五味子乙素联合紫杉醇对非小...细胞上皮-间充质转化的作用_高庆霞.pdf

33(1):102Feb.,2023生物技术Biotechnology第 33 卷第 1 期2023 年 2 月 收稿日期:2021-10-09 基金资助:河北省中医药管理局科研项目(2021228)作者简介:高庆霞(1986-),女,河北省石家庄人,学士,主管护师,研究方向:肺癌中西医治疗等,E-mail:。通讯作者:陈素霞(1975-),女,河北省石家庄人,学士,副主任护师,研究方向:精神病学、内分泌腺及全身性疾病,发表核刊论文 10 篇,E-mail:。五味子乙素联合紫杉醇对非小细胞肺癌细胞上皮-间充质转化的作用高庆霞1,陈素霞1,王红叶2,高晓论3,杨月花4(1.石家庄市第八医院精三科,河北 石家庄 050308;2.磁县医院肿瘤科,河北 邯郸 056500;3.献县中医医院肿瘤科,河北 沧州 062200;4.大城县医院肿瘤科,河北 廊坊 065900)摘要:目的 探讨五味子乙素联合紫杉醇是否通过调控 PI3K/Akt/mTOR 信号通路抑制非小细胞肺癌细胞上皮-间充质转化。方法 选择人肺癌 A549 细胞,设 PBS 对照组、紫杉醇、五味子乙素、紫杉醇+五味子乙素组、紫杉醇+五味子乙素+PI3K 抑制剂 LY294002 组。采用 CCK-8 检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell 小室实验检测细胞侵袭能力;免疫荧光染色检测 N-cadherin、Vimentin 分布;qRT-PCR检测细胞 E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、Snail、Slug mRNA 表达;Western Blotting 检测 E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、Snail、Slug、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR 蛋白表达。结果与 PBS 对照组比较,紫杉醇+五味子乙素组细胞增殖率明显降低、细胞凋亡率明显增加(P 0.05),E-Cadherin mRNA 和蛋白表达量明显增加,N-Cadherin、Vimen-tin、Snail、Slug mRNA 和蛋白表达量明显降低(P 0.05)。与紫杉醇组、五味子乙素组比较,紫杉醇+五味子乙素+LY294002 组 N-Cadherin、Vimentin、Snail、Slug 及 p-PI3K、p-Akt、p-mTOR 蛋白表达量降低更明显(P 0.05)。结论 五味子乙素联合紫杉醇抑制 A549 细胞增殖、迁移和侵袭能力,作用机制可能为通过 PI3K/Akt/mTOR 调控上皮间充质转化有关。关键词:非小细胞肺癌;五味子乙素;迁移;侵袭;上皮间充质转化中图分类号:R734.2 文献标识码:A DOI:10.16519/ki.1004-311x.2023.01.0016Role of Schisandrin B combined with paclitaxel inhibits to epithelial-mesenchymaltransformation of non-small cell lung cancer cellsGAO Qing-xia1,CHEN Su-xia1,WANG Hong-ye2,GAO Xiao-lun3,YANG Yue-hua4(1.Department of Jing San,Shijiazhuang Eighth Hospital,Shijiazhuang 050308,China;2.Department of Oncology,County Hospital of Mag County,Handan 056500,China;3.Department of Oncology,Xian County Hospital of TraditionalChinese Medicine,Cangzhou 062200,China;4.Department of Oncology,Dacheng County Hospital,Langfang 065900,China)Abstract:ObjectiveTo investigate whether Schisandrin B combined with paclitaxel inhibits epithelial-mesenchymal trans-formation of non-small cell lung cancer cells by regulating PI3K/Akt/mTOR signal pathway.MethodHuman lung cancerA549 cells were selected and divided into PBS control group,paclitaxel,schisandrin B group,paclitaxel+schisandrin B group,paclitaxel+schisandrin B+PI3K inhibitor LY294002 group.CCK-8 was used to detect cell proliferation,flow cytometry wasused to analyze apoptosis and cell cycle,wound healing assay was used to detect cell migration,Transwell was used to detectcell invasion,and immunofluorescence staining was used to detect the distribution of N-cadherin and Vimentin.qRT-PCRwas performed to detect cell E-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,Snail,Slug mRNA expression;Western Blotting to detect E-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,Snail,Slug,p-PI3K,p-Akt,p-mTOR protein expression.ResultCompared with thePBS control group,cell proliferation was significantly decreased and apoptosis was significantly increased in the paclitaxel+pentosidine group(P 0.05),and E-Cadherin mRNA and protein expression was significantly increased,while N-Cadher-in,Vimentin,Snail,and Slug mRNA and protein expression were significantly decreased(P 0.05).N-Cadherin,Vimentin,Snail,Slug and p-PI3K,p-Akt,p-mTOR protein expression were reduced more significantly in the paclitaxel+pentosidine+LY294002 group compared with the paclitaxel and pentosidine groups(P 0.05).Conclusion The combination ofSchisandrin B and paclitaxel inhibited the proliferation,migration and invasion ability of A549 cells,and the mechanism of ac-1 期高庆霞,等:五味子乙素联合紫杉醇抑制非小细胞肺癌细胞上皮-间充质转化tion may be related to the regulation of epithelial mesenchymal transition through PI3K/Akt/mTOR.Keywords:non-small cell lung cancer;schisandrin B;migration;invasion;epithelial mesenchymal transition 肺癌是死亡率较高的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)约占所有肺癌病例的 85%90%,五年生存率为 15%17%1。在全球范围内,NSCLC 仍是导致患者死亡的首要病因,大多数患者首次确诊时已处于晚期2。目前接受手术切除术的 NSCLC 患者的癌症复发率约为 30%70%,其中大部分患者最终死于肿瘤细胞转移3。因此,迫切需要更有效的治疗策略来抑制癌细胞转移。上皮间充质转化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)是通过介导迁移、侵袭和抵抗细胞死亡信号而赋予癌细胞转移能力4。因此,鉴于 EMT 在转移中的重要性,抑制 EMT 过程可能作为潜在的抗 NSCLC 转移治疗药物。紫杉醇是临床最广泛使用的化疗药物之一,但紫杉醇治疗往往会出现一系列副作用如严重过敏、神经毒性等5。而五味子乙素具有良好的减毒增效作用,具有促进癌细胞凋亡、减轻炎症反应及组织水肿、改善微循环、抗氧化、扩张血管等作用6。但其降低紫杉醇治疗毒性进而影响 EMT 过程,抑制 NSCLC 癌细胞迁移报道鲜见。因此,笔者通过五味子乙素和/或紫杉醇干预 A549 细胞,探讨五味子乙素联合紫杉醇是否能在体外 A549 细胞中减弱迁移、侵袭行为,初探其潜在机制。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验材料人肺癌 A549 细胞,中科院上海细胞库;紫杉醇注射液,浙江天杭生物;五味子乙素(CAS 号:61281-37-6,质量分数98%),北京索莱宝生物科技有限公司。1.1.2 试剂CCK-8 试剂盒,上海碧云天生物;相关一抗 E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、Snail、Slug、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR,英国 Abcam 公司;抗兔 IgG(H+L),上海 Cell Signaling Technology 公司;RNATrizol Reagent,合 肥 博 美 生 物;TB GreenTMPremixEx TaqTM,北京宝日医生物;BCA 蛋白浓度测定试剂盒,上 海 碧 云 天 生 物;ECL 发 光 试 剂 盒,美国Affinity。1.1.3 仪器酶标仪(SpectraMAX Plus384),美谷分子仪器有限公司;倒置生物显微镜(DMI1),德国 LEICA 公司;台式低速离心机(TDZ4-WS),长沙湘仪离心机仪器有限公司;流式细胞仪(CytoFLEX),美国 Beckman公司;共聚焦显微镜(BA400Digital),麦克奥迪实业集团 有 限 公 司;实 时 荧 光 定 量(RT-PCR)仪(PIKORed 96),美国 ThermoFisher 仪器有限公司;电泳仪(JY200C),北京君意东方电泳设备有限公司。1.1.4 培养基RPMI-1640 培养基,北京索莱宝生物科技有限公司;10%胎牛血清,美国 Sigma。1.2 方法1.2.1 细胞培养非小细胞肺癌细胞系 A549 培养于 RPMI-1640培养基中(10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素、100g/mL 链霉素),37、5%CO2培养箱中培养。待细胞长至 70%80%后用胰蛋白酶消化后传代。设置实验组:PBS 对照组、紫杉醇(8 nmol/L)、五味子乙素(48 g/mL)、紫杉醇+五味子乙素组(8 nmol/L+48 g/mL)。PBS 对照组