动物医学进展,2023,44(2):30-35ProgressinVeterinaryMedicine新城疫病毒Mukteswar株反向遗传平台的建立收稿日期:2022-01-14基金项目:国家自然科学基金项目(31873018);国家现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-41-G13);湖北省自然科学基金重点类项目(2021CFA019);湖北省科技创新项目重大专项(2020ABA016);湖北省农业科技创新中心重大科技研发(2020-620-000-002-01)作者简介:魏家阳(1996-),女,湖南长沙人,硕士,主要从事新城疫病毒分子生物学研究。*通讯作者魏家阳1,2,李丽2,王国康2,徐英英2,曾哲2,罗青平2,邵华斌2,温国元2,商雨2*,潘兹书1*(1.武汉大学生命科学学院,湖北武汉430072;2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室,畜禽病原微生物学湖北重点实验室,湖北武汉430064)摘要:为了建立新城疫疫苗株Mukteswar株的反向遗传操作系统,根据Mukteswar株的基因序列设计了9对引物,扩增获得基因组片段,通过OverlapPCR和In-Fusion无缝克隆的技术,将9个片段拼接和插入至pACNR-T7中,获得了Mukteswar株全长cDNA克隆质粒pAC-Mukteswar。将其和3个辅助质粒(pVAX-NP、pVAX-P和pcDNA-L)共转染至预先感染了痘病毒vTF7-3的BHK-21细胞,成功拯救出重组病毒rMukteswar。对rMukteswar的生长曲线、最小致死剂量的平均致死时间(MDT)等生物学特性进行测定,结果显示rMukteswar具有和野生株相似的增殖特性和毒力。成功建立了新城疫疫苗株Mukteswar的反向遗传操作系统,为研发高效率表达外源病原体蛋白的新城疫载体疫苗奠定了基础。关键词:新城疫病毒;Mukteswar株;反向遗传操作系统中图分类号:S852.659.5文献标识码:A文章编号:1007-5038(2023)02-0030-06新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)是一种以禽类作为宿主的RNA病毒,其基因组为单股、负链、不分节段的RNA[1]。NDV按照毒力可以分为强毒株、中等毒力毒株和弱毒株。弱毒力毒株可在家禽体内有限复制,并能刺激系统免疫反应,可开发为活疫苗应用于新城疫的防控。随着反向遗传学技术的发展,体外操作NDV的基因组很容易实现,NDV被开发成载体应用于基因工程疫苗的研究。以NDV为载体开发基因工程疫苗有很多优势:①安全性高,NDV在宿主的细胞质内复制,且病毒的生活周期中不会出现DNA,因此,病毒的基因组与宿主基因组重组的概率极低;②生产成本低,NDV可在鸡胚内增殖很高的滴度;③免疫方式多样,可以采用滴鼻、点眼、喷雾和饮水等多种方式免疫;④免疫保护效果好,NDV可以刺激机体产生多种免疫反应,...
