胰腺癌中OASL的表达及其对癌细胞增殖和迁移的影响_张人丹.pdf

肿瘤防治研究2023年第50卷第1期 Cancer Res Prev Treat,2023,Vol.50,No.118doi:10.3971/j.issn.1000-8578.2023.22.0741胰腺癌中OASL的表达及其对癌细胞增殖和迁移的影响张人丹1，赵春艳2，姚佳欣1，胡先华1，母波1OASL Expression in Pancreatic Cancer and Its Effect on Proliferation and Migration of Pancreatic Cancer Cells ZHANG Rendan1,ZHAO Chunyan2,YAO Jiaxin1,HU Xianhua1,MU Bo11.School of Basic Medical Sciences and Forensic Medicine,North Sichuan Medical College,Nanchong 637000,China;2.Sichuan Key Laboratory of Medical Imaging,North Sichuan Medical College,Nanchong 637000,ChinaCorresponding Author:MU Bo,E-mail:Abstract:Objective To explore the effect of OASL expression on the proliferation and migration of pancreatic cancer cells.Methods The GEPIA database was used to analyze the differences in OASL expression in pancreatic cancer tissues and normal pancreatic tissues.The TIMER database was used to analyze the relationship between OASL expression and patient survival.The TCGA database was used to analyze the correlation of OASL expression with the clinicopathological parameters of pancreatic cancer.shRNA was used to knock down the expression of OASL gene in pancreatic cancer panc-1 cells.Lentiviruses were used to overexpress the OASL gene in pancreatic cancer cells.MTT assay was used to evaluate their proliferation ability,and scratch and Transwell experiments were used to evaluate their migration ability.Western blot experiments were used to detect changes in proteins related to tumor proliferation,migration,and invasion.Results OASL expression in the pancreatic cancer group was significantly higher than that in normal pancreatic tissue(P0.05),and patients with high OASL expression in pancreatic cancer patients had worse OS than patients with low expression(P0.05).After OASL gene knockdown,the proliferation and migration abilities of panc-1 cells were inhibited,whereas the overexpression of OASL gene promoted the proliferation and migration ability of panc-1 cells.Western blot experiments showed that after OASL knockdown,p-STAT3 protein expression increased,whereas STAT3 and BAK protein expressions decreased.After OASL overexpression,p-STAT3 protein expression decreased,and STAT3 and BAK protein expression increased.Conclusion OASL may affect the proliferation and migration of pancreatic cancer cells through the STAT3 signaling pathway while affecting BAK expression to induce cell death.Key words:Pancreatic cancer;OASL;BioinformaticsFunding:The University-level Scientific Research Development Project of North Sichuan Medical College(No.CBY21-QA17);The Nanchong City School Cooperation Project(No.22SXCXTD0002);The Nanchong City School Cooperation Project(No.22SXQT0100);The Science and Technology Innovation Project of Sichuan Province(No.2021033)Competing interests:The authors declare that they have no competing interests.摘 要：目的 探讨OASL的表达对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法 GEPIA数据库分析收稿日期：2022-07-05；修回日期：2022-10-04基金项目：川北医学院校级科研发展计划项目（CBY21-QA17）；南充市市校合作项目（22SXCXTD0002）；南充市市校合作项目（22SXQT0100）；四川省科技厅苗子工程项目（2021033）作者单位：1.637000 南充，川北医学院基础医学与法医学院；2.637000 南充，川北医学院四川省医学影像重点实验室通信作者：母波（1980-），男，博士，教授，主要从事肿瘤靶向生物治疗工作，E-mail:作者简介：张人丹（1988-），女，硕士，助理实验师，主要从事肿瘤靶向生物治疗工作基础研究OASL在胰腺癌组织和正常胰腺组织中的表达差异。TIMER数据库分析OASL表达与患者生存期的关系。TCGA数据库分析OASL表达与胰腺癌临床病理参数的相关性。shRNA技术敲减胰腺癌panc-1细胞中OASL基因的表达。慢病毒用于过表达胰腺癌panc-1细胞中OASL基因。MTT实验检测胰腺癌panc-1细胞的增殖能力，划痕实验及Transwell实验检测panc-1细胞的迁移能力，Western 肿瘤防治研究2023年第50卷第1期 Cancer Res Prev Treat,2023,Vol.50,No.119blot实验检测与肿瘤增殖、迁移、侵袭相关蛋白的表达。结果 胰腺癌组中的OASL表达量显著高于正常胰腺组织（P0.05），且胰腺癌患者中OASL高表达患者与低表达患者相比具有较差的总生存期（P0.05）。敲减OASL基因后，panc-1细胞的增殖和迁移能力均被抑制，而过表达OASL基因促进了panc-1细胞的增殖和迁移能力。敲减OASL后，p-STAT3蛋白表达增高，STAT3和BAK蛋白表达降低；过表达OASL后，p-STAT3蛋白表达降低，STAT3和BAK蛋白表达增高。结论 OASL可能通过STAT3信号通路影响胰腺癌细胞增殖和迁移能力以及BAK表达来诱导细胞凋亡。关键词：胰腺癌；OASL；生物信息学中图分类号：R735.9开放科学(资源服务)标识码(OSID)：0 引言胰腺癌是一种临床症状隐匿、恶性程度高且死亡率高的消化道恶性肿瘤。据最新临床文献统计数据，目前胰腺癌仍然是恶性肿瘤里五年生存率最低的肿瘤，仅为10%1。胰腺癌的治疗方法仍以根治性手术切除为主，但是胰腺癌往往发现较晚，患者确诊时，因肿瘤发生远端转移或不可手术切除而丧失手术机会2。近年来在其他肿瘤治疗中取得良好效果的靶向治疗、免疫治疗等在胰腺癌的临床试验中效果仍不明显。因此，迫切需要寻求新的生物标志物和新的靶向位点，探究其在胰腺癌发生发展中的作用机制。OASL是一种蛋白质编码基因，编码59kDa的蛋白质，故又称p59OASL。它位于12q24.31，有7个外显子，主要在骨髓、胃和肺中表达，与OAS1、OAS2和OAS3一起形成干扰素诱导的蛋白质保守家族。有报道指出，OASL基因可能是维持肺癌细胞对ac-Roots敏感度的决定性调节因子之一，并可能与耐药性的发展有关3。本研究在对TCGA数据库中OASL基因进行生物信息学分析基础上，对胰腺癌细胞株panc-1敲减和过表达OASL，探讨其对胰腺癌细胞生物学行为的影响及其相关分子机制。希望能为胰腺癌的临床诊治寻找到新的靶向标志物，优化诊治方案，延长患者的生存期。1 材料与方法1.1 实验材料人类胰腺癌panc-1细胞购自中国上海中科院细胞库。敲减panc-1细胞OASL基因的shRNA以及过表达OASL基因的慢病毒均购买于上海吉凯基因科技有限公司。DMEM基础培养基（货号：PM150210）、胎牛血清（货号：164210-50）均购自武汉普诺赛生命科技有限公司，胰酶（货号：SH30042.01）、双抗（货号：SV30010）购自美国Hyclone公司，Lipo8000转染试剂（货号：C0533）、嘌呤霉素（货号：ST551）、RIPA裂解液（货号：P0013B）、10%Tris-Gly预制胶（货号：P0455S）、PVDF膜（货号：FFP32）、兔抗人GAPDH多克隆抗体（货号：AF1186）、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG（货号：A0208）、MTT试剂（货号：ST316）均购自上海碧云天生物科技公司，伤口愈合插件（货号：80209）购自德国Ibidi公司，兔抗人OASL多克隆抗体（货号：821065）购自成都正能生物，逆转录试剂盒Fer-mentas（货号：K1622）、PowerUp SYBR Green预混液（货号：A25742）均购自美国Thermo Sci-entific公司，qPCR引物均购自北京擎科生物科技有限公司。GAPDH引物序列：正义：5-GGAGC-GAGATCCCTCCAAAAT-3，反义：5-GGCT-GTTGTCATACTICICATGG-3；OASL引物序列：正义：5-CTGATGCAGGAACTGTATAGCAC-3，反义：5-CACAGCOTCTAGCACCTCTT-3。1.2 实验方法1.2.1 生物信息学方法分析OASL与胰腺癌预后的关系 本研究利用GEPIA数据库分析不同疾病状态（肿瘤或正常）下