针刺联合药物治疗对肠易激综合征疗效的探索性研究_杨敏.pdf

Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology 世界科学技术-中医药现代化中医药胃肠研究针刺联合药物治疗对肠易激综合征疗效的探索性研究杨敏，李斌，邹燃，邓薇，徐派的，李悦（武汉市中西医结合医院 武汉 430022）摘要：目的探讨针刺联合药物治疗对肠易激综合征（Irritable bowel syndrome，IBS）的疗效。方法将42只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、IBS模型组、药物治疗A组、针刺组、药物治疗A+针刺组、药物治疗A+B组、药物治疗A+B+针刺组，除对照组外，其余组别大鼠均用三硝基苯磺酸进行结肠灌注，制备IBS模型，进行2周建模。对照组和IBS模型组灌胃生理盐水，药物治疗A组采用蒙脱石散灌胃，针刺组用电针内关、天枢和太冲穴，药物治疗A+B组用蒙脱石散和氟哌噻吨美利曲辛片灌胃，药物治疗A+B+针刺组使用蒙脱石散和氟哌噻吨美利曲辛片灌胃，同时，使用电针辅助治疗，每组都连续治疗2周。建模以及治疗过程中记录各组大鼠的一般行为学特征；治疗结束后，采集各组大鼠的结肠组织，进行结肠溃疡和炎症肉眼评分、腹 部 回 撤 反 射 评 分（Abdominal withdrawal reflex，AWR），生 化 检 测 结 肠 组 织 中 的 5-羟 色 胺（5-Hydroxytryptamine，5-HT）和大鼠髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）的含量，采用苏木精伊红染色法（Hematoxylin-eosinstaining，HE）和马松染色法对结肠组织进行病理切片观察。结果在建模后，与空白对照组相比，其他模型组均出现了体重的降低（P0.05）。而治疗后，与空白对照组相比，IBS模型组体重增长率低（P0.05）；药物治疗A组、针刺组、药物治疗A+针刺组、药物治疗A+B组体重增长率与对照组相比较低，但比IBS模型组要高（P0.05）；药物治疗A+B+针刺组体重增长率显著高于空白对照组（P0.05）。IBS模型组的结肠溃疡和炎症肉眼评分、AWR评分、结肠组织中的 5-HT和MPO含量均显著高于空白对照组（P0.05）；药物治疗A组、针刺组、药物治疗A+针刺组、药物治疗A+B组高于空白对照组，但显著低于IBS模型组；药物治疗A+B+针刺组的结肠溃疡和炎症肉眼评分、AWR评分和结肠组织中的5-HT与MPO含量则显著低于IBS模型组（P0.05）。HE与Masson染色结果显示，与空白对照组相比，IBS模型组的结肠组织中有明显的致密炎性细胞浸润，各治疗组在治疗后炎性细胞明显减少，IBS模型组及其余各组的结肠组织粘膜下层和平滑肌中有大量胶原蛋白。结论针刺联合药物治疗对肠易激综合征的相关症状有较好的效果，提示针刺可能对肠易激综合征有一定的疗效，启发针刺联合药物治疗对肠易激综合征的临床应用。关键词：电针 穴位 肠易激综合征 内脏敏感性doi:10.11842/wst.20210720007 中图分类号:R245.31 文献标识码:A肠易激综合征（Irritable bowel syndrome，IBS）是一种持续发病或间断发病的慢性肠道性疾病，发病症状通常表现为腹痛、腹胀、腹部不适、排便不规律、大便异常等1，该病的发病机制尚未有系统说明，其病因及诱发因素囊括了人格特性、精神心理状态、饮食习惯、感染、家族遗传等多个方面，病变上至中枢神经系统 收稿日期：2021-07-20 修回日期：2022-07-27 湖北省卫生健康委员会联合基金项目（WJ2019H518）：从精神心理状况探讨针灸对肝郁脾虚型肠易激综合征的临床及机制研究，负责人：杨敏；武汉市卫生健康委员会重点项目（WZ19A11）：从精神心率状况探讨针灸对肝郁脾虚型肠易激综合征的临床及机制研究，负责人：杨敏。通讯作者：李斌，硕士，副主任医师，主要研究方向：针灸治疗中医脑病、痿痹麻木与筋骨病，如中风、痴呆、癫证、狂证、郁证；肢体无力、麻木、疼痛；面瘫、项痹、眩晕、关节痹痛、腰腿痛及各种筋骨疼痛疾病。4597 Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology 2022 第二十四卷 第十一期 Vol.24 No.11 的紊乱，下至局部胃肠道神经内分泌网络的异常调节。在我国，IBS的发病率逐年上升，严重影响人的正常生活及工作质量，给社会带来较大的经济负担2。IBS可分为腹泻型、便秘型和混合型。但在某些个体中，IBS可能在感染性疾病后急性发作并发展成具有发烧、呕吐和腹泻等特征的综合征，被称为感染后肠易激综合征（Post-infectious irritable bowel syndrome，PI-IBS）3。目前，因为化学试剂诱导的炎症反应和宿主免疫激活可以在一定程度上模仿IBS的临床特征，该方式诱导的 IBS 动物模型已广泛用于 IBS 的机理研究。在IBS发病过程的研究中，脑肠轴的重要功能作用愈加受到重视4，有研究证明中枢神经系统、自主神经、免疫及内分泌机制参与了肠稳态以及肠管运动的调节5。因此对该病的治疗也渐渐从针对终末靶器官消化道，慢慢转变为精神心理治疗，其中包含改善脑肠轴稳态的综合治疗，达到缓解症状和改善生活质量的治疗目标。5-HT便是存在于中枢和外周神经系统的一种脑肠肽，调节许多神经递质的释放，影响各种生物和神经过程，例如攻击、焦虑、情绪等6-8。因此，5-HT的稳定能够反映脑肠轴的稳态，从而提示机体的精神状态。然而，目前IBS临床治疗方式多以对症用药处理为主，但存在的缺点较为明显，用药后往往出现较大副作用，治疗效果不佳。但在中医中，“泄泻”与肠易激综合征表现的临床症状相似，中医临床治疗研究证明针刺、推拿在肠易激综合征的防治中具有简、便、廉、验的特点，具有确切的疗效9-10。因此，本课题以肠易激综合征动物模型为研究对象，服用蒙脱石散及氟哌噻吨美利曲辛片并结合以内关、天枢、太冲为主的针刺进行治疗，阐述针刺三大穴位的治疗效果和其联合药物对药物治疗效果的提升作用，探索针刺对肠易激综合征的潜在治疗效果，为临床上治疗IBS的方案提供改进方向。1 材料 1.1实验动物SD大鼠42只（雄性，6周龄，每只220 g），实验许可证号：SYXK（鄂）2018-0104；温度 22-26，相对湿度 50%-60%的饲养条件下进行饲养，人工光照明暗各12 h。在本次实验过程中，按照 实验动物管理条例 等相关文件标准进行饲养与处置。1.2试剂戊巴比妥钠（货号P3761，sigma merck公司）；三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid sol，TNBS）（货 号 C9801，sigma 公 司）；大 鼠 5-羟 色 胺（5-Hydroxytryptamine，5-HT）酶联免疫分析试剂盒，大鼠髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）酶联免疫分析试剂盒（货号分别为RA20031，RA20325，bio-swamp公司）；伊红，苏木素（货号分别为C0109，C0107，碧云天公司）；Masson三色染色试剂盒（货号 G1340，Solarbio公司）；中性树脂（货号S30509，源叶公司）；甲苯胺蓝染色液（货号 G1032，Servicebio公司）；化学发光试剂（货号MFA5310，rongbai公司）。1.3仪器电子天平（型号FB124，舜宇公司）；显微剪，显微镊（型号分别为WA1020，WA3040，金钟公司）；酶标分析仪，酶标洗板机（型号分别为AMR-100，APW-200，杭州奥盛公司）；正置显微镜（型号JZYQ，皆准公司）；石蜡切片机（型号API-365，艾普公司）；摊片烤片机，生物组织包埋机-冷冻机（型号分别为TK7218，HS-B，恒松公司）；生物组织包埋机（型号KH-BL1，孝感阔海公司）；自动组织脱水机（型号 ZT-12P2，亚光病理公司）；全自动化学发光分析仪（型号FST-I-05，普力菲尔公司）2 方法 2.1大鼠肠易激综合征模型的构建将大鼠分为对照组（6只）和IBS模型组（36只），实验前大鼠禁食 24 h，采用 2%戊巴比妥钠按照0.2 mL100 g-1的剂量腹腔注射麻醉深度麻醉。参照Qin等11的方法对模型组进行造模，模型组大鼠于离肛门处8 cm，将细塑料导管进入降结肠，大鼠头部向下垂直放置，1 min内缓慢给予50 mg TNBS，灌注后留置导管1 min后缓慢取出。对照组大鼠以相同方法给予相同体积生理盐水灌注。造模1周后将对照组大鼠与3只IBS模型组大鼠麻醉，取结肠组织，通过结肠溃疡和炎症肉眼评分、结肠组织中5-羟色胺及大鼠髓过氧化物酶含量进行模型鉴定。与对照组相比，IBS模型组结肠溃疡评分均为4，结肠组织中5-羟色胺及大鼠髓过氧化物酶含量明显高于空白组，差异有统计学意义（P0.05），表明IBS模型复制成功。4598 Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology 世界科学技术-中医药现代化中医药胃肠研究2.2分组治疗除设置6只健康大鼠为空白对照组外，将建模成功的36只大鼠随机分为6组：IBS模型组、药物治疗A组、针刺组、药物治疗A+针刺组、药物治疗A+B组、药物治疗A+B+针刺组。对照组和IBS模型组每天灌胃生理盐水；药物治疗 A 组每天给予蒙脱石散灌胃25 mgkg-1d-1，连续2周；针刺组参照 实验针灸学 大鼠标准穴位图谱定位，将大鼠捆绑后，取内关、天枢和太冲穴，每穴斜刺0.7 mm，并穴位旁开5 mm平刺，接电针。电刺参数为疏密波，频率 2-100 Hz，强度 0.1-0.2 mA，以肌肉微微颤动为度，每次20 min，每天1次，连续2周；药物治疗A+针刺组每天给予蒙脱石散灌胃25 mgkg-1d-1，并以内关、天枢、太冲电针，连续2周。药物治疗A+B组每天给予蒙脱石散灌胃25 mgkg-1d-1，氟哌噻吨美利曲辛片灌胃 0.056 mgkg-1d-1，连续2 周。药物治疗 A+B+针刺组每天给予蒙脱石散灌 胃 25 mgkg-1d-1，氟 哌 噻 吨 美 利 曲 辛 片 灌 胃0.056 mgkg-1d-1，并以内关、天枢、太冲电针，连续2周。给药14 d后，麻醉后腹主动脉取血，取脑和结肠。2.3观察指标2.3.1一般行为学观察密切观察大鼠的精神、活动变化、毛发润泽度及体重增长变化等。2.3.2结肠溃疡和炎症肉眼评分按照表 1中的标准对各组大鼠的临床表现进行评分。2.3.3AWR评分参照Elie等9的方法进行检测，2周治疗后，大鼠禁食24 h、不禁水，麻醉后固定，用PTCA固定橡胶球囊，插入肛门6 cm并固定。大鼠苏醒后给球囊充气加压，初 压 约 20 mmHg，压 力 递 升 20 mmHg 直 至80 mmHg，每个压力观察20 s，期间休息至少5 min，根据大鼠腹部回缩反射（见表2）进行AWR评分。2.3.4生化检测结肠组织中5-HT、MPO含量根据大鼠5-HT酶联免疫分析试剂盒和大鼠MPO酶联免疫分析试剂盒的说明书，以空白组大鼠作为对照，对IBS模型组大鼠的结肠组织进行检测。2.3.5苏木精-伊红染色法及Masson观察结肠组织变化将固定好的结肠组织切取0.3 cm的厚度，按常规步骤脱水浸蜡包埋，切片厚度为 3 m，水浴展片，捞片，将切片小心贴附于载玻片上，控片，然后将切片放入展片器展片，贴平粘紧后烤片。根据苏木精-伊红染色法及Masson三色染色试剂盒的步骤对组织切片进行染色，通过显微镜拍照，Leica Application Suite 图象系统采集样本相关部位。2.3.6统计学处理采用SPSS 19.0进行数据分析。计量资料以平均值标准差（x s）表