血清游离DNA_ATM启动...鳞癌患者放射抗性的预测价值_章伟玲.pdf

东南大学学报(医学版)J Southeast Univ(Med Sci Edi)2023，Feb;42(1):116-124 收稿日期2022-10-28修回日期2022-11-22 基金项目南通市卫生和计划生育委员会科研课题(QA2019027)作者简介章伟玲(1983 )，女，江苏如皋人，副主任医师，医学硕士。E-mail:dunwei77731163 com 通信作者张羽E-mail:zayio9745132163 com 引文格式章伟玲，张璨，韩晴，等 血清游离 DNA ATM 启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌患者放射抗性的预测价值J 东南大学学报(医学版)，2023，42(1):116-124 论著 血清游离 DNA ATM 启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌患者放射抗性的预测价值章伟玲，张璨，韩晴，张羽(南通大学附属肿瘤医院 妇瘤科，江苏 南通226000)摘要目的:探讨血清游离 DNA(cfDNA)共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌(CSCC)患者放射抗性的预测价值。方法:选取 2016 年 3 月至 2020 年 7 月在本院完成调强放疗的 144 例局部晚期 CSCC 患者作为研究对象。采用定量甲基化特异性聚合酶链反应法检测血清 cfDNA ATM启动子甲基化水平，并收集随访数据。放疗完成 1 个月后根据实体瘤疗效评价标准评估患者治疗反应。结果:局部晚期 CSCC 患者治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平为 66 15%(51 28%，76 28%)，与主要临床特征无关(P 0 05)。抵抗组局部晚期 CSCC 患者治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平显著低于敏感组(P 0 001)。血清 cfDNA ATM 启动子甲基化预测局部晚期 CSCC 患者放射抗性的 OC 曲线下面积为 0 798(95%CI:0 723 0 873)。Logistic 回归分析显示，治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平是局部晚期 CSCC 患者放射抗性的独立预测因子(P 0 05)。预后分析显示血清 cfDNA ATM 启动子甲基化是局部晚期 CSCC 患者的独立有利预后因素(P 0 05)。局部晚期 CSCC 患者血清 cfDNA ATM 启动子甲基化高水平组术后无进展生存期、总生存期、远处无转移生存期和局部无进展生存期均显著优于低水平组(P 0 05)。结论:治疗前血清 cfDNA ATM 启动子甲基化状态可能是预测局部晚期 CSCC 患者放疗后预后的有用生物标志物。关键词血清游离 DNA;共济失调毛细血管扩张突变基因;甲基化;局部晚期宫颈鳞癌;调强放疗 中图分类号737 33 文献标志码A 文章编号1671-6264(2023)01-0116-09doi:10 3969/j issn 1671-6264 2023 01 017Value of ATM promoter methylation in serum cell-free DNA inpredicting radioresistance in patients with locally advancedcervical squamous cell carcinomaZHANG Weiling，ZHANG Can，HAN Qing，ZHANG Yu(Department of Gynecologic Oncology，Cancer Hospital Affiliated to Nantong University，Nantong 226000，China)AbstractObjective:To investigate the predictive value of serum cell-free DNA(cfDNA)ataxia-telangiectasiamutated gene(ATM)promoter methylation for radioresistance in patients with locally advanced cervical squamous611cell carcinoma(CSCC)Methods:A total of 144 patients with locally advanced CSCC who completed intensitymodulated radiotherapy in our hospital from March 2016 to July 2020 were selected as the research objects Quanti-tative methylation-specific polymerase chain reaction was used to detect the methylation level of ATM promoter inserum cfDNA，and follow-up data were collected One month after the completion of radiotherapy，the treatment re-sponse was evaluated according to response evaluation criteria in solid tumours esults:The serum cfDNA ATMpromoter methylation level in patients with locally advanced CSCC before treatment was 66 15%(51 28%，76.28%)，which was not related to the main clinical characteristics(P 0 05)The methylation level of ATMpromoter of cfDNA in the resistant group was significantly lower than that in the sensitive group before treatment(P 0 001)The area under the OC curve of serum cfDNA ATM promoter methylation in predicting radioresis-tance in patients with locally advanced CSCC was 0 798(95%CI:0 723 0 873)Logistic regression analysisshowed that serum cfDNA ATM promoter methylation level before treatment was an independent predictor of radiore-sistance in patients with locally advanced CSCC(P 0 05)Prognostic analysis showed that methylation of serumcfDNA ATM promoter was an independent prognostic factor in locally advanced CSCC patients(P 0 05)Theprogression-free survival，overall survival，distant metastasis-free survival and local progression-free survival of pa-tients with locally advanced CSCC were significantly better in the high level of serum cfDNA ATM methylation groupthan in the low level group(P 0 05)Conclusion:The methylation status of serum cfDNA ATM promoter beforetreatment may be a useful biomarker for predicting the prognosis of locally advanced CSCC patients after radiotherapy Key wordsserum cell-free DNA;ataxia telangiectasia-mutated gene;methylation;locally advanced cervicalsquamous cell carcinoma;intensity modulated radiotherapy宫颈癌(CC)是全世界女性最常见的致命性癌症之一，在我国以宫颈鳞状细胞癌(CSCC)为最常见的组织学亚型1-2。放疗多年来一直是 CC 的主要治疗手段，尤其是局部晚期 CC3-4。然而，放疗患者对电离辐射的反应有显著差异，这直接影响他们的治疗效果和生存率5。放射敏感性和生存率可能受到特定基因改变的影响，如表观遗传学变化6。DNA 甲基化是一种常见的表观遗传修饰，被认为是恶性肿瘤的标志，在恶性肿瘤的放射抗性机制中发挥重要作用7-8。共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)编码的蛋白是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可调控 DNA 损伤反应和细胞凋亡9。而 ATM 启动子的高甲基化已在不同类型的癌症中被报道，且被证明与放射敏感性有关9-10。最近，有研究表明 ATM 启动子甲基化可作为肝细胞癌患者的放射治疗结果的预测生物标志物11。然而对于血清游离 DNA(cfDNA)ATM 启动子甲基化与 CSCC治疗反应的关系尚未见报道。因此，本研究旨在评估血清 cfDNA ATM 启动子甲基化对局部晚期 CSCC 患者放射抗性的预测价值。1对象与方法1 1研究对象根据 赫尔辛基宣言 的原则，选择2016 年3 月至2020 年 7 月在本院完成放疗的 144 例 CSCC 患者作为研究对象，年龄 23 85 岁，平均(57 79 14 21)岁。研究方案由医院伦理审查委员会批准，所有参与者都签署由伦理审查委员会批准的知情同意书。纳入标准:组织学证实的 CSCC;国际妇产科学联合会(FIGO)分期为b a 期;东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态评分为 0 2 分;无主动脉旁淋巴结转移;无放疗、化疗、手术史;临床资料完整。排除标准:对放疗不耐受;既往存在其他抗癌治疗史;宫颈残端癌或合并其他恶性肿瘤;神经系统疾病;影响治疗的严重并发症，包括结缔组织疾病;入组前 3 个月出现严重慢性心力衰竭或脑血管疾病;感染性或代谢性疾病;预计生存期短于3 个月。另外，在初始治疗前，患者没有接受过放疗或化疗。1 2血清样本收集及处理入组时收集 5 ml 静脉血样本，以 16 000 rmin1离心 3 min，收集上清液于 80 下储存，直到 DNA提取。血清 cfDNA 通过改良的苯酚 氯仿技术提取。cfDNA 颗粒用无菌去离子水溶解，总体积为 25 l，并储存于 20。1 3血清 cfDNA ATM 启动子甲基化水平检测12 使用 EZ DNA Methylation-Gold Kit(美国 Zymoe-search 公司)对血清 cfDNA 进行亚硫酸氢盐变性修饰。每个定量甲基化特异性 PC(Q-MSP)反应都是使用2 l DNA 模板在 20 l 反应体积中进行的，每个反应711章伟玲，等 血清游离 DNA ATM 启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌患者放射抗性的预测价值体积包含 1 l 使用 MethPrimers 设计的正向和反向引物(浓度 10 molL1)、0 4 l MSP DNA 聚合酶、1 7 l 10 MSP PC 缓冲液和1 4