毛竹炭疽病的初步研究_鲁春富.pdf

林业科技情报2023 Vol.55 No.1*第一作者简介:鲁春富，农艺师，从事林业技术推广工作，Email:1605387127 qqcom。*通信作者:吴佳，高级工程师，从事森林病虫害防治研究和林业技术推广工作，Email:wujia123666 163com。毛竹炭疽病的初步研究鲁春富1*郑梦兰2李雪涛1杨振1吴佳1*(1安吉县林业局，浙江 安吉 313300;2安吉县梅溪镇农办，浙江 安吉 313300)摘要 1994 年 34 月安吉县发现部分毛竹林区上年新竹发病死亡，面积达 820 hm2，涉及 6 个乡镇街道，死竹逾 10 万株。1994 年 7 月安吉县林业局森防站对该病害开展了专题调查研究，经三年多的林区调查试验发现，该病害在林间表现为二种病状:一是当年初夏枯死类型;二是隔年枯死类型。经分离、接种，再分离，证实为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioidesPenz)引起的毛竹炭疽病。关键词 毛竹炭疽病;胶孢炭疽菌;初步研究中图分类号:S7637文献标识码:A文章编号:10093303(2023)01001604Preliminary Study on Anthracnose of Phyllostachys PubescensLu Chunfu1*Zheng Menglan2Li Xuetao1Yang Zhen1Wu Jia1*(1Anji Forestry Breau，Anji 313300，Zhejiang，China;2Agricultural Officeof Meixi Town，Anji 313300，Zhejiang，China)Abstract:From March to April 1994，some young Moso bamboo in Anji County were found dead，covering an areaof 820 hm2，involving six rural streets and more than 100，000 dead Phyllostachys pubescens In July 1994，theForest Defense Station of the Forestry Bureau of Anji County conducted a special investigation and study on the dis-ease and after more than three years of forest investigation and experimentation，it was found that the disease mani-fested itself in the forest as two kinds of diseases:First，the type of death in the early summer of the year;The sec-ond is the type of death in the next year It was confirmed to be Bamboo anthracnose caused by Colletotrichumgloeosporioides PenzKey words:Bamboo anthracnose;colletotrichum gloeosporioides Penz;preliminary study安吉县是全国著名的竹乡，毛竹(Phyllostachysheterocycla cv Pubescens)林面积 58 426 hm2，占林地面积的 432%，毛竹生产在林业经济中占有重要的地位，是山区农民的主要经济来源。在 1994 年34 月，安吉县部分毛竹林区上年度的新竹发生了新病害，新竹出现枯枝、枯梢，直至整株枯死;经县林业局森防站组织专题调查:全县发生范围涉及 6个乡镇，面积达 820 hm2，枯死毛竹 10 万余株，以杭垓、溪龙、梅溪 3 个乡镇较为严重;新病害的发生为害，立即引起了林农、林业干部和各级领导的重视，于 1994 年 7 月由县林业局森防站负责，组织开展林区调查防治工作，并于 1995 年 3 月正式立题开展毛竹新病害的研究。1材料与方法(1)在不同的发病林区采集发病枝条的细爪枝、中枝、大枝的节间处变色段或病斑枝。采用常规分离方法，表面灭菌后的组织块，置于PDA 培养基上，25 温度下培养，然后进行鉴定。将培养分离纯化的病原菌，制成每 160 倍视野中含有 5060 个孢子的孢子悬浮液，分二种方法接种，一种是将上述孢子悬浮液置于小型喷雾器中无伤喷洒枝条或将枝条基部刺伤，再喷洒孢子悬浮液，保湿17 h。另一种方法是将枝条基部刺伤塞入上述病原菌的菌丝，外部用塑料条捆扎保湿 15 d13。(2)采集经病原菌接种后表现发病症状的细枝，中枝和大枝，进行再分离鉴别。(3)将培养 15d 的病原菌制成每 160 倍视野中含有 50 60 个孢子的孢子悬浮液，每载玻片上滴2 滴，在室温下快速风干，放入相对湿度分别为100%、98%、93%、90%、86%、75%、65%、50%、35%、612023 Vol.55 No.1林业科技情报25%、10%、0%恒温保湿箱中，25 温度下，24 h 检查孢子萌发率，每个相对湿度重复 3 次45。(4)将上述同样方法制备的孢子悬浮液滴 2 滴于载玻片上，放入上、下铺有湿滤纸的培养皿中，置于 0 40 8 个梯度的温箱中，24 h 检查孢子萌发率，每温度重复 3 次。(5)采用 50%多菌灵可湿性粉剂，70%甲基托布津可湿性粉剂，50%退菌特可湿性粉剂和 75%百菌清可湿性粉剂，制成浓度为:1 500，1 1 000，11 500倍药液滴于载玻片上，再滴入上述制备的孢子悬浮液二滴，28 下保湿 24 h 后检查孢子萌芽率，每浓度三重复，每重复观察二个视野，对照为蒸馏水滴。(6)取在 PDA 培养基上培养 15 d 的病原菌配成每 160 倍视野 5060 个孢子的悬浮液，滴入灭菌的9 cm培养皿中，每皿 2 滴，倒入冷却至 30 左右的 PDA 培养基，待凝固后，在培养皿中央放入一个直径为 05 cm，沾有上述四种药剂和各浓度的滤纸碟一个，设对照为沾无菌水，28 下培养5 d 后检查抑制圈的大小，2结果与分析21枝条分离培养结果由表 1 可见，经过多次多地采样，进行不同部位的分离培养，枝条上的病菌以胶孢炭疽菌(Colletotri-chum gloeosporioides Penz)为明显的优势菌，细枝节处的分离得率为 917%，中枝上的分离得率为 916%，大枝上的分离得率为 665%，细枝枯芽的分离得率为 80%。表 1病竹枝条病原菌分离培养结果采样地点:安吉县树种:毛竹采样地点分离日期分离类型块数长菌情况长菌数其中;胶孢炭病菌交链孢菌节棱孢菌镰刀菌其它无菌缫舍村951016竹梢细枝节1001009343杭垓镇新塘村9625枯死竹细枝节121282296517竹梢细枯枝5756506196517竹梢细枝枯芽2626206递铺街道南北庄村97725嫩病竹细枝节17171797819嫩病竹细枝节13913912214397725嫩病竹中枝褐斑222221197819嫩病竹中枝褐斑1061069221297725嫩病竹大枝凹陷斑4847389197819嫩病竹大枝凹陷斑413524926竹种园97820嫩病竹 大枝全部细枝节929292天荒坪镇港口村9662枯竹梢细枝节53535219662枯竹梢中枝节323029129662枯大枝63633814119662枯大枝基部与秆交界处26251492196612枯竹梢中枝节575755296612枯大枝454529133将分离所得的胶孢炭疽菌进行人工接种，经过2 年多地的接种显示，胶孢炭疽菌可以侵染竹枝，造成细枝节间发黑，小枝，中枝紫褐色;大枝病斑及整枝枯死，产生与自然界相同的症状。特别是在每年5 月到 6 月初用孢子悬浮液无伤接种的症状表现更为明显。说明病菌产生附着孢能直接穿透寄主表皮侵入为害，详见表 2。22枝条接种病原菌再分离结果由表 3 可见，胶孢炭疽菌接种后表现症状的细枝、中枝和大枝，经再分离，长出胶孢炭疽菌的比例均很高，在 647%100%，平均为 883%，而对照的健康细枝分离长出的多为其它菌或无菌，胶孢炭疽71林业科技情报2023 Vol.55 No.1菌的比例仅为 43%，证实了胶孢炭疽菌能侵染毛竹枝条，造成毛竹枝条枯死的病原菌。表 2毛竹枝条人工接种试验结果接种日期接种地点接种方法检查日期胶孢炭疽菌接种枝条发病枝条病情对照(无菌水)感染指数接种枝条发病枝条病情感染指数96528港口刺伤塞入菌丝96749996663009666高坞岭刺伤喷孢子悬浮液967226333703009666高坞岭无伤喷孢子悬浮液96722431250030096820高坞岭摘叶喷孢子悬浮液97312125114186531643303339763杭垓高家冲无伤喷孢子悬浮液977151515519755500备注刺伤接种病情:仅伤口周围黑褐色，伤口周围黑褐色达 1/2 枝条以上，枝条枯死无伤接种病情:仅部分细枝节黑褐色，部分细枝枯死，细枝节黑褐色，中枝以上的枝条枯死表 3毛竹枝条人工接种病原菌再分离培养结果接种日期接种病原再分离日期分离类 型块数长菌情况长菌数其中胶孢炭疽菌占%交链孢菌占%其它菌占%无菌占%96528胶孢炭疽菌9675中枝基部褐变1111111009666胶孢炭疽菌96726枯细枝节3232288754125枯中枝节202020100枯大枝基部褐斑18181794415596820胶孢炭疽菌96912枯细枝节1391341077693221286536枯中枝节343422647720651479763胶孢炭疽菌971017细枝节112111104937763大枝病斑1818181009763CK无菌水971017健康对照细枝4635243817425543112423湿度对胶孢炭疽菌孢子萌发的影响表 4湿度对胶孢炭疽菌孢子萌发的影响相对湿度/%孢子萌发率/%相对湿度/%孢子萌发率/%相对湿度/%孢子萌发率/%1005268603509846750250938965010090050000由表 4 显示，胶孢炭疽菌在 100%、98%和 93%的相对湿度中可萌发，但在 93%相对湿度时萌发率比较低，仅为 89%，而在 90%以下的相对湿度中就不能萌发，说明胶孢炭疽菌孢子萌发需要较高的湿度。24温度对胶孢炭疽菌孢子萌发的影响由表 5 显示，胶孢炭疽菌孢子在 1035 均可以萌发，1525 区间萌发得比较好，尤以25 时的萌发情况最好，孢子萌发率最高。812023 Vol.55 No.1林业科技情报表 5温度对胶孢炭疽菌孢子萌发的影响温度/孢子萌发率/%温度/孢子萌发率/%温度/孢子萌发率/%402079435401028225820400157293055725四种药剂对胶孢炭疽菌分生孢子萌芽的抑制试验结果由表 6 可见，除多菌灵 11 500 倍液有 2%的少量孢子萌芽外，其余三种药剂均能完全抑制孢子的萌芽。26四种药剂对胶孢炭疽菌菌丝生长的抑制试验结果由表 7 可见，退菌特与百菌清的抑菌效果比甲基托布津和多菌灵好，退菌特又优于百菌清。3胶孢炭疽菌的形态胶 孢 炭 疽 菌(Colletotrichun gloeosporioidesPenz)，分生孢子单细胞，无色，园柱形，两端钝园，并各有一个油球，长 12520 um，宽 3860 um，萌发时产生近似菱形的附着孢，边缘整齐，分生孢子盘生于寄主表皮下，后外露，单生，直径 160220 um，无刚毛，在潮湿条件下，可产生淡粉红色胶质的分生孢子堆。表 6四种药剂对胶孢炭疽菌孢子萌芽的抑制试验结果孢萌药剂率/%浓度多菌灵甲基托布津百菌清退菌特1 500000011 000