外周血CD4-+_CD8-...病毒感染性腹泻诊治中的作用_沈阳.pdf

儿童保健/论著外周血 CD4+/CD8+T 细胞比值在儿童轮状病毒感染性腹泻诊治中的作用沈阳，郭永盛，黄冰，姚国华，邹映雪天津市儿童医院感染科 天津大学儿童医院感染科，天津 300070通信作者:郭永盛，Email:gys001001 摘要:目的检测轮状病毒感染性腹泻儿童外周血 CD4+、CD8+T 细胞水平，并探讨 CD4+/CD8+T 细胞比值对疾病的诊治作用。方法选取 2019 年 3 月2020 年 5 月在天津市儿童医院住院治疗的 154 例腹泻患儿为研究对象，根据粪便轮状病毒检测是否为阳性，将患儿分为非轮状病毒感染性腹泻组 73 例和轮状病毒感染性腹泻组 81 例;另选取同期在该院体检的 76 例健康体检儿童为健康对照组。采用流式细胞术检测外周血 CD4+、CD8+T 细胞水平;采用全自动生化分析仪检测血清中肌酸激酶同工酶 MB(CKMB)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)及羟丁酸脱氢酶(HBDH)水平;分析轮状病毒感染性腹泻患儿CD4+、CD8+、CD4+/CD8+T 细胞与心肌酶活性指标的相关性;分析外周血 CD4+、CD8+及 CD4+/CD8+T 细胞对儿童轮状病毒感染性腹泻的诊断价值。结果轮状病毒感染性腹泻组患儿外周血 CD4+、CD8+T 细胞水平(37.793.06)%、(19.972.16)%低于非轮状病毒感染性腹泻组(40.543.27)%、(23.382.35)%和健康对照组(42.363.13)%、(26.542.21)%，差异均有统计学意义(F=41.966、169.189，均 P0.05);非轮状病毒感染性腹泻组外周血 CD4+、CD8+T 细胞水平低于健康对照组，差异均有统计学意义(均 P0.05)。轮状病毒感染性腹泻组患儿 CD4+/CD8+T 细胞比值(2.060.21)、CKMB(48.791.84)U/L、CK(216.7140.23)U/L、LDH(181.1412.49)U/L 及 HBDH(198.4613.54)U/L 水平高于非轮状病毒感染性腹泻组 (1.790.19)、(23.781.96)U/L、(133.9529.72)U/L、(168.2713.97)U/L 及(142.8711.78)U/L 和健康对照组(1.560.21)、(18.461.92)U/L、(103.2120.84)U/L、(157.4314.86)U/L 及(129.8210.36)U/L，差异均有统计学意义(F=118.394、5 701.022、273.469、58.311 及 727.541，均 P0.05);非轮状病毒感染性腹泻组 CD4+/CD8+T 细胞比值、CKMB、CK、LDH 及 HBDH 水平高于健康对照组，差异均有统计学意义(均 P0.05)。轮状病毒感染性腹泻患儿 CD4+、CD8+T 细胞水平与 CKMB、CK、LDH 及 HBDH 均呈负相关关系(均 P0.05)，CD4+/CD8+T 细胞比值与 CKMB、CK、LDH 及 HBDH 均呈正相关关系(均 P0.05)。外周血 CD4+、CD8+及 CD4+/CD8+T 细胞诊断儿童轮状病毒感染性腹泻的曲线下面积(AUC)分别为 0.737、0.868 及 0.872，特异度分别为 54.8%、75.3%及 72.6%，灵敏度分别为81.5%、82.7%及 85.2%。结论轮状病毒感染性腹泻患儿细胞免疫功能明显紊乱，且外周血 CD4+/CD8+T 细胞比值对轮状病毒感染性腹泻可能具有一定的诊治作用。关键词:轮状病毒感染性腹泻;儿童;外周血;CD4+T 细胞;CD8+T 细胞;诊治中国图书分类号:442.2文献标识码:A文章编号:1001-4411(2023)03-0462-04;doi:10.19829/j.zgfybj.issn.10014411.2023.03.020轮状病毒具有较强的感染性，是秋、冬季儿童腹泻最常见的病原体1。当儿童感染轮状病毒后，肠道吸收和分泌能力会丧失平衡进而引起腹泻，且同时会对呼吸系统、中枢神经系统及消化系统等全身多处器官造成损害，甚至会增加病毒性心肌炎等疾病的发生风险23。其损伤机制尚不明确，但有报道45 表明，其发病可能与细胞免疫功能有关。但目前将 T细胞亚群用于轮状病毒感染性腹泻诊治的相关报道不多，因此本研究通过检测轮状病毒感染性腹泻、非轮状病毒感染性腹泻及健康儿童外周血 CD4+、CD8+及CD4+/CD8+T 细胞水平，探讨 CD4+/CD8+T 细胞比值对轮状病毒感染性腹泻的诊断价值，以期为疾病的诊断和治疗提供理论依据。1资料与方法1.1资料来源选取2019 年3 月2020 年5 月在天津市儿童医院住院治疗的 154 例腹泻患儿为研究对象，根据粪便轮状病毒检测是否为阳性，将患儿分为非轮状病毒感染性腹泻组 73 例和轮状病毒感染性腹泻组 81 例，其中非轮状病毒感染性腹泻组患儿年龄413 岁，平均(7.633.21)岁，男 38 例，女 35例;轮状病毒感染性腹泻组患儿年龄 412 岁，平均(7.873.52)岁，男 46 例，女 35 例;另选取同期在本院体检的 76 例健康体检儿童为健康对照组，年龄 4 13 岁，平均(7.363.22)岁，男 39 例，女37 例。3 组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义(P0.05)，具有可比性。纳入标准:轮状病毒感染性腹泻患儿均通过粪便标本轮状病毒检测确定为阳性，临床症状主要包括水样腹泻、呕吐及皮肤弹性差等脱水征，且伴有厌食、昏睡及精神萎靡;病例资料齐全者;经本院医学伦理委员会批准，所有研究对象家长均知情且自愿参加本研究。排除标准:近 2 周内有肠道感染者;伴有过敏性和免疫相关疾病者;有先天性心脏病或肝、肾及心肌类疾病者。1.2方法1.2.1主 要 试 剂 和 仪 器CD4 抗 体(货 号:264中国妇幼保健2023 年 2 月第 38 卷第 3 期Maternal and Child Health Care of China.February 2023，Vol.38，No.3251723)购自深圳市豪地华拓生物科技有限公司;CD8 抗体(货号:MAB0936)购自上海科敏生物科技有限公司。流式细胞仪(型号:BDFACSAria)购自美国 BD 公司;全自动生化分析仪(型号:AtellicaCH930)购自德国 SIEMENS 公司。1.2.2研究方法1.2.2.1样品采集和保存采集健康体检儿童体检当天和腹泻患儿入院第 2 天晨起空腹外周静脉血样，3 000 r/min离心 15 min 后收集血清，迅速置于80保存待测;密度梯度离心法获取单个核细胞。1.2.2.2外周血 CD4+和 CD8+T 细胞水平测定采用流式细胞术检测外周血 CD4+和 CD8+T 细胞水平。用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，分别放入2 个流式管中，加入 2 ml PBS 缓冲液，1 500 r/min离心 5 min，弃去上清，重复 3 次后控制细胞浓度在5105个/ml 左右。向流式管中分别加入 5 l CD4 抗体和 5 l CD8 抗体，混匀，避光室温孵育 30 min，洗涤后加 PBS 缓冲液重悬细胞，使用流式细胞仪检测处理好的标本，每份标本至少获取 10 000 个细胞进行分析。1.2.2.3外周血心肌酶活性指标测定采用全自动生化 分 析 仪 检 测 血 清 中 肌 酸 激 酶 同 工 酶 MB(CKMB)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)及羟丁酸脱氢酶(HBDH)水平，操作步骤严格按照仪器使用说明书进行。1.3统计学分析运用 SPSS 23.0 软件对数据进行统计学分析，计量资料符合正态分布，以(xs)表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用 SNKq 检验;采用 Pearson 法分析轮状病毒感染性腹泻患儿 CD4+、CD8+及 CD4+/CD8+T 细胞与心肌酶活性指标的相关性;采用受试者工作特征(OC)曲线分析外周血 CD4+、CD8+及 CD4+/CD8+T 细胞对轮状病毒感染性腹泻的诊断价值。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.13 组研究对象外周血 T 细胞亚群 CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平比较轮状病毒感染性腹泻组患儿外周血 CD4+、CD8+T 细胞水平低于非轮状病毒感染性腹泻组和健康对照组，非轮状病毒感染性腹泻组患儿外周血 CD4+、CD8+T 细胞水平低于健康对照组，差异均有统计学意义(均 P0.05)。轮状病毒感染性腹泻组患儿 CD4+/CD8+T 细胞比值高于非轮状病毒感染性腹泻组和健康对照组，非轮状病毒感染性腹泻组患儿 CD4+/CD8+T 细胞比值高于健康对照组，差异有统计学意义(P0.05)。见表 1。2.23 组研究对象心肌酶活性指标检测水平比较轮状病毒感染性腹泻组患儿 CKMB、CK、LDH及 HBDH 水平高于非轮状病毒感染性腹泻组和健康对照组，非轮状病毒感染性腹泻组患儿 CK MB、CK、LDH 及 HBDH 水平高于健康对照组，差异均有统计学意义(均 P0.05)。见表 2。表 13 组研究对象外周血 T 细胞亚群 CD4+、CD8+及 CD4+/CD8+水平比较(xs)组别例数CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+健康对照组7642.363.1326.542.211.560.21非轮状病毒感染性腹泻组7340.543.27a23.382.35a1.790.19a轮状病毒感染性腹泻组8137.793.06ab19.972.16ab2.060.21abF 值41.966169.189118.394P 值0.050.050.05注:a.与健康对照组比较，非轮状病毒感染性腹泻组 t=4.985、12.844 及12.184，轮状病毒感染性腹泻组 t=25.994、9.736 及21.719，均 P0.05;b.与非轮状病毒感染性腹泻组比较，t=7.648、13.351 及 11.606，均 P0.05。表 23 组研究对象心肌酶活性检测水平比较(xsU/L)组别例数CKMBCKLDHHBDH健康对照组7618.461.92103.2120.84157.4314.86129.8210.36非轮状病毒感染性腹泻组7323.781.96a133.9529.72a168.2713.97a142.8711.78a轮状病毒感染性腹泻组8148.791.84ab216.7140.23ab181.1412.49ab198.4613.54abF 值5 701.022273.46958.311727.541P 值0.050.050.050.05注:a.与健康对照组比较，非轮状病毒感染性腹泻组 t=24.098、140.980、8.414 及 31.879，轮状病毒感染性腹泻组 t=6.789、15.239、9.382 及50.639，均 P0.05;b.与非轮状病毒感染性腹泻组比较，t=115.038、23.003、8.186 及 40.583，均 P0.05。2.3轮状病毒感染性腹泻患儿 CD4+、CD8+及 CD4+/CD8+T 细胞与心肌酶活性指标的相关性Pearson 法364中国妇幼保健2023 年 2 月第 38 卷第 3 期Maternal and Child Health Care of China.February 2023，Vol.38，No.3分析结果显示，轮状病毒感染性腹泻患儿 CD4+、CD8+T 细胞水平与 CKMB、CK、LDH 及 HBDH 均呈负相关关系(均 P0.05)，CD4+/CD8+T 细胞比值与 CKMB、CK、LDH 及 HBDH 均呈正相关关系(均 P0.05)。见表 3。表 3轮状病毒感染性腹泻患儿 CD4+、CD8+及 CD4+/CD8+T 细胞与心肌酶活性指标的相关性指标统计值CKMBCKLDHHBDHCD4+r0.4730.5110.4920.497P0.050.050.050.05CD8+r0.504