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探讨新发T1DM并DKA儿童免疫功能状态分析_周斌.pdf
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探讨 T1DM DKA 儿童 免疫 功能 状态 分析 周斌
江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jiangxi Medical Journal,November 2022,Vol 57,No11摘要:目的通过观察新发1型糖尿病(Type 1 diabetes mellitus,T1DM)并酮症酸中毒(Diabetic ketoacidosis,DKA)儿童的体液免疫及细胞免疫水平,探讨其免疫状态。方法选取我院住院治疗的新发T1DM并DKA儿童40例为观察组,健康儿童20例为对照组,并测定其免疫球蛋白、细胞因子的水平和淋巴细胞亚群的细胞数与百分数。结果(1)观察组IgA水平较对照组显著性增高(P0.05);IgE、IgG、IgM水平组间差异无统计学意义;(2)观察组IL-1B、IL8、IFN-水平较对照组显著性增高(P0.05);IL2R、IL6、IL10、IL17、TNF水平组间差异无统计学意义;(3)观察组B淋巴细胞及CD4+CD8+双阳性T淋巴细胞较对照组显著性增高(P0.05),NK细胞数较对照显著性降低(P0.05);总T淋巴细胞、T4淋巴细胞、T8淋巴细胞及T4/T8组间差异无统计学意义;结论新发T1DM并DKA儿童存在体液免疫功能异常,部分炎症因子水平增高,并存在B淋巴细胞与T淋巴细胞的双重功能异常,淋巴细胞亚群功能紊乱可能是导致儿童T1DM的重要因素。关键词:1型糖尿病;酮症酸中毒;免疫球蛋白;细胞因子;淋巴细胞亚群中图分类号:R725文献标识码:B文章编号:1006-2238(2022)11-1709-05DOI:10.3969/j.issn.1006-2238.2022.11.001Analysis of immune function status in children with new-onset T1DM and DKA ZHOU Bin1,YANG Yu1,LIU Zhiqiang2,etal.Jiangxi Provincial Childrens Hospital,The Affiliated Childrens Hospital of Nanchang Medical College,1.Department of En-docrinology,Genetics and Metabolism,2.Department of Laboratory,3.Department of Pediatrics,NANCHANG,330006,CHINA;4.School of Medicine,Jiangxi Medical College,Nanchang UniversityAbstract:Objective To investigate the immune status by observing the humoral and cellular immunity and cytokine levels inchildren with new-onset type 1 diabetes mellitus(T1DM)and ketoacidosis(DKA).Method 40 children with new-onset T1DM andDKA hospitalized in our hospital were selected as the observation group,and 20 healthy children were selected as the controlgroup.The levels of immunoglobulins,cytokines,and the number and percentage of lymphocyte subsets were determined.Results(1)The level of IgA in the observation group was significantly higher than that in the normal control group(P0.05);there was nostatistical difference in the levels of IgE,IgG and IgM between the groups;(2)the levels of IL-1B,IL8 and IFN-in the observa-tion group Compared with the normal control group,the levels of IL2R,IL6,IL10,IL17 and TNF were not significantly differentbetween groups;(3)B lymphocytes and CD4+CD8+double positive T lymphocytes in the observation group were higher than those inthe normal control group.Compared with the normal control group,the number of NK cells was significantly increased(P0.05),and the number of NK cells was significantly decreased(P0.05);there was no statistical difference between the total T lympho-cytes,T4 lymphocytes,T8 lymphocytes and T4/T8 groups;Conclusion Children with new-onset T1DM and DKA have abnormalhumoral immune function,increased levels of some inflammatory factors,and dual dysfunction of B lymphocytes and T lympho-cytes.The dysfunction of lymphocyte subsets may be an important factor leading to children with T1DM.Key words:Type 1 Diabetes Mellitus;Diabetic Ketoacidosis;Immunoglobulins;Cytokines;Lymphocyte Subsets探讨新发 T1DM 并 DKA 儿童免疫功能状态分析周斌1,4,杨玉1,刘志强2,谢理玲1,杨利1,徐晗3(江西省儿童医院,南昌医学院附属儿童医院 1.内分泌遗传代谢科;2.检验科;3.儿内科,南昌 330006;4.南昌大学江西医学院医学部,南昌 330000)基金项目:江西省省卫生健康委员会科技计划项目,编号202110102通信作者:徐晗 实验研究 儿 童1型 糖 尿 病(Type 1Diabetes Mellitus,T1DM)是儿童期最常见的慢性疾病之一,其发病率有逐年增加趋势,已成为全球最重要的公共卫生问题之一。2021年国际糖尿病联合会IDF发布了第十版 糖尿病地图 显示全球约有261万年轻T1DM患者(0.05),具有可比性。1.2实验室检查 观察组与对照组儿童均抽取清晨空腹外周静脉血5ml.(1)通过免疫比浊法使用全自动生化分析仪检测两组儿童的外周血中的免疫球蛋白(IgM、IgE、IgA、IgG)的浓度。仪器及试剂使用FACS Canto流式细胞仪(美国BD公司),TD5A-WS离心机,美国赛默飞酶标仪,洗板机(安图实验仪 器 有 限 公 司),恒 温 孵 育 箱,PE anti-humanTCR(,Alexa Fluor488偶联anti-human IL-17AMcAb,PerCP anti-human CD3、CD8、CD4、CD16、CD56、CD19 McAb,Human IL-1B、IL2R、IL6、IL8、IL10、IL17、TNF、IFN-ELISA Kit。留取静脉血1ml放入普通管采集、离心并分离后得到血清,放-80冰箱保存后,采用酶联免疫吸附法检测血清IL-1B、IL2R、IL6、IL8、IL10、IL17、TNF、IFN-的OD值,并根据试剂盒步骤制作标准曲线,得到公式后,将OD值转化为的浓度值后汇总进行数据统计。使用淋巴细胞分离液从肝素抗凝的2 mL外周血标本中提取单个核细胞(PBMCs)悬浮液后5,再使用胎牛血清培养液将细胞密度调整为2106/mL,取其中细胞悬液加入豆蔻酰佛波醇乙酯、离子霉素及莫能菌素吹打混匀细胞培养箱内培养5 h。收集培养后细胞于流式上样管中离心洗涤后再悬浮后待检测。设立阴性对照并同时设立阳性对照组后,分别加入Per-CP anti-human CD19、CD3、CD8、CD4、CD16、CD56等淋巴细胞表面抗体并染色后进行流式细胞仪检测;最后得到原始数据导入FACSDiva软件进行数据分析。1.3统计学分析 数据整理核对后采用SPSS 23.0统计软件进行统计分析。计数资料采用X2检验。计量资料采用(xs)表示,KolmogorovSmirnov检验符合正态性分布,组间采用独立样本t检验,=0.05为检验水准。2结果2.1观察组体液免疫水平 观察组IgA水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);观察组IgE、IgG、IgM水平与对照组比较无统计学差异(P0.05)。见表1。表 1 观察组与对照组免疫球蛋白水平的比较(xs)2.2观察组细胞因子水平 观察组IL-1B、IL8、IFN-水平均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),观察组IL2R、IL6、IL10、IL17、TNF水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。见表2。表 2 观察组与对照组细胞因子水平的比较(xs)2.3观察组淋巴细胞亚群水平 观察组B淋巴细胞数、B淋巴细胞百分数、CD4+CD8+双阳性T淋巴细胞数、CD4+CD8+双阳性T淋巴细胞百分数、NK细胞数、NK细胞百分数与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),其中观察组B淋巴细胞数、B淋巴细胞百分数、CD4+CD8+双阳性T淋巴细胞数、CD4+组别nIgA(g/L)IgE(IU/mL)IgM(g/L)IgG(g/L)观察组402.360.85104.0917.681.530.768.62.38对照组201.850.4996.0449.321.771.079.634.5t2.4790.4251.0021.16P0.01610.6710.32070.2509组别病例组n=40对照组n=20tPIL-1B(Pg/mL)29.533.343.942.953.400.00IL2R(u/mL)371.31219.27466.52243.51.530.13IL-6(Pg/mL)13.0918.336.453.561.590.11IL8(Pg/mL)1455.49237.2136.4522.2326.580.00IL-10(Pg/mL)16.7512.3211.307.721.810.07IL-17(Pg/mL)14.7114.6410.329.981.210.23TNF-(Pg/mL)2.011.582.652.331.260.21IFN-(Pg/mL)11.456.657.653.652.380.021710江西医药2022年11月 第57卷 第11期Jiangxi Medical Journal,November 2022,Vol 57,No11CD8+双阳性T淋巴细胞百分数为增高表现,NK细胞数、NK细胞百分数为降低表现;观察组的总T淋巴细胞数、总T淋巴细胞数百分数、T4淋巴细胞数、T4淋巴细胞数百分数、T8淋巴细胞数、T8淋巴细胞数百分数及T4/T8与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。

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