特医食品中VC检测关键控制点及稳定性研究_范春婷.pdf

食品工业 2023 年第44卷第 1 期 142 研究探讨特医食品中VC检测关键控制点及稳定性研究范春婷#，殷耀#，张萍，陆慧媛*，张晓燕，沈伟健南京海关动植物与食品检测中心（南京 210019）摘要根据特殊医学用途配方食品的基质特殊性,确定其维生素C检测的关键控制点,优化特医食品中维生素C的高效液相色谱检测方法,并考察特医液态产品中维生素C的稳定性。在前处理过程增加蛋白的沉淀步骤,对蛋白沉淀试剂种类、用量进行研究;对特医液态产品进行稳定性试验,以考其维生素C的稳定性。结果显示液态和固态产品样品前处理时分别加入2 mL和0.5 mL的200 g/L乙酸锌溶液对蛋白沉淀效果最佳;优化后的方法对不同基质特医食品适用性良好,准确度高。对液态产品进行稳定性测试发现,加速、长期、高温40、高温60、不透光包装光照、透光包装光照和使用中稳定性试验中维生素C衰减率分别为30.6%80.3%,30.0%78.4%,12.1%18.2%,36.4%43.6%,7.00%,12.55%14.67%和18.1%19.0%。高温、光照及空气接触均会造成维生素C的大量衰减;用高纯氮气将样品容器中的空气排空,并且采用不透明避光材料包装更有利于保持特医食品中维生素C的稳定性。关键词特殊医学用途配方食品;高效液相色谱法;维生素C检测关键控制点;稳定性Critical Control Points and Stability Study of VC Detection in Food for Special Medical PurposesFAN Chunting#,YIN Yao#,ZHANG Ping,LU Huiyuan*,ZHANG Xiaoyan,SHEN WeijianAnimal,Plant and Food Inspection Center,Nanjing Customs(Nanjing 210019)Abstract According to the matrix particularity of food for special medical purposes,the critical control points of vitamin C detection were determined,the high-performance liquid chromatography detection method of vitamin C was optimized,and the stability of vitamin C in liquid products of food for special medical purposes was investigated.The protein precipitation step was added in the pretreatment process,and the type and dosage of protein precipitation reagents were studied;The stability test was carried out on the liquid products to investigate the stability of vitamin C.The results showed that adding 2 and 0.5 mL of 200 g/L zinc acetate solution to the liquid and solid products samples respectively had the best effect on protein precipitation;The optimized method had good applicability and high accuracy for it with different matrices.The stability test of liquid products found that the decay rate of vitamin C in the accelerated,long-term,high temperature 40,high temperature 60,opaque packaging lighting,transparent packaging lighting and in-use stability tests were 30.6%-80.3%,30.0%-78.4%,12.1%-18.2%,36.4%-43.6%,7.00%,12.55%-14.67%and 18.1%-19.0%.High temperature,light and air contact will cause a large amount of attenuation of vitamin C.Evacuate the air in the sample container with high-purity nitrogen,and use opaque light-proof material packaging to maintain the stability of vitamin C in Food for Special Medical Purposes.Keywords food for special medical purposes(FSMP);high performance liquid chromatography;the critical control points of vitamin C detection;stability维生素C（Vitamin C，VC）作为特殊医学用途配方食品（Food for Special Medical Purposes，FSMP）（以下简称特医食品）中重要的营养元素，具有促进抗体形成、促进铁吸收、清除自由基等功能1。但因其对光、热、氧等极不稳定的特性2，使得快速、准确测定特医产品中VC的含量成为行业难点。根据现行国家标准3，特医食品中VC的检测方法GB 5413.1820104存在前处理过程过滤困难、滤液不澄清等缺点5。目前，VC检测方法还有二氯靛酚滴定法6-7、紫外分光光度法8-10和高效液相色谱法11-12。GB 5009.86201613包含了除荧光法之外的3种方法，但此标准适用范围也不包含特医食品，且前处理过程因特医食品富含蛋白质的特性，影响定量。食品及药品中VC的稳定性一直备受关注14-17，但目前未见关于特医食品尤其是特医食品液态产品中VC稳定性的研究。因此，研究并掌握特医食品中VC的降解规律，Behavior,2014,123:136-141.19 ARCHER J.Testosterone and human aggression:An evaluation of the challenge hypothesisJ.Neuroscience&Biobehavioral Reviews,2006,30(3):319-345.20 陈燃,李进华,朱勇,等.雄性黄山短尾猴攻击行为和粪便睾酮水平季节性变化J.动物学报,2008(3):393-398.21 刘金婷,刘思铭,曲路静,等.睾酮与人类社会行为J.心理科学进展,2013,21(11):1956-1966.143 研究探讨食品工业 2023 年第44卷第 1 期找到可有效保持其稳定的方法成为特医食品研发、生产过程中的一个重要环节。此次研究对GB 5009.86201613的液相色谱法进行优化，将蛋白沉淀作为前处理的关键控制点，建立回收率稳定且更适于特医食品VC的测定方法；并对特医食品液态产品中的VC进行稳定性考察，为特医食品中VC的检测和研发提供技术保障及参考依据。1材料与方法1.1仪器与试剂Agilent1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；SQP Quintix224-1 cn电子天平（德国赛多利斯公司）；Sigma2-16K台式冷冻离心机（德国Sigma公司）。维生素C标准品（纯度99.98%，Sigma Aldrich）；磷酸、偏磷酸、乙酸锌、磷酸二氢钾，均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）；甲醇，色谱纯（美国 默克公司）。所有特医食品样品均来源于南京海关动植物与食品检测中心送检的委托样品。1.2试验方法1.2.1溶液配制维生素C标准溶液配制（现配现用）：称取0.01 g（精确至0.000 1 g）维生素C标准品于10 mL棕色容量瓶中，用偏磷酸溶液（20 g/L）溶解并定容。偏磷酸溶液：称取20 g（精确至0.1 g）偏磷酸，溶于水并稀释至1 L。200 g/L乙酸锌溶液：称取200 g（精确至0.1 g）乙酸锌，加入水溶解至1 L。1.2.2样品前处理称取2 g（精确至0.001 g）样品于50 mL棕色容量瓶中，加入1 mL 200 g/L乙酸锌溶液，加入20 g/L偏磷酸溶液震摇溶解并定容。摇匀，全部转移至50 mL离心管中，超声提取5 min后，以8 000 r/min离心5 min，取上清液过0.45 m水相膜，待分析。1.2.3色谱条件仪器及色谱条件参考GB 5009.86201613第一法 高效液相色谱法6.4仪器参考条件。1.3特医食品中VC稳定性研究依据特殊医学用途配方食品稳定性研究要求（试行）（2017版）的相关规定，选取不同特医食品液态样品，对其贮藏过程中VC含量的稳定性进行跟踪试验。1.3.1加速、长期和影响因素试验将样品分别存放于不同药品稳定性试验箱中（已通过相应温湿度检定），进行加速试验和长期试验，温、湿度分别为302，Hr 60%5%和252，Hr 60%10%。影响因素考察高温和高湿条件，条件分别为40，60 和光照4 500 Lx500 Lx。加速试验于第0，第1，第2，第3，第4和第5个月取出检测，长期试验于第0，第3，第6，第9，第12和第15个月取出检测，影响因素于第5天和第10天取出检测。1.3.2使用中稳定性试验将样品开封后，放置1 min，盖上盖子分别置于48 或252 条件下存放24 h，然后检测。1.4数据处理检测数据、色谱图、标准曲线图采用液相色谱仪自带工作站的数据分析软件处理，表格及图像数据统计分析用Excel 2019及Origin 8.5处理。2结果与讨论2.1维生素C标准物质分析参照GB 5009.86201613第一法，采用液相色谱仪对维生素C标准溶液进行分析，结果显示，目标物在8.4 min出峰，峰形尖锐，总分析时长13 min，在0.550 g/mL质量浓度范围内线性关系良好，回归方程为Y=88.704 98X，相关系数0.999 96（详见图1）。按3倍信噪比确定此方法检出限为0.5 mg/100 g，10倍信噪比确定定量限为2 mg/100 g。图1维生素C液相色谱图及标准曲线2.2蛋白沉淀剂的选择拟在GB 5009.86201613第一法的基础上，增加蛋白沉淀步骤。常用的蛋白沉淀剂包括金属盐、有机溶剂等18。其中，乙醇可以使蛋白质和溶剂分子之间的相互作用减弱，使蛋白质发生聚集而沉淀19；乙酸锌可以通过降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出20。研究比较无水乙醇和乙酸锌对样品中蛋白质的沉淀效果。结果显示，无水乙醇含量达50%时沉淀效果较好，但此时色谱峰变宽，峰形差（详见#共同第一作者；*通信作者；基金项目：南京海关科技计划（2020KJ21）食品工业 2023 年第44卷第 1 期 144 研究探讨图2a），且回收率仅70%左右，经分析可能是提取液中较高含量的乙醇使VC在色谱柱上的保留性变差导致的；而乙酸锌既可以很好地沉淀蛋白，又不会影响VC在色谱柱上的保留性，色谱峰对称且尖锐（图2b）。图2样品及维生素C标准溶液色谱图基于上述结果，对乙酸锌的最佳使用量进行摸索。固态基质样品分别加入0.2，0.4和0.8 g乙酸锌，