2023 年 3 月第 49 卷第 2 期Ind Hlth&Occup Dis，Mar 2023，Vol.49，No.2专题研究双酚 AF 经口亚急性染毒对小鼠糖脂代谢的影响郭承熙1，卢奕1，谭韵仪1，刘慧伶1，姜宇轩1，屈雅娟1，马书恒1，贺气志2（长沙医学院第一临床学院，湖南 410219；2.长沙医学院基础医学院，湖南 410219）【摘要】目的探究双酚AF（BPAF）亚急性毒性对小鼠糖脂代谢影响。方法50只SPF级6周龄健康雄性小鼠随机分为5组，对照组、溶液对照组以及100、200和400 mg/kg/d BPAF染毒组，经口染毒14 d，进行葡萄糖耐量试验（OGTT 实验），测定小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL），肝组织切片HE染色以及荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR-）、乙酰辅酶 A 羧化酶 1（ACC1）、脂肪酸合成酶（FAS）、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（PERCK）、叉头状转录因子（FoxO1）。结果BPAF染毒组与对照组和溶液对照组比较，BPAF染毒组体质量降低，TG（3.0670.581）、（2.8960.734）、（3.4980.698）mol/L 比 （2.3220.303）和（2.2840.253）mol/L、TC （1.0520.049）、（1.4880.219）、（1.1880.192）mol/L 比 （0.6450.077）和（0.7360.144）mol/L含量升高，PPAR-、ACC1、FAS、PERCK、FoxO1转录水平升高，且血清内TC、TG含量和肝脏内PPAR-、ACC1、FAS、FoxO1、PERCK 转录水平与 BPAF 染毒剂量呈正相关（F=19.971、7.713、45.06、4216.845、399.476、382.564、190.869、156.971，P0.05）。同时在肝脏切片观察到肝细胞胞质内出现大小不一的脂滴及大量炎细胞浸润；而200、400 mg/（kgd）剂量组与对照组和溶液对照组比较，肝/体比值、空腹血糖（FBG）（7.841.834）和（8.620.73）mol/L 比 （6.360.26）和（6.280.177）mol/L水平升高，糖耐量实验中30 min血糖、60 min血糖水平降低，且400 mg/（kgd）剂量组较200 mg/（kgd）剂量组明显（F=21.342、9.627、29.91、10.148，P0.05）。结论亚急性BPAF暴露严重干扰小鼠肝脏脂质代谢及葡萄糖稳态。【关键词】双酚AF；亚急性染毒；糖代谢酶；脂代谢酶；小鼠中图分类号 R114文献标识码 A文章编号 10007164（2023）02014506DOI：10.13692/ki.gywsyzyb.2023.02.012Effect of bisphenol AF transoral subacute infection on glycolipidmetabolism in mouse liverGUO Cheng-xi*，LU Yi*，TAN Yun-yi*，LIU Hui-ling*，JIANG Yu-xuan*，QU Ya-juan*，MA Shu-heng*，HE Qi-zhi*First Clinical College of Changsha Medical College，Hunan，410219，China【Abstract】ObjectiveTo investigate the effect of subacute toxicity of bisphenol AF（BPAF）on glycolipidmetabolism in mice.MethodsA total of 50 SPF male mice aged 6 weeks were randomly divided into five groups：thecontrol group，the solution control group，the 100，200 and 400 mg/kg/d BPAF infection groups.The glucose tolerancetest（OGTT experiment）was performed to determine the total serum cholesterol（TC），triglycerides（TG），low-densitylipoprotein（LDL），and high-density lipoprotein（HDL）of the mice.After infected by mouth for 14 days.The morphologyof liver tissues were detecetd by HE staining.And the expression levels of the peroxisome proliferation activatedreceptor（PPAR-），acetyl-CoA carboxylase 1（ACC1），fatty acid synthase（FAS），phosphoenol pyruvatecarboxykinase（PERCK），and fork-tipped transcription factor（FoxO1）RNAs were detected by fluorescence quantitativePCR.ResultsCompared with the control group and the solution control group，the body mass significantly reduced inthe BPAF infection group，and the levels of TG（3.0670.581），（2.8960.734），（3.4980.698）mol/L compare（2.3220.303）and（2.2840.253）mol/L and TC （1.0520.049），（1.4880.219），（1.188 0.192）mol/Lcompare（0.6450.077）and（0.7360.144）mol/Lsignificantly elevated.In addtion，the PPAR-，ACC1，FAS，PERCK，FoxO1 transcriptional levels significantly elevated.Notablely，the intraseral TC，TG，and intrahepatic PPAR-，基金项目作者简介通信作者湖南省自然科学基金项目（2019jj50693）；2021 年国家级大学生创新创业训练计划（20210823022）；2021 年国家级大学生创新创业训练计划（202110823010）；湖南省大学生创新创业训练计划（S202110823061）郭承熙（2002-），男，在读本科生。贺气志，E-mail：hht_ 145工业卫生与职业病2023 年 3 月第 49 卷第 2 期Ind Hlth&Occup Dis，Mar 2023，Vol.49，No.2双酚AF（BPAF）是近年来较受关注的含氟有机物，目前作为双酚 A（bisphenol A，BPA）的替代物用于生产电子设备、氟化橡胶等1。基于CSOIL 模型的初步 BPAF 暴露评估，随着工厂的距离增加，土壤内 BPAF的沉积量逐渐降低，且广泛存在于水源、灰尘等环境介质甚至存在于人类的尿液、血液、母乳中2-3。尿液中BPAF水平与二型糖尿病以及妊娠期正常体质量的妊娠期糖尿病的风险相关4-5。BPAF及其类似物具有神经毒性、生殖和发育毒性、潜在的致癌性等，由于BPAF中的CF3基团比BPA中的CH3基团具有更强的活性，所以BPAF在内分泌干扰方面相对于 BPA 表现出更强的毒性效应3。动物实验显示，围产期暴露 BPAF会干扰子代小鼠葡萄糖稳态，但子代雄性小鼠并未出现脂质代谢异常6-7。近年来我国生产 BPAF的工厂也越来越多，但关于 BPAF干扰糖脂代谢方面相对较少，探究亚急性 BPAF经口染毒状态下对于小鼠肝脏功能的影响具有现实意义，通过此次研究为阐明亚急性BPAF经口染毒下肝组织内糖脂代谢紊乱发生提供一定实验依据。1材料与方法1.1材料1.1.1主要仪器与试剂BPAF（湖北云镁科技有限公司，批号 20210326），玉米油（上海福临门食品有限公司），苏木精-伊红染色液（北京普利莱基因技术有限公司）甘油三酯试剂盒（TG）（20211015），总胆固醇（TC）试剂盒（20210822），低密度脂蛋白试剂盒（LDL）（20210907），高密度脂蛋白试剂盒（HDL）（20210907）购于南京建成生物工程研究所，RNA 提取试剂盒（B618583，生工生物工程股份有限公司），反转录试剂盒（RK20428-100T，武汉爱博泰克生物技术公司），荧光定量 PCR 试剂盒（RK21204，武汉爱博泰克生物技术公司），酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific公司），光学显微镜（日本 Nikon Eclips 公司），实时荧光定量聚合酶链式反应仪（美国 Thermo Fisher Scientific公司），血糖仪（江苏鱼跃医疗设备股份有限公司）。1.1.2实验动物SPF级昆明种6周龄雄性小鼠50只，购于长沙斯莱克有限公司（生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004）。小鼠在恒温 （231）和恒湿（555）%条件下饲养，严格遵循12 h/12 h明暗周期。为减少 BPAF暴露，使用聚苯乙烯鼠笼饲养动物，小鼠可自由饮水和进食。1.2方法1.2.1动物分组和染毒将 400 mg/kg作为本实验的最高剂量，100 mg/kg作为最低剂量。将50只6周龄的雄性小鼠随机分为对照组、溶液对照组及3个 BPAF 染 毒 组。将 BPAF 用 玉 米 油 溶 解，即BPAF染毒浓度分别为 100、200、400 mg/kg，而对照组和溶液对照组每日分别用生理盐水、玉米油灌胃处理，每日灌胃量为0.1 ml，连续染毒14 d，在实验前后称量小鼠体质量。1.2.2葡萄糖耐量实验小鼠处死前一天禁食12 h，先对小鼠进行剪尾取血，使用血糖仪试纸法测定小鼠的空腹血糖值（FBG）；再灌胃给于葡萄糖（2 g/kg），分别测定给于葡萄糖后30、60、120 min时的小鼠血糖值。1.2.3标本采集和血清指标测定糖耐量实验后对小鼠进行眼眶取血，室温放置3 min后，4 000 r/min离心 20 min，离心半径为 17.5 cm，使用移液枪分离出小鼠血清；根据试剂盒说明书步骤立即使用酶标仪检测 TC、TG、HDL、LDL4项指标。颈椎脱臼法处死小鼠，立即取出完整肝组织，称重。剪取一部分肝脏用生理盐水冲洗后置于 4%多聚甲醛固定，另一部分迅速放入-80冰箱中保存，用于对肝组织进行RT-PCR实验。1.2.4肝脏切片制备将放置于甲醛内的肝组织ACC1，FAS，FoxO1，and PERCK transcriptional levels were positively correlated with BPAF doses（F=19.971，7.713，45.06），4216.845、399.476、382.564、190.869、156.971，P0.05）.Additionally，lipid droplets of varying sizes and a largenumber of inflammatory cell infiltrations were observed in liver slices.The hepatic/body ratio and fasting blood glucose（FBG）（7.841.834）and（8.6