急性髓系白血病患者血清外泌...92a-3p的表达及其意义_王涵.pdf

第 49 卷 第 2 期2023年 3 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.2Mar.2023DOI：10.13481/j.1671587X.20230223急性髓系白血病患者血清外泌体中 miR-92a-3p的表达及其意义王涵1,张亚丽1,全海薇1,母润红2,邹雨彤1,夏薇1（1.北华大学医学技术学院血液检验教研室，吉林 吉林 132013；2.北华大学基础医学院免疫学教研室，吉林 吉林 132013）摘要 目的目的：检测急性髓系白血病（AML）患者血清外泌体中微小 RNA-92a-3p（miR-92a-3p）表达水平，探讨其对 AML的诊断价值。方法方法：选取 AML患者 51例（AML组）和 34名同期健康体检志愿者（对照组）作为研究对象，收集研究对象外周血标本；差速离心法提取血清外泌体，通过透射电子显微镜、纳米粒度分析仪和 Western blotting法鉴定外泌体；采用实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）法检测 2组研究对象血清外泌体中 miR-92a-3p表达水平；根据血清外泌体中 miR-92a-3p表达水平绘制受试者工作特征（ROC）曲线，计算 ROC 曲线下面积（AUC），确定其临界值，根据灵敏度和特异度评估 miR-92a-3p表达水平对 AML 的诊断效能。结果结果：在透射电子显微镜下外泌体呈外观圆形且中间凹陷的膜状结构，纳米粒度分析仪检测外泌体粒径为 30100 nm，Western blotting法在提取外泌体中检测到 CD63 和 CD9 蛋白表达。与对照组比较，AML 组患者血清外泌体中 miR-92a-3p 表达水平明显降低（P0.01）；ROC曲线分析，血清外泌体 miR-92a-3p诊断 AML的最佳临界值为 0.51，灵敏度为 76.47%，特异度为 94.12%，AUC 为 0.913，AUC 95%置信区间（CI）为（0.856，0.971）（P0.001）。结论结论：AML患者血清外泌体中 miR-92a-3p表达水平诊断 AML的灵敏度和特异度较高，可应用于早期 AML的临床诊断。关键词 急性髓系白血病；外泌体；微小 RNA-92a-3p；肿瘤标志物中图分类号 R733.7文献标志码 AExpression of miR-92a-3p in exosome in serum of patients with acute myeloid leukemia and its significanceWANG Han1,ZHANG Yali1,QUAN Haiwei1,MU Runhong2,ZOU Yutong1,XIA Wei1（1.Department of Blood Detection，School of Medical Technology，Beihua University，Jilin 132013，China；2.Department of Immunology，School of Basic Medical Sciencs，Beihua University，Jilin 132013，China）ABSTRACT Objective：To detect the expression level of microRNA-92a-3p（miR-92a-3p）in the exosome in serum exosome of the patients with acute myeloid leukemia（AML），and to explore its diagnostic value for AML.Methods：A total of 51 patients with AML（AML group）and 34 physically healthy volunteers during the same period（control group）were selected as subjects，and the peripheral blood specimens of the subjects were collected，and the peripheral blood specimens were collected from the subjects.The serum 文章编号 1671587X(2023)02046706收稿日期 20220502基金项目 吉 林 省 科 技 厅 科 技 发 展 计 划 项 目（20200403118SF）；吉 林 省 教 育 厅 大 学 生 创 新 创 业 训 练 计 划 项 目（202010201066）作者简介 王 涵（1995），女，吉林省松原市人，在读硕士研究生，主要从事血液疾病方面的研究。通信作者 夏薇，教授，博士研究生导师（E-mail：）467第 49 卷 第 2 期 2023 年 3 月吉林大学学报（医学版）exosomes were extracted by differential centrifugation，and identified by transmission electron microscope，nanoparticle analyzer and Western blotting method；the expression levels of miR-92a-3p in serum exosome of the subjects in two groups were detected by real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR）method；according to the expression level of miR-92a-3p in serum exosome，the receiver operating characteristic（ROC）curve was drawn and the area under the curve（AUC）was calculated to determine the critical value，and the diagnostic efficiency of expression level of miR-92a-3p to AML was evaluated based on the sensitivity and specificity.Results：The extracted exosomes had membrane structures with round appearance and concave in the middle under transmission electron microscope；the size of the exosomes was 30100 nm detected by nanoparticle analyzer；the expressions of CD63 and CD9 proteins were found by Western blotting method.Compared with control group，the expression level of miR-92a-3p in serum exosome of the patients in AML group was significantly decreased（P0.01）；the ROC curve results showed that the optimal critical value of serum exosome miR-92a-3p for the diagnosis of AML was 0.51，the sensitivity was 76.47%，the specificity was 94.12%，the AUC was 0.913，95%confidence interval（CI）=（0.856，0.971）（P0.001）.Conclusion：The expression level of miR-92a-3p in serum exosome of the AML patients has high sensitivity and specificity in the diagnosis of AML，and it can be used in the clinical diagnosis of early AML.KEYWORDS Acute myeloid leukemia；Exosome；MicroRNA-92a-3p；Tumor marker急 性 髓 系 白 血 病（acute myeloid leukemia，AML）是一类骨髓中髓系原始或幼稚细胞恶性增殖抑制骨髓正常造血功能的造血系统恶性肿瘤。目前，AML 的临床诊断主要应用骨髓细胞学检查，因其影响因素较多，需开发一种灵敏度高、特异度强的诊断指标用以辅助急性白血病的早期诊断。外泌体是细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，直径为 30150 nm，与细胞膜融合后释放到胞外基质中并发挥作用，可在细胞间进行物质传递及细胞间通讯。作为近年研究热点，外泌体独特的分子特征可以改变正常或恶性受体细胞的细胞功能。同时，外泌体能够影响白血病细胞的生长和分化，该能力使 其 可 作 为 诊 断 白 血 病 的 生 物 标 志 物1。微 小RNA（microRNA，miRNA）是真核生物中一类内源性非编码 RNA，可调控细胞的多种生物学功能2。miRNA 在肿瘤细胞中的调节作用也同样影响癌症的发生、发展及预后3。一些 miRNA 已被证实在 AML 中明显表达失调，但其具体调控机制尚未明确。因此，靶向 miRNA 分子可能是一个很有前景的肿瘤诊断和治疗方向。研究4-5表明：在一些肿瘤疾病中，miR-92a-3p表达与正常人比较会有不同程度的升高或降低。有研究者通过组蛋白去乙 酰 酶 2（histone deacetylase 2，HDAC 2）构 建U937白血病细胞株，评估其 miRNA 调控网络，预测 miR-92a-3p 为 AML 中的潜在调节因子6。研究7显示：circ_0002232的表达水平与磷酸酶和张力 蛋 白 同 源 物（phosphatase and tensin homolog，PTEN）表达水平呈正相关关系，与 miR-92a-3p表达 水 平 呈 负 相 关 关 系，并 预 测 circ_0002232/miR-92a-3p/PTEN 可 能 是 AML 中 的 潜 在 关 联 网络。但目前对于 miR-92a-3p 为 AML 中的调节因子的预测尚未被证实。因此，本研究结合外泌体中miRNA 稳定存在和不易降解的特征8，对 AML患者血清外泌体中 miR-92a-3p 表达水平进行分析，以期为 AML 的发病机制、病程进展和作用靶点的研究提供依据，也为AML的临床诊断和治疗提供方向。1 资料与方法 1.1临床资料临床资料收 集 的 血 清 标 本 来 自 2020 年2 月2021 年 9 月期间北华大学附属医院门诊及住院的 AML 患者 51例（AML 组），以同期健康体检志愿者 34名作为对照组。AML 纳入标准：经骨髓细胞形态学和免疫学等检查确诊；初诊和初治患者；患者签署知情同意书。排除标准：并发其他恶性肿瘤或血液疾病；肝肾功能异常；年龄0.05），具有可比性。本研究通过北华大学附属医院医学伦理委员会批准。1.2主要试剂和仪器主要试剂和仪器抗 CD63 抗体和抗 CD9 抗468王涵，等.急性髓系白血病患者血清外泌体中 miR92a3p的表达及其意义体 购 于 英 国 Abcam 公 司，TRIzol 试 剂、Mir-X miRNA First-