沙蒜软胶囊中5种功效指标的同步测定及其指纹图谱构建_李军波.pdf

285 食 品 科 技FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品安全与检测2023年 第48卷 第04期A and E in milk powder using supercritical fluid extraction for sample clean-upJ.Journal of Chromatography A,2000,874(2):275-283.20CAMPBELL S,STONE W,WHALEY S,et al.Development of gamma(gamma)-tocopherol as a colorectal cancer chemopreventive agentJ.Critical Reviews in Oncology/Hematology,2003,47(3):249-259.21张艳海,其布勒哈斯,金燕,等.在线二维液相色谱法同时测定婴幼儿和成人配方营养品中的维生素A、D3和EJ.色谱,2015,33(3):291-297.22戚绿叶,颜琳琦,张丽媛,等.二维液相色谱法测定保健食品中VA、VD3、VE的含量J.中国卫生检验杂志,2015,25(3):340-343,347.23陈建彪.在线净化二维液相色谱快速检测食品中维生素A、D、EJ.食品安全质量检测学报,2019,10(6):1726-1733.收稿日期：2022-11-03 *通信作者 作者简介：李军波(1989)，男，湖北天门人，硕士，工程师，研究方向为保健食品及化妆品相关标准。李军波，郁晓艺*，欧阳浩栩，伍 蓥，郭 丹，李晓敏*(完美(广东)日用品有限公司，广东 中山 528451)摘要：文章建立了一种能同时测定沙蒜软胶囊中槲皮素、山奈素、异鼠李素、大蒜素、-生育酚含量的高效液相色谱法(High performance liquid chromatography，HPLC)和沙蒜软胶囊全面的质量监控方式。对提取条件和检测色谱条件进行优化，采用乙醇超声和甲醇:25%盐酸(4:1)加热回流两步提取，以流速1.0 mL/min，甲醇-0.4%磷酸水为流动相梯度洗脱；3种检测波长为360、240、204 nm。对生产的14批次沙蒜软胶囊进行监控，建立指纹图谱，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析样品批次间的相似度，评估产品批次间的稳定性。在优化后的样品提取和色谱条件下，对测定方法进行系统的方法学验证，结果表明该方法的线性相关性R值均大于0.999、回收率高、精密度好，是一种可靠的测定方法，沙蒜软胶囊批次间相似度大于0.85。该方法可靠，可用于产品监控，可提升产品中活性组成的检测效率和产品质量监控效果。关键词：沙蒜软胶囊；高效液相色谱法；方法学验证；指纹图谱中图分类号：TS 207.3 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2023)04-0285-07Construction the Method of Five Functional Composition Simultaneous Determination and Fingerprint in the Sea Buckthorn Garlic Soft CapsuleLI Junbo,YU Xiaoyi*,OUYANG Haoxu,WU Ying,GUO Dan,LI Xiaomin*(Perfect(Guangdong)Co.,Ltd.,Zhongshan 528451,China)沙蒜软胶囊中5种功效指标的同步测定及其指纹图谱构建DOI:10.13684/ki.spkj.2023.04.031 286 食 品 科 技FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品安全与检测2023年 第48卷 第04期0 引言沙蒜软胶囊是以沙棘籽油、大蒜油、银杏叶提取物为原料1，经混合配制而成的具有降血脂功能的保健产品。现有研究表明沙棘籽油中富含-生育酚、黄酮苷元类、甾醇等活性物质2-3，该类活性成分具有抗氧化、抗肿瘤、降低血液胆固醇防止血栓形成、治疗胃肠黏膜损伤等功效2-8。大蒜油含有丰富的大蒜素9，其在抗菌、调节肠道菌群、改善高甘油三酯等方面具有较好的作用10-11。银杏叶提取物中的黄酮含量可高达45.6%12，其中的黄酮苷元等物质可促进脂质代谢、抑制细胞凋亡、改善脑缺血、抗肿瘤等13-17。沙蒜软胶囊产品中富含活性成分，如黄酮类、大蒜素、-生育酚、植物甾醇类等物质。而现有研究表明对沙蒜软胶囊中活性成分的全面监控需要采用多种检测方法才能实现，如高博闻18采用乙醚提取沙棘油中-生育酚，使用高效液相法测定其含量；徐丽红等19用乙醇超声提取保健食品中大蒜素，使用高效液相测定其含量；王亚等20使用酸液水解回流处理银杏叶提取物，使用HPLC测定提取物中槲皮素、山奈素、异鼠李素的含量。故研究开发一种可针对沙蒜软胶囊中特有的活性成分，实现各指标的同步检测，对提升检测效率和控制产品质量具有重要意义。本文拟探究沙蒜软胶囊适宜的前处理方式和HPLC测试条件，分析沙蒜软胶囊中的活性成分：槲皮素、山奈素、异鼠李素、大蒜素、-生育酚，实现5项指标同步检测，并尝试通过多批次产品的测定，建立沙蒜软胶囊的液相指纹图谱，为生产质量控制提供参考。1 材料与方法1.1 材料与试剂槲皮素(纯度97.1%)、山奈素(纯度97.6%)、异鼠李素(纯度99.7%)、大蒜素(纯度96.6%)、-生育酚(纯度98.2%)：上海安谱公司；无水甲醇、无水乙醇、盐酸：分析纯，国药集团化学试剂有限公司。1.2 仪器与设备1260型高效液相色谱仪：美国Agilent公司；ML204型电子天平：0.1 mg，瑞士METTLER TOLEDO公司；TW20数显恒温水浴锅：德国JULABO公司；Milli-Q去离子水发生器：美国Millipore公司。1.3 试验方法1.3.1 标准溶液的配制 精密称取槲皮素11.37 mg、山奈素11.40 mg、异鼠李素5.87 mg、大蒜素8.39 mg、-生育酚5.99 mg，以甲醇溶解、摇匀、定容于5 mL棕色容量瓶至刻度，依次得Abstract:A method for the simultaneous determination of quercetin,kaempferide,isorhamnetin,allicin,-tocopherol in the sea buckthorn garlic soft capsule by high performance liquid chromatography(HPLC)and a method for the comprehensive quality control of the sea buckthorn garlic soft capsule was established.To optimize the extracting conditions and chromatographic conditions,the research extract sample by two-step,which include ethanol ultrasonic and methanol:25%hydrochloric acid(4:1)heated reflux.The chromatographic conditions were as follows:flow rate 1.0 mL/min,moving phase gradient elution of methanol and 0.4%phosphoric acid.And three different detection wavelengths were chosen(360,240,204 nm).Moreover,the study detected 14 batches of the sea buckthorn garlic soft capsule,and established the fingerprint.The similarity evaluation system of traditional Chinese medicine chromatography fingerprint similarity was used to analyze the similarity and stability between different batches of the sample.After optimize the extracting conditions and chromatographic conditions,the optimized method finished methodological validation.The results showed that the linear correlation R value of the method was higher than 0.999.In addition,this method can possess high recovery rate and precision.The similarity between the different batches of the sea buckthorn garlic soft capsule more than 0.85,which means these research method is reliable.The optimized method is reliable,that can use to monitor product.It has positive impact on the detection efficiency of functional composition and the monitoring effect of product quality.Key words:sea buckthorn garlic soft capsule;high performance liquid chromatography(HPLC);methodological validation;fingerprint 287 食 品 科 技FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品安全与检测2023年 第48卷 第04期到对照品溶液溶度分别为2.208、2.225、1.170、1.621、1.176 mg/mL。分别吸取0.1、0.4、0.8、1.2、1.8 mL各对照品溶液于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度线。1.3.2 样品提取 取供试样品20粒，挤出内容物于50 mL小烧杯中，混合均匀，精密称取沙蒜软胶囊内容物1.0 g(精确至0.1 mg)于250 mL平底烧瓶中，加10 mL无水乙醇溶解，超声提取15 min。加甲醇:25%盐酸溶液(4:1)的混合溶液25 mL，水浴(98100)回流30 min，迅速冷却至室温，转移至50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 m滤膜过滤，滤液待测。1.3.3 色谱条件 流动相比例设置详见表1，适宜的流速为1.0 mL/min。色谱柱：Agilent Extend C18柱5 m4.6 mm250 mm。柱温箱温度：35。DAD检测器波长设置详见表2。表1 流动相设置比例时间/min甲醇/%A0.4%磷酸/%B0406054060750502050502260403060403585154585155095560955621000881000904060表2 检测器波长设置波长变更时间/min波长/nm03603024051204883601.3.4 数据处理 使用Agilent 1260仪器配套的Open LAB采集上机数据，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2010版)分析样品批次间的相似度，所生成指纹图谱的相