以酸枣仁、天麻为主的复方口服液改善睡眠作用机制研究_王蒙蒙.pdf

68第25 卷 第 2 期 2023 年 2 月辽 宁 中 医 药 大 学 学 报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol.25 No.2 Feb.，2023以酸枣仁、天麻为主的复方口服液改善睡眠作用机制研究王蒙蒙1，李桦军2，李欣坪1，游燕2，王恒禹2，王京昆2，林玉萍1（1.云南中医药大学，云南 昆明 650500；2.云南省药物研究所，云南 昆明 650000）基金项目：国家重点研发计划项目（2017YFC1702506）作者简介：王蒙蒙（1995-），女，河南上蔡人，硕士，研究方向：中药资源开发与利用。通讯作者：林玉萍（1975-），女，云南崇明人，教授，博士在读，研究方向：中药、天然药物活性研究。摘要：目的 评价以酸枣仁、天麻为主的复方口服液改善睡眠的作用及机制。方法 以酸枣仁、天麻为主的复方口服液按照低（19.5 mL/kg）、中（39 mL/kg）、高（117 mL/kg）3个剂量每天给予小鼠灌胃，阴性对照物为生理盐水，连续给药30 d后通过直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验来观察小鼠睡眠相关指标，并采用ELISA法测定脑组织内GABA、5-HT、DA的水平。结果 与阴性对照组相比，复方口服液3个剂量组对小鼠体质量无影响，均无直接睡眠作用，可显著延长小鼠在戊巴比妥钠睡眠实验中的睡眠时间（P0.001或0.01），均能增加戊巴比妥钠阈下剂量诱导的小鼠睡眠发生率，均能显著缩短小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期（P0.001）。不同剂量组均能提高小鼠脑组织内神经递质GABA（P0.001或0.01）、5-HT（P0.001）的水平；低、中剂量虽能提高多巴胺的含量，但差异没有统计学意义，高剂量能显著提高和多巴胺（P0.001）的水平。结论 在实验条件和所设剂量下，实验结果显示该复方口服液对睡眠具有明显的改善作用，其作用机制可能与提高脑组织中GABA、5-HT、DA的水平有关。关键词：酸枣仁；天麻；改善睡眠；神经递质；复方口服液中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2023)02-0068-05Effect and Mechanism of Compound Oral Liquid Mainly Composed of Suanzaoren（Ziziphi Spinosae Semen）and Tianma（Gastrodiae Rhizoma）on Improving SleepWANG Mengmeng1，LI Huajun2，LI Xinping1，YOU Yan2，WANG Hengyu2，WANG Jingkun2，LIN Yuping1（1.Yunnan University of Chinese Medicine，Kunming 650500，Yunnan，China；2.Yunnan Institute of Materia Medica，Kunming 650000，Yunnan，China）Abstract：Objective To evaluate the sleep-improving effect and mechanism of compound oral liquid based on Suanzaoren（Ziziphi Spinosae Semen）and Tianma（Gastrodiae Rhizoma）.Methods The compound oral liquid based on Suanzaoren（Ziziphi Spinosae Semen）and Tianma（Gastrodiae Rhizoma）was administered orally to mice in three doses of low（19.5 mL/kg），medium（39 mL/kg），and high（117 mL/kg）every day.The negative control was physiological Saline，after 30 days of continuous administration，observe the sleep-related indicators of mice through direct sleep test，pentobarbital sodium sleep prolongation test，pentobarbital sodium subthreshold dose hypnosis test and barbital sodium sleep latency test.And the levels of GABA，5-HT，and DA in brain tissues were determined by ELISA.Results Compared with the negative control group，three doses of oral liquid for sleep improvement had no effect on the body weight of mice，none of them had a direct sleep effect；it can significantly prolong the sleep time of mice in the pentobarbital sodium sleep experiment（P0.001 or 0.01）；both can increase the incidence of sleep in mice induced by the subthreshold dose of pentobarbital sodium；both can significantly shorten the sleep latency of mouse barbital sodium（P0.001）.Different dose groups can increase the levels of neurotransmitters-aminobutyric acid（P0.001 or 0.01）and 5-hydroxytryptamine（P0.001）in mouse brain tissue.Low and medium doses could increase the level of dopamine，but the difference was not statistically significant.High doses could significantly increase the level of dopamine and dopamine（P0.001）.Conclusion Under the conditions of this experiment and the dose set，the results of this experiment showed that the sleep-improving oral liquid has a significant improvement effect on sleep，and its mechanism of sleep improvement may be related to increasing the levels of GABA，5-HT，and DA in brain tissue.Keywords：Suanzaoren（Ziziphi Spinosae Semen）；Tianma（Gastrodiae Rhizoma）；sleep improvement；neurotransmitters；compound oral liquidDOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2023.02.01569 25 卷 辽宁中医药大学学报 睡眠不仅影响人的身体健康，还关系人的生活质量。有研究表明，失眠是一些慢性疾病出现的征兆和源头，会增加患高血压病、冠心病、记忆衰退等心血管疾病、精神疾病的概率1。失眠是指在有足够睡眠时间的情况下产生入睡困难、浅眠易醒、彻夜不眠等症状，现已经从老年人群高发向成年人群高发转移2。世界卫生组织（WHO）的一项研究数据中表明全球约有27%的人遭受失眠的困扰，我国约40%成年人和35%老年人存在失眠现象3。青少年由于学习压力大、生活节奏快、竞争激烈等因素，出现难入睡、睡眠少、入睡浅（即睡眠障碍国际分类中的“失眠症”）的症状的人数在不断上升。随着人们养生、保健等意识的提高，失眠现象引起人们的高度重视，进而各式各样的改善睡眠类保健品进入市场，利用药食两用药材制作保健品具有一定的功效、适合特定人群，不仅可调节人体机能，且不良反应少，具有较好的前景4。本研究主要对中药复方口服液改善睡眠的作用进行研究，通过直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验评价其改善睡眠的作用，同时采用酶联免疫吸附实验检测小鼠脑组织中神经递质-氨基丁酸（GABA）、5-羟色胺（5-HT）和多巴胺（DA）的含量，揭示其改善睡眠的相关机制。1材料及方法1.1 实验药物复方口服液为褐色液体，由云南省药物研究所提供，以酸枣仁、天麻为主要成分，辅料加以百合、茯苓、三七花等。依据复方口服液人体临床服用量的5、10、30倍设为本实验中复方口服液低、中、高剂量，按照人与小鼠体表面积折算法计算出小鼠的等效剂量为：低剂量 19.5 mL/kg、中剂量 39 mL/kg、高剂量 117 mL/kg。将所需给药剂量浓缩至相应小鼠所需灌胃体积后进行灌胃，以小鼠灌胃容积 0.1 mL/10 g为标准，每日1次，连续灌胃30 d。1.2 实验动物SPF级健康雄性BALB/c小鼠120只（202）g，68周龄，饲养在云南中医药大学动物实验室（温度：1829；相对湿度：50%80%；照明：12 h明暗交替）。实验动物来源：湖南斯莱克景达实验动物有限公司生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004；质量检测单位：湖南斯莱克景达实验动物有限公司；实验动物使用许可证号：SYXK（滇）K2011-0011。1.3 主要试剂与仪器小鼠GABA ELISA试剂盒（批号：20092235M）、5-HT ELISA试剂盒（批号：20092238M）、DA ELISA试剂盒（批号：20092239M），均购自江苏酶免实业有限公司；1 mL一次性无菌注射器（批号：20191128），陕西龙康鑫医疗器械有限公司提供；500 mL 0.9%氯化钠注射液（批号：H20061609），广西裕源有限公司提供。SQP电子天平赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；SK3300LH 超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；TH：101B 机械温湿度计（衡水沈拓仪器仪表有限公司）；RT-6100 酶标仪（上海创萌生物科技有限公司）；KZ-II 高速组织研磨仪（武汉赛维尔生物科技有限公司）；H1850R 台式高速冷冻离心（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）。1.4 实验方法1.4.1 动物分组与给药动物到达后检查小鼠外观，然后适应性喂养1周，在此期间每日观察小鼠一般生理状态，自由摄食饮水。适应性喂养结束后根据体质量随机分为3个大组，每个大组内的小鼠以简单随机化法再次分为4 个小组，分别为阴性对照组，复方口服液低、中、高剂量组，每个小组10只。阴性对照组给予生理盐水，复方口服液3个剂量组（低剂量19.5 mL/kg，中剂量39 mL/kg，高剂量117 mL/kg）给予受试物药液，每日1次，每6 d称重1次，连续灌胃30 d后进行改善睡眠功效测试。3个大组小鼠分别进行不同功效实验验证，第1组：戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间实验；第2组：戊巴比妥钠阈下剂量小鼠催眠实验；第3组：巴比妥钠