生物技术进展生物技术进展2023年第13卷第1期102~106CurrentBiotechnologyISSN2095-2341■■■■■■■■■■■■研究论文研究论文Articles新型冠状病毒RBD蛋白原核表达及多克隆抗体的制备彭晓燕，陆盼盼，胡祖权*贵州医科大学生物与工程学院，贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心，贵阳550025摘要：为原核表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2（简称新型冠状病毒，severeacuterespiratorysyndrome-coronavirus2，SARS-CoV-2）S蛋白受体结合域（receptorbindingdomain,RBD）并制备多克隆抗体，利用基因克隆技术将RBD基因连接到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a(+)上，电转化至大肠杆菌XL1-Blue感受态细胞，利用优化后的表达条件大量表达重组蛋白，经亲和层析纯化后通过SDS-PAGE检测蛋白的表达情况。利用GST-RBD融合蛋白作为免疫抗原免疫小鼠制备多克隆抗体，ELISA和Westernblot分析抗血清的效价和特异性。PCR鉴定和序列测定结果显示，成功构建了重组载体pGEX-RBD和pET-RBD，在大肠杆菌中实现了GST-RBD和RBD-His融合蛋白的可溶性高效表达。研究获得的多克隆抗体的滴度达到约1∶3000，并具有良好的结合特异性。原核表达的可溶性新型冠状病毒RBD重组蛋白具有良好的免疫原性，为后续制备基因工程抗体奠定了实验基础。关键词：新型冠状病毒；受体结合域；原核表达；融合蛋白；多克隆抗体DOI：10.19586/j.2095⁃2341.2022.0114中图分类号：R392.11，Q786文献标志码：AProkaryoticExpressionoftheRBDProteinofSARS-CoV-2anditsPolyclonalAntibodiesPreparationPENGXiaoyan，LUPanpan，HUZuquan*ImmuneCellsandAntibodyEngineeringResearchCenterofGuizhouProvince，SchoolofBiologyandEngineering，GuizhouMedicalUniversity，Guiyang550025，ChinaAbstract：Toobtainthereceptorbindingdomain（RBD）ofSproteinofsevereacuterespiratorysyndrome-coronavirus2（SARS-CoV-2）inprokaryoticcellsandfurtherprepareitspolyclonalantibodies，theRBDgenewasconnectedintoprokaryoticexpres‐sionvectorsofpGEX-6p-1andpET-32a（+）bygenecloningtechnology.TherecombinantplasmidswerethentransformedintothecompetentcellsofEscherichiacolistrainXL1-blue.Therecombinantproteinswerelargelyexpressedbytheoptimizedexpres‐sionconditions.Afterpurificationbyaffinitychromatography，theexpressionofrecombinantproteinswasdetectedbySDS-PAGE.Polyclonalantibod...
