2023年第45卷第2期ChinaPoultryVol.45，No.2.2023®预防兽医预防兽医鸭腺病毒鸭腺病毒3型Fiber-Fiber-2蛋白单克隆抗体的蛋白单克隆抗体的制备及初步应用制备及初步应用魏常青，史馨瑾，吕璐，刘英楠，谢振华，陈宗艳*，陈鸿军*（中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241）摘要：为进一步研究鸭腺病毒3型（DAdV-3）Fiber-2蛋白，研究通过PCR扩增fiber-2基因，构建pET32a-DAdV3-fiber2原核质粒，表达并纯化蛋白，以纯化的蛋白为免疫原，免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备抗Fiber-2单克隆抗体杂交瘤细胞，采用间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行鉴定，并用于DAdV-3Fiber-2杆状病毒表达产物的鉴定。结果显示：原核表达获得1.77mg/mLFiber-2蛋白，筛选获得2株阳性单克隆细胞株2E10E4和4F7F10，两株单克隆抗体均为IgG1型，轻链类型为κ；DAdV-3感染的LMH细胞中存在特异性荧光，免疫印迹试验确认在约59ku处出现特异性条带；采用制备的单克隆抗体确认了表达Fiber-2蛋白的重组杆状病毒。研究获得了针对DAdV-3Fiber-2蛋白的单克隆抗体，为深入探究Fiber-2在DAdV-3感染机制中的作用以及为建立DAdV-3抗原免疫测定技术奠定了基础。关键词：DAdV-3；Fiber-2；单克隆抗体中图分类号：S855.3文献标识码：A文章编号：1004-6364（2023）02-46-06收稿日期：2022-04-26；修回日期：2022-08-17基金项目：上海市自然科学基金项目（19ZR146880）作者简介：魏常青（1995-），女，博士研究生，研究方向为动物病毒学，E-mail：1014995917@qq.com*通讯作者：陈宗艳（1981-），女，博士，研究员，主要从事动物病原学研究，E-mail：zychen@shvri.ac.cn；陈鸿军（1979-），男，博士，研究员，主要从事非洲猪瘟感染生物学与免疫防控技术研究，E-mail：vetchj@shvri.ac.cndoi：10.16372/j.issn.1004-6364.2023.02.008PreparationandPreliminaryApplicationofMonoclonalAntibodyAgainstFiber-2ProteinofDuckAdenovirusType3WEIChangqing,SHIXinjin,LÜLu,LIUYingnan,XIEZhenhua,CHENZongyan*,CHENHongjun*（ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Shanghai200241）Abstract：TofutherstudyFiber-2protein,fiber-2genewasamplifiedbyPCR,andpET32a-DAdV3-fiber2prokaryoticplasmidwasconstructed,theproteinwasexpressedandpurifiedandusedtoimmunize6-week-agefemaleBALB/cmicetopre⁃paretheanti-Fiber-2monoclonalantibodyhybridomacellsandiden...
