一种预防肺癌的防癌茶的实验研究_梁启军.pdf

收稿日期：；修订日期：基金项目：江西省重点研发计划项目（）作者简介：梁启军（），男（汉族），江苏宿迁人，江西中医药大学附属医院主任中医师，博士学位，主要从事中医药防治肺系疾病及恶性肿瘤；中西医结合理论与临床研究工作一种预防肺癌的防癌茶的实验研究梁启军，唐晓玲，王丽华，丁兆辉，崔雅茹，于佩雯，曾 茹，周 敏，周紫伊（江西中医药大学附属医院肺病科 江西 南昌；江西省中医药研究院附属医院 江西 南昌；江西中医药大学国家固体制剂中心；江西中医药大学临床医学院 江西 南昌）摘要：目的 研究一种基于益气清毒理念配伍的防癌茶的预防肺癌作用。方法 将 级小鼠随机分为正常组、模型组、绿茶组、防癌茶组；正常组正常饲养；模型组、绿茶组、防癌茶组在同一环境中熏香烟烟雾，同时绿茶组喂服绿茶煮液、防癌茶组喂服防癌茶煮液；每日熏烟，持续 个月，喂茶持续 个月，随后处死小鼠，取材检测相关指标。结果 熏烟可致肺癌、肝癌、肾癌形成；也可以引起心脏、肝脏、脾脏、肾脏损害。绿茶组、防癌茶组的小鼠肺癌及其它肿瘤发生率较模型组显著降低（）；绿茶组小鼠肝、肾组织及功能有明显损害，心脏、脾脏损害较轻；防癌茶显著缓解熏烟造成的心脏、肝脏、肾脏、脾脏损害（）。结论 香烟熏烟法可以成功制备肺癌、肝癌、肾癌模型，及慢阻肺模型和心、肝、肾、脾损害模型。防癌茶既可以降低香烟烟雾诱发的肺癌及其它肿瘤发病率，也可以缓解各种组织器官损害，预防效果优于单纯绿茶。关键词：香烟烟雾；肺癌；绿茶；防癌茶 标识：中图分类号：文献标识码：文章编号：（）恶性肿瘤是当下复杂的医学难题和沉重的社会负担，肺癌是其中高发病率、高死亡率代表。空气污染、不良生活方式、不良情绪、吸烟或被动吸烟是常见发病因素，吸烟或被动吸烟是突出因素，。积极预防是降低肺癌发病率及死亡率最经济、最有效的方法。恶性肿瘤的发生是致癌因子长期反复损伤组织细胞的结果，是一个长期渐进过程；适宜的预防方法应该是寓于日常生活的可长期进行的方法，譬如纠正某些不良生活方式或实践某个健康生活行为。饮茶就是一种健康生活习惯。研究证实饮茶就可以防癌、治癌；绿茶对肺癌具有明显的预防作用；茶色素和茶多酚是茶叶内含的主要防癌成分，对癌症形成的 个阶段均有抑制作用。譬如，等研究发现茶或茶叶直接提取物中的儿茶素、茶黄素、茶氨酸可以抑制人体乳腺癌（）、结肠癌（）、肝癌（）、前列腺癌（）等细胞株以及正常肝细胞，但对正常肺细胞无影响。等研究证实茶氨酸或其半合成物对宫颈癌细胞有抑制作用。李春美等总结得出，茶多酚的防癌抗癌机理有清除体内自由基、抗脂质过氧化、调节体内致癌物的代谢、调节体内某些酶的活性、保护 免受损伤及提高机体的免疫能力等方面。但是茶有一定副作用或不适宜人群，譬如：茶叶中的茶碱成分可以兴奋神经、影响睡眠；绿茶寒凉，胃寒者不适宜饮用；茶的基本作用是“消”，中气不足者诸茶不宜。如果通过配伍佐以适量适宜中药，既保证了茶的口味、品质和预防作用，又纠正其不利偏性，有可能开发出接受度更高、接受面更广、预防效果更好的茶饮品。“益气清毒”法是在长期临床实践中总结出的一种原创中医肿瘤防治方法。益气以四君子汤为基本方，以健中为立足点，清毒以半枝莲、白花蛇舌草为基本清毒药，再根据肿瘤病位加味相应清毒药。长期临床显示，该法疗效良好。基于此，汲取益气清毒法理念，组配中药复方：党参、炒白术、黄芪、茯苓、炒枳壳、炒麦芽、白花蛇舌草、肿节风、玫瑰花、合欢皮，再与绿茶配伍成药茶，目标是配伍成一种降低对睡眠、胃肠不良影响及预防肺癌效果更佳的药茶。经过上述中药复方和绿茶质量比配和口味相关性研究，中药复方和绿茶比例：至：之间比较适宜，可以保留茶的基本口味。本次研究是通过动物实验观察其预防肺癌确切作用及是否有相关组织器官损害。材料与设备 茶茶叶叶、中中药药、香香烟烟及及熏熏烟烟设设备备 茶叶：购买江西省南昌县黄马江西茶研所生产的绿茶。中药：由江西中医药大学附属医院中药房提供中药饮片。熏烟香烟及薰烟设备：香烟为市场零售价为 元的某牌香烟；钢丝鼠笼，规格是 ；薰烟木箱是自制的木箱：外径是 ，内径是 ，盖子上沿长轴中间均匀打三个直径 圆孔，在箱子前后侧壁靠近内底面上缘中部各打一个直径 圆形孔洞。实实验验动动物物 购买江西中医药实验动物科技中心 级雌性昆明小鼠 只，体重（）；许可证号：（赣）。主主要要仪仪器器及及试试剂剂 倒置显微镜：奥林巴斯，日本生产，型号：。冰乙酸：天津市大茂化学试剂厂，瓶；甲醛：广东汕头市西陇科学有限公司，瓶；乙醇：南昌利康药械实业有限公司，瓶。方法与结果 分分组组 将小鼠随机分为正常组、模型组、茶叶组、防癌茶组，每组 只。给给药药剂剂量量 观察饲养小鼠 天，通过观察、计算发现，每只小鼠每天饮水量 左右，每组 只小鼠每天饮用水量是 左右。参考的成人体重按 公斤计算，实际每日可喝茶量按 计算。小鼠每日饮茶量 ，每组 只小鼠饮茶量 。防癌茶组的每日防癌茶总量也是 。造造模模与与给给药药 茶茶液液制制备备与与喂喂服服 每天称取 茶叶，每次放入适量清水煎煮，煎煮 次，每次 ，共煎煮茶液，将茶液冷至常温，放入茶叶组小鼠饲水瓶给服小鼠，不再喂服其它水液。防防癌癌茶茶制制备备与与喂喂服服：将复方中药混匀，打成 目细粉，再混匀，每天称取中药粉 ，称取茶叶 ，中药：茶叶：，将二者放在放在一起，如煎煮茶叶方法煎煮汤液，将防 时珍国医国药 年第 卷第 期癌茶冷至常温，放入防癌茶组小鼠饮水瓶给服小鼠，不再喂服其它水液。随着小鼠体重改变，茶叶和防癌茶的用量相应调整。模型组和正常组喂服普通自来水。模型组、茶叶组、防癌茶组各放一个鼠笼，将三个鼠笼放在同一个熏烟木箱中，木箱中放一个蚊香盘，每次点燃一支香烟，放于蚊香盘上，盖上箱盖，每十分钟续燃 支香烟，第一个月每天连续，第二月每天连续 ，第三个月开始每天连续。每天熏烟造模，造模结束后每组小鼠分两笼饲养，第二天造模时再合笼。第 个月末，予四组小鼠行胸部 检查，以判断小鼠肺部肿瘤形成情况，但未发现明显证据和组间差异，随即每组随机处死五只小鼠，做肺组织切片，发现模型组小鼠肺组织有小面积肺癌病灶或癌前病灶（炎细胞高度密集区）形成，故判断造模接近成功，余下小鼠继续熏烟，直至第 个月末，结束熏烟，再继续喂茶、药茶一月，记录行为学表现，处死小鼠，抽血、取材检测相关指标。统统计计分分析析 采用 统计学软件进行统计分析；计数资料以?的表示；采用卡方检验，为差异有统计学意义。结果 行行为为学学及及体体表表肿肿瘤瘤 见图。正常组形体丰满，毛光泽，行动灵敏，行动协调性良好（通过在纸箱口沿上行走长度、自稳能力判断），挣脱力量强，门齿之间距离未增宽，下颌部无明显青紫，舌质暗红，各小鼠体表未见瘤体（见图 ）。模型组体型稍瘦小，毛灰黄、晦暗，行动迟缓，行动协调性明显下降，挣脱力量下降，门齿之间距离显著增宽，下颌部明显青紫，舌质紫暗；其中一只小鼠左侧上肢肩生成 瘤体（见图 ），一只小鼠尾巴上见 黑色瘤体。茶叶组体型稍瘦小，毛晦暗、稀疏，行动稍迟缓，行动协调性下降，挣脱力量明显力下降，门齿之间距离未增宽，舌质稍暗，各小鼠未见体表瘤体（见图 ）。防癌茶组体型较瘦小，毛发较光泽，行动较灵敏，行动协调性尚可，挣脱力量稍微下降，但明显大于茶叶组，门齿之间距离未增宽，下颌部稍青紫，舌质稍暗（见图 ）。行为学表现见表。总体上，行为学显示模型组和茶叶组小鼠呈现明显的正虚征象；单从体表肿瘤发生情况看，熏烟造模是成功的，茶叶和防癌茶均有预防肿瘤作用。肝肝、肾肾功功能能和和（）抽取小鼠心腔血液检测肝、肾功能，可以从一个方面反映防癌茶对肝肾功能有何影响，烟雾主要诱发鳞癌，所以检测鳞状细胞癌相关抗原（）。总胆红素（）由低到高是防癌茶组、正常组、茶叶组、模型组，模型组较前三组显著升高（，），前三组无统计学差异。谷丙转氨酶（）从低到高是茶叶组、防癌茶组、模型组、正常组，与正常组比较，茶叶组显著降低（），其它组间无统计学差异。谷草转氨酶（）从低到高是茶叶组、模型组、防癌茶组、正常组，茶叶组、模型组与正常组有显著差异（均 ），防癌茶组与模型组、茶叶组均有显著差异（均 ）。尿素从低到高依次是正常组、防癌茶组、茶叶组、模型组，正常组与后三组均有统计学差异（，），防癌茶组与茶叶组、模型组有统计学差异（，）。肌酐从低到高是正常组、防癌茶组、模型组、茶叶组，正常组与茶叶组之间有统计学差异（），其它组间无统计学差异。尿酸各组间无统计学差异。综合分析检测结果：模型组肝功能被抑制、受损，肾功能受损；茶叶组肝功能被显著抑制，肾功能受损较重，防癌茶组肝肾功能受损明显轻于模型组和茶叶组。值从低到高是茶叶组、正常组、模型组、防癌茶组；与正常组和茶叶组比较，防癌茶组显著升高（，）；与模型组比较，茶叶组显著降低（）。见表。图 小鼠形态及体表瘤体表 行为学指征及体表肿瘤数组别体重 毛发喘息、行动挣脱力量门齿间距下颌部及舌象体表肿鼠 只正常组 较光泽无喘息；活动灵敏，协调性良好强未增宽下颌部无明显青紫，舌质暗红模型组 稀疏、晦暗明显喘息；活动迟缓，协调性明显下降下降增宽下颌部明显青紫，舌质紫暗茶叶组 稀疏，晦暗有喘息；活动迟缓，协调性尚可，明显下降未增宽下颌部稍青紫，舌质稍暗防癌茶组 较光泽轻微喘息；活动较灵敏，协调性尚可，稍微下降未增宽下颌部稍青紫，舌质稍暗表 肝、肾功能和 组别肝功能 肾功能尿素 肌酐 尿酸 正常组 模型组 茶叶组 防癌茶组 与正常组比较，；与模型组比较，；与茶叶组比较，左左肺肺、左左肾肾外外观观 每只小鼠处死时摘取左肺、左肾，用 生理盐水清洗，随放入 固定液（乙醇、甲醛和乙酸按 的比例配制）至少 后，再转移到 酒精中固化 后，用 倍放大镜在自然光下观察其外观形态。模型组 个肺见乳白色结节，个见膜下黑斑；个肾见外膜下黑斑，个未见异常。正常组 个肺见膜下黑斑，个未见异常；肾未见结节和膜下黑斑。茶叶组 个肺见膜下黑斑，个未见异常；个肾见膜下黑斑，个肾未见异常。防癌茶组 个肺见膜下黑斑，其余肺及肾未见异常（见表）。内内脏脏组组织织切切片片 摘取小鼠右肺、心、脾、肝、右肾，生理盐水快速漂洗一次，浸泡于 福尔马林溶液，一周后行组织切片、染色。切片要求：肺脏切肺尖到肺底矢状位中轴；心脏切时珍国医国药 年第 卷第 期 左心室最长轴面；肝脏切长轴冠状面；左肾切过肾门矢状面；脾切长轴冠状面。从肺泡形态、支气管及纤毛形态、癌前病灶（炎症细胞高度密集区）、肺癌灶四个方面观测各组小鼠右肺切片差异，模型组四个方面与其它组均有显著差异（典型切片见图，文字表述见表）。茶叶和防癌茶均对肺癌发生均有预防作用。表 左肺、左肾外观组别左肺膜下黑斑（个）结节（个）左肾膜下黑斑（个）结节（个）正常组模型组茶叶组防癌茶组图 右肺切片病理观察表 右肺切片肺特征组别肺泡形态支气管及纤毛形态癌前病灶小鼠 只肺癌灶小鼠 只正常组均匀正常模型组融合、肺气肿征象明显支气管普遍扩张、纤毛钝平茶叶组 比较均匀、轻度肺气肿征象 部分支气管扩张、纤毛变短防癌茶组比较均匀、轻度肺气肿征象 部分支气管扩张、纤毛较长 与正常组比较，；与模型组比较，；与茶叶组比较，模型组心脏全部受损，全部炎性变，心肌细胞普遍变细长、疏松（图 ）；茶叶组心肌（图 ）受损较模型组显著减轻，但比正常组（图 ）和防癌茶组（图 ）显著加重。图 心肌切片病理观察模型组脾脏白髓面积减少或炎性变的脾脏个数显著多于茶叶组，茶叶组又显著多于正常组和防癌茶组。图 脾脏切片病理观察模型组 个肝脏形成癌变病灶，肝脏炎性变以肝窦为中心向四周扩展；个肾脏形成癌病灶，肾脏炎性变主要在皮质的肾小球。正常组 个肾脏形成癌组织，茶叶组和防癌茶组肝脏、肾脏均未见肿瘤灶，茶叶组的肝脏和肾脏的炎性变或坏死坏死数比模型组显著减少，比正常组和防癌茶组显著增多，茶叶组的肝脏炎性变或坏死主要是在脏周边组织，肾脏炎性变主要是在肾脏近外膜的皮质区（见图 和表）。图 肝、肾癌组织与炎症病理观察表 心、脾、肝、肾切片特征内脏心脾肝肾病变性质心肌变细长、疏松炎性变白髓面积减少或炎性变炎性变或坏死癌变炎性变或坏死癌变正常组模型组茶叶组防癌茶组 与正常组比较，；与模型组比较，；与茶叶组比较