四种消毒剂对猪圆环Ⅱ型病毒核酸降解效果研究_李博.pdf

Hunan Animal Science and Veterinary Medicine,No.6,2022.（Total No.232）2022 年第 6 期（总第 232 期）兽医兽药doi:10.3969/j.issn.1006-4907.2022.06.005四种消毒剂对猪圆环型病毒核酸降解效果研究李 博，李仁祥，黄荣珍，王贵平，刘自逵（湖南农业大学 动物医学院，湖南 长沙 410128）摘要：为了评估进口过硫酸氢钾复合物粉(A)、国产过硫酸氢钾复合物粉(B)、烧碱(C)、戊二醛(D)在不同场景对猪圆环型病毒核酸降解差异性，将病毒液与粪便残渣混合后分别涂抹在室外车辆轮胎（场景1）、室外露天地面（场景 2）、室内地面（场景 3）、室内地面尿液中（场景 4）。室外组按照当时室外温度进场操作。室内组设置三个温度（4、25、37）。上述 4个场景分别在不同时间点取样，用QPCR 检测病毒核酸相对含量。结 果发现，在消毒剂消杀后，PCV2 核酸转阴时间：场景 1，消毒剂 A、B(7h)、消毒剂 D(5 h)；场景 2，消毒剂 A、B、D(7h)；场景 3，消毒剂 A(5h)、消毒剂 B（7h）；消毒剂D(5h)；场景 4，消毒剂 A(3h)、消毒剂 B(3h)、消毒剂 C(7h)、消毒剂 D(3 h)。效果较好的消毒剂（推荐）：场景 1用 D 消毒剂；场景 2用 A消毒 剂；场景 3中春秋季用 A消毒剂，夏季用 D 消毒剂；场景 4中用 B消毒剂。关键词：消毒剂；圆环病毒；核酸降解；对比试验中图分类号：S859.799文献标识码：B文章编号：1006-4907（2022）06-0011-05Study on Degradation Effect of Four Disinfectants on Porcine Circovirus Virus Nucleic AcidLi Bo,Li Ren-xiang，Huang Rong-zhen,Wang Gui-ping*,LIU Zi-kui(Veterinary Medicine college,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,PRC)Abstract:A In order to evaluate the difference of nucleic acid degradation of porcine circovirus type II by imported potassium persulfate complex powder(A),domestic potassiumpersulfate complexpowder(B),caustic soda(C),and glutaraldehyde(D)in different scenarios,porcine circovirus type II virus liq-uid and fecal residue were mixed and smeared respectively in outdoor vehicle tires(Scenario 1),outdoor ground(Scenario 2),indoor ground(Scenario 3),and indoor ground urine(Scenario 4).The outdoor groups shall enter the site for operation according to the outdoor temperature at that time.The indoorgroups were set with three temperatures,namely 4,25 and 37 .The above four scenarios were sampled at different time points,and the relativecontent of viral nucleic acid was detected by QPCR.The results showed that after the disinfectant disinfection and sterilization,the time of PCV2nucleic acid turning negative:Scenario 1,disinfectant A,B(7 h),disinfectant D(5 h);Scenario2:Disinfectants A,B,(7 h);Scenario3,disinfectantA(5h),disinfectant B(7 h);Disinfectant D(5h);Scenario4,disinfectant A(3h),disinfectant B(3 h),disinfectant C(7 h),disinfectant D(3h).Disinfectant with good effect(recommended):glutaraldehyde is used for disinfection in Scenario1;Scene 2:Use imported potassiumpersulfate com-plexpowder for disinfection;In Scenario3,in springand autumn,the imported potassiumpersulfate complexpowder is used for disinfection,and in sum-mer,glutaraldehyde is used for disinfection;In scenario4,domestic potassiumpersulfate complexpowder was used for disinfection.Key words:Disinfectant；Porcine circovirus；Nucleic acid degradation作者简介：李博(1996)，男，河南南阳人，在读硕士研究生，研究方向：猪疫病诊断与防控，E-mail:。通信作者：王贵平(1973)，男，湖北咸宁人，副教授，研究方向：动物传染病诊断与防控，E-mail:。2021 年邵阳市春防 O 型口蹄疫免疫效果总体不容乐观，10 个县市区中仅隆回县达到国家标准，新邵县、城步苗族自治县、大祥区、双清区、北塔区这 5 个县市区的抗体合格率甚至在 50%以下。出现这一现象的主要原因是基层防疫力量匮乏，从而不利于口蹄疫防疫工作的开展。同时，这些基层防疫员大多自身的技术水平也不过关、不过硬，在免疫程序的优化和免疫技术的指导上也存在一些欠缺。规模场和散养户的 O 型口蹄疫抗体水平的比对数据发现，两者的抗体合格率相近，其中 2019 年和 2020 年抗体合格率均高于 80%。说明散养户的免疫程序基本合理，免疫方法基本正确，基层散养户的知识水平和技术水平正在稳步提升。参考文献:1曹龙龙，刘照虎，孟凡亮，等.2017-2018 年山东省猪口蹄疫免疫效果评估J中国动物检疫，2019,36(12):12-16.2陈溥言.兽医传染病学M.第 5 版.北京:中国农业出版社,2006:73.3邱杨，赵丽，卢小雨，等.五种动物疫病诊断方法研究进展J.动物医学进展，2012，33（12）：156-160.4张怀宇，范云峰，邹兴启，等.20032008 年世界口蹄疫流行分布与分析J.检验检疫学刊，2009（2）：49-50.5朱文钏，孔繁德，林祥梅，等.口蹄疫检测技术的研究进展与应用J.经济动物学报，2009，13（3）：171-177.6 叶润全，吕敏芝.猪群口蹄疫免疫效果监测分析J.黑龙江畜牧兽医，2013（11）：121-122.7 熊胜利，龙清孟，杨昌芳.规模场猪 O 型口蹄疫春秋两防免疫抗体监测及野毒检测J.养殖与饲料，2014（5）：15-17.收稿日期：2022-08-2411Hunan Animal Science and Veterinary Medicine,No.6,2022.（Total No.232）2022 年第 6 期（总第 232 期）兽医兽药1 前言猪圆环病毒（PCV）是动物无囊膜病毒，最早在20 世纪 90 年代初从患有断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪中分离到的1-3，可引起多种疾病感染1-3。PCV2 暴发和蔓延，给全球养殖业造成了重大经济损失。生物安全防控是养殖场防控传染病第一道防线。当前猪传染病防控形势依然复杂严峻，消毒在生物安全防控中具有不可替代的重要性。养殖场常用实时荧光定量 PCR 检测病毒核酸4，以此来评估消毒效果。多种消毒剂都可以加速病毒核酸降解，但在养殖场实际生产应用中能否有效降解核酸并使之转阴，还需进一步研究。本试验模拟养殖场 4 个生物安全防控场景，探究四种常见消毒剂对猪圆环型病毒核酸降解的差异性，为猪传染性疾病防控实践提供参考。2 材料与方法2.1 材料2.1.1 病料样品感染 PCV2 患猪内脏和粪便来自于湖南省株洲市某规模化猪场。2.1.2 试剂盒病毒 DNA/RNA 提取试剂盒（上海基灵生物科技有限公司；生产批号：NCE012，有效期：20230120）。猪圆环病毒型荧光 PCR 核酸检测试剂盒（湖南冠牧生物科技有限公司，生产批 号：2021004，有效期：20220713）。2.1.3 消毒剂进口过硫酸氢钾复合物粉(A）：推荐使用稀释浓度 1:200,朗盛化学（中国）有限 公司；国产过硫酸氢钾复合物粉（B），推荐使用稀释浓度 1:200，湖南加农正和生物技术有限公司，商品名:灭毒威甲；烧碱（C），推荐使用稀释浓度 1:50，国药集团化学试剂有限公司；浓戊二醛（D），推荐使用稀释浓度 1:50，湖南加 农正和生物技术有限公司。2.1.4磷酸盐缓冲液:准确称取磷酸氢二钠2.83g和磷酸二氢钾1.36g，加入蒸馏水1000mL，待完全溶解后，调pH至7.27.4，于121灭菌20min备用。2.1.5 戊二醛中和剂:准确称量吐温-80 3 mL和甘氨酸 1 g，溶于 97 mLPBS 中，121高压灭菌20 min，4保存备用5。2.1.6 过硫酸氢钾中和剂:准确称取硫代硫酸钠300 mg，溶于 100 mL 磷酸盐缓冲液中，121高压灭菌 20 min，4保存备用6。2.1.7 2%烧碱溶液中和剂配制:等当量的盐酸。2.1.8 试验时间和场地2021 年 12 月 20 日 2022 年 1 月 6 日在湖南农业大学兽医微生物免疫实验室（室内）和实验楼外地面（室外）进行。试验前和试验后对场地进行消毒处理，生物安全措施均完备。2.2 试验方法2.2.1 病毒液制备病毒液制备:取含有 PCV2 患猪肾脏 0.1 g装入1.5 mL 离心管中，加入 1 mL 生理盐水，充分研磨，反复冻融 3 次。10000 r/min，离心 5 min。取上清液用 QPCR 验证，分装保存备用。2.2.2 消毒剂配制进口过硫酸氢钾复合物粉和国产过硫酸氢钾复合物粉均按照 1:200 比例配制，戊二醛溶液按 1:50 比例配制，烧碱按照 1:50 比例配制。2.2.3 场景模拟（1）场景 1：室外车辆轮胎粪便：将病毒原液用生理盐水稀释后与猪粪便混合，使混合后的 PCV2核酸 CT值在 33-36，制备成低病毒含量样品。将其涂抹到室外车辆轮胎四处部位。（2）场景 2：模拟室外露天地面粪便：将病毒原液用生理盐水稀释后与猪粪便混合，使混合后的PCV2 核酸 CT值在 3336，制备成低病毒含量样品。将其涂抹 到室外露天地面上，分别涂抹四处部位。（3）场景 3：模拟室内地面粪便：分别在 4、25、37条件下，将病毒原液用生理盐水稀释后与猪粪便混合，使混合后的 PCV2 核酸 CT 值在33-36，制备 成低病毒含量样品。将其涂抹到四个